四川淫羊藿化学成分研究和抑菌活性研究

四川淫羊藿化学成分研究和抑菌活性研究 北京化工大学 硕士学位论文 四川淫羊藿化学成分研究和抑菌活性研究 姓名:宋丽娜 申请学位级别:硕士 专业:制药工程 指导教师:喻长远 20090601摘要 四川淫羊藿化学成分和抑菌活性研究 摘要 /为小檗科 四淫羊藿 淫羊藿属植物,为常用中药,具有补肾阳, 强筋骨,祛风湿之功效。我国有多种淫羊藿属植物,资源丰富,占全球 总量一半以上,主要分布在四川、贵州、湖北和东北等地。现代药理实验 研究明,淫羊藿能增加心脑血管血流量,促进造血功能、免疫功能及骨代 谢,具有抗衰老、抗肿瘤等功效。 .柱色谱、 本文利用硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱、 反相分配柱色谱、硅胶薄层色谱、聚酰胺薄层色谱等手段,从四川淫羊藿 的叶子中分离得到个化合物,通过理化性质和波谱方法鉴定了个化 合物。分别为: , ,大豆苷元, ,宝藿苷..,, ,淫羊藿苷 , ,卜“, , .【..,对羟基苯甲酸 ,胡萝苷,,.谷甾醇一,。经系统查阅文 献,化合物和为未见报道的新化合物,分别命名 和, 化合物、、、.系首次从该植物中分离得到。 本实验对四川淫羊藿进行了抑菌活性的研究。对提取物淫羊藿苷、宝 藿苷.和乙酸乙脂萃取层的粗提液进行了初步抑菌实验的研究,研究表北京 化工大学硕士学位论文 明淫羊藿苷对于大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌具有很好的抑 菌效果,而对于黑曲霉和白色念珠菌抑菌效果不明显。宝藿苷.和乙酸 乙脂萃取层的粗提液也具有一定的抑菌效果。其进一步的最小抑菌浓度和 抑菌机理还有待进一步的研究。 , 关键词:四川淫羊藿,黄酮, ,抑菌活性脚,【 刀??邑、:,, ,. ,, . , ,? . %, 一 ,, . , , ,, ,,?. ,‘ ,, ,. ?北京化工大学硕士学位论文 、、、一. ..,?, ., ,, .?. . 。 ,, , , 北京化工大学位论文原创性声明 本人郑重声明: 所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立 进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不含 任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重 要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声 明的法律结果由本人承担。 日期: 作者签名:。籀脚 幽。‘: 关于论文使用授权的说明 学位论文作者完全了解北京化工大学有关保留和使用学位论文的规 定,即:研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属北京化工大 学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允 许学位论文被查阅和借阅;学校可以公布学位论文的全部或部分内容,可 以允许采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。 保密论文注释:本学位论文属于保密范围,在竹解密后适用本授 权。非保密论文注释:本学位论文不属于保密范围,适用本授权书。 作者签名: 日期:坳:&: 导师签名: 隗习且第一章绪论 第一章绪论 .淫羊藿本草资源考证 淫羊藿最早记载于《神农本草经》【】,列为中品。是我国传统中草药中使用 最为 悠久的中药之一。 历代本草对其功效记载的有:《神农本草经》云:“淫羊藿味辛寒,无毒,主阴痰 绝伤,茎中痛,利小便,益气力,强志。’’《别医名录》【】记载:“淫羊藿生上郡阳山山 谷,四川北部有淫羊,一日百遍谷,盖食此藿所致,故名淫羊藿。 记载其形态的有:唐?《新修本草》【】记述其:“所在皆有,叶形似小豆而圆薄,茎 细亦坚,俗名仙灵脾是也。宋?《图经本草》【】记载更详细,日:“??今江东、陕西、 泰山、汉中、湖湘间皆有之。茎如栗杆,叶青似杏,叶上有刺,根紫色有须,四月开 花,白色,亦有紫色者,碎小独头子。五月采叶晒干。湖湘出者,叶如小豆,枝茎紧 细,终冬不凋,根似黄连,关中呼为三枝九叶草,苗高一二尺许,根叶俱堪用。’’宋?《证 类本草》【记载同宋?《图经本草》,但有“永康军淫羊藿’’,“沂州军淫羊藿’’的附图。 明?《救荒本草》【】记载为“苗高二尺许,叶似小豆,枝茎紧细,叶似杏叶,颇长,近 蒂皆有一缺,又似绿豆叶,亦长而光,梢间开花,白色,亦有紫色,作碎小独头子, 根紫色有须,形似黄连。明?《本草纲目》【】记载为:“豆叶如茬,此叶似之,故亦名 藿,生大山中。一根数茎,茎粗如线,高一二尺。一茎三娅,一娅三叶,叶长二三寸, 如杏叶及豆藿,面光背淡,甚薄而细齿,有微刺。初春生苗,至三四月开花。性温不 寒,能益精气,乃手足阳明、三焦、命门药也,真阳不足者宜之。 记载其产地的有:清?《植物名实图考》【】记载:“??盖此草为治腰郊之要药。 密县山中有之:滇大理府亦产,不止汉中诸郡,郑车而载,等。 淫羊藿又名刚前《神农本草经》、仙灵脾《雷公炮制论》、放杖草、千量金、 黄联祖《日华子本草》、三枝九叶草《本草图经》、牛角花、铁打柞贵州、三 叉骨湖南。 .淫羊藿属植物种类和地理分布 我国是淫羊藿属药用植物的分布中心,有淫羊藿属植物多种,其中新近发表的 种类大多数分布比较局限,有些仅见于发表的模式产地【。 郭宝林等以此为基础对中药淫羊藿属植物主要种类进行评述,编制了淫羊藿属植 物种药材形态分种检索表,并依据中国淫羊藿属植物主要种类分布特点、资源量和北京化工大学硕士学位论文 种类混杂情况将全国分为北区、西北华北区、华东华南区和西南区个产区。其中北 区仅有朝鲜淫羊藿一种,质量最好;西北华北区主要是淫羊藿饭 , 成分含量比较稳定;华东华南区主要为箭叶淫羊藿,但种内质量差异很大;贵州省主 流品种为粗毛淫羊藿,其次为黔岭淫羊藿,再其次为巫山淫羊藿,其中黔岭淫羊藿不 可药用;在四川省,主流品种为粗毛淫羊藿和柔毛淫羊型酊。 徐艳琴等【】对朝鲜淫羊藿、心叶淫羊藿、箭叶淫羊藿种重要的药用淫羊藿的分布、 形态特征和资源现状进行调查发现:朝鲜淫羊藿分布于中国东北部,主要沿长白山 脉分布,长期的过度采收使野生资源遭到严重破坏,保护工作迫在眉睫;心叶淫羊 藿分布于西北各省以及山西、河南等省,野生资源丰富,但目前开发利用较少; 箭叶淫羊藿广泛分布于华东、华南各省区,但野生资源蕴藏量并不丰富,且不同分布 区形态变异较大,物种鉴定尚存诸多疑问。 何顺志、徐文芬等采用资源调查和文献考证方法,通过分类学研究,确认中国淫 羊藿共有种,其中小花类群有种,主要分布于贵州种、四川种、湖北种、 陕西种、湖南种、重庆种;大花类群种,其中四川种、湖北种、贵州 种、湖南种、广西种、重庆种、云南种,江西、陕西、吉林、辽宁、黑龙江 各有 种。同时,不断有发现淫羊藿属植物新种的报道。何顺志等年在贵州德江发现 & .【,郭宝林等年报道了拟巫山淫 了新种德务淫羊藿 羊藿 ..和青城山淫羊藿隰 ..&..两个新种??。 .淫羊藿的药材质量控制 淫羊藿属植物药材质量控制,目前大多局限于检测淫羊藿苷。郭宝林等【】 建议今后有关淫羊藿属植物的质量控制应综合考察淫羊藿苷、朝藿定和朝藿定及总 黄酮的含量,以便更客观地反映淫羊藿属药材的内在质量。 受气候、生态环境等因素的影响,不同产地、不同种类、不同采收期、不同部位 其淫羊藿总黄酮和淫羊藿苷的含量均有较大变化。近十年来,许多研究者对淫羊藿属 中药材的效用在种间或产地间的差异给予了关注,并开展了系列种间或产地间淫羊藿 属植物总黄酮含量和有效成分含量的比较研究【?,结果表明不同产地或不同物种的 总黄酮含量以及有效成分含量存在较大差异,在药用淫羊藿植物种类中,由 于不同研 究者所用样品来源不同,出现时高时低,缺乏可比性,认为淫羊藿种类间与产地间的 差异形成了淫羊藿药材的“道地”性,影响着我国药材进入国际主流市场。 年,裴利宽等【】采用,测定份不同产地的药典中规定的淫羊藿、 箭叶淫羊藿、柔毛淫羊藿、朝鲜淫羊藿、巫山淫羊藿、粗毛淫羊藿、天平山淫羊藿、 第一章绪论 黔岭淫羊藿个主要资源种类的种淫羊藿药材样本的淫羊藿苷、总黄酮含量和以淫羊 藿苷为参照的朝藿定、、和淫羊藿苷种成分的总量,发现以药典个品种样品计, 仅约有%的样本淫羊藿苷含量达到药典标准,并以此为基础提出以淫羊藿多苷的总 量不低于.%、总黄酮含量不低于.%作为淫羊藿药材质量控制指标,并对各品种 进行了质量评价。年,裴利宽等展开了淫羊藿药材一些混淆物种的鉴别研究, 发现根据不同物种淫羊藿药材红外光谱特征差异可以实现常见易混淆物种的快速鉴 别【。 .淫羊藿属植物化学成分研究 淫羊藿属植物的化学研究始于年,日本学者赤井左一郎等首先从箭叶淫羊 ,从根、根茎中 霍和日本淫羊藿的叶中分得淫羊藿苷和淫羊藿 分得。后来,日本学者德刚康雄等对长距淫羊藿.继续研究, 外,还从根中分得新化合物 除从中分得淫羊藿苷和淫羊藿 ?。迄今为止,国内外学者已经分得了各类成分多种,主要为含 有异戊烯基取代的黄酮类化合物。包括淫羊藿苷、宝藿苷.、宝藿苷一、宝藿苷.?、 宝藿苷.、淫羊藿次苷.、淫羊藿定、脱水淫羊藿素、去甲基脱水淫羊藿素、大花 、淫羊藿次苷、箭藿苷、 淫羊藿苷、朝藿定、大花淫羊藿苷、 大花淫羊藿苷【】等。除黄酮类成分外,尚含有木脂素类,多糖,生物碱,酚苷类, 紫罗酮类,苯乙醇苷类和微量元素等。 近几年来,人们又分别对粗毛淫羊霍、茂汉淫羊藿、心叶淫羊霍、箭叶淫羊藿、 川鄂淫羊藿、朝鲜淫羊藿、万山淫羊藿、黔岭淫羊藿和偏斜淫羊藿等进行了较深入细 致的研究,陆续报道了不少新成分。此外,人们还首次从该属植物中分离获得了胡萝 卜苷、齐墩果酸、对羟基苯甲酸、,二羟基苯甲酸、异甘草素、甘草素、黄 茂苷、 山奈素、山奈素..双鼠李糖、木犀草素、大黄素、麦牙酚、金丝桃苷、肌醇、三十三 烷烃、,.二羟基何柏烷、木兰碱和.羟基..甲基.吡喃酮等。 以下是近年来淫羊藿中化学成分的研究近况。 ..黄酮类化合物 淫羊藿中的黄酮类化合物主要为具有.异戊烯基的黄酮醇类及一般结构的黄酮 醇苷类,此外还有查耳酮、黄烷酮和具异戊烯基取代的黄酮醇类,近年来又陆续有一 些新结构的化合物被发现,其主要结构的母核如图.,从不同品种中分得的黄酮类 化合物如下: 北京化工大学硕士学位论文 类型 类型 类型 类型 类型 类型 。类型 类型 图.黄酮类化合物的结构母核. ,.卵朋“埘全草进行化学成分研列 ,分离得到个黄 从心叶淫羊藿印拥历“ 酮类化合物,分别为:,,’三羟基黄酮?一也一鼠李糖苷、宝藿苷 、 宝藿苷 、淫羊藿苷 、淫羊藿苷和淫羊藿苷 。 从朝鲜淫羊藿地上部分分得宝藿苷., 淫羊藿次苷.,淫羊藿定,淫羊藿苷,金 , 丝桃苷,脱水淫羊藿素, 去甲基脱水淫羊藿素, 第一章绪论 , .四羟基..异戊烯基? ..吡喃 ,,, 葡萄糖苷,一异戊烯基山奈酚一,银杏双黄酮,异银杏双 黄酮和去甲银杏双黄酮,其中,双黄酮在淫羊藿属植物中较为 。 罕见,值得进一步研究【 从粗毛淫羊藿的根中分得种一异戊烯基黄酮类化合物【】,分别为大花淫羊 藿苷 、”.鼠李糖 、”.鼠李糖基淫羊藿次苷.. 、二 基大花淫羊藿苷”... 、大花淫羊藿苷 、大花淫羊藿苷 、朝藿定 、 叶淫羊藿苷 。 从黔岭淫羊藿地上部分中分得箭藿苷、,.二羟基.’.甲氧基. 异戊烯基黄酮? .吡喃葡萄糖基..【.吡喃鼠李糖苷、淫羊藿次苷 、.。 从淫羊藿地上部分分得一种新的黄酮苷,, ’”一。 ..生物碱类化合物 从朝鲜淫羊藿中发现了一种新的生物碱,命名为淫羊藿碱:一羟基一,一二甲 氧基一,一二甲基一,一二氧一,,,一四氢一一氧杂一一氮翁一苯并菲,另一 种 生物碱一木兰花碱也从淫羊藿中分离得到阎。 ..酚苷类化合物 从朝鲜淫羊蕾中发现了种酚苷类成分,分别为淫羊藿次苷、一羟基一,,, .四甲氧基一,一二氢化菲、朝藿菲苷 【。 ..色酮类化合物 从朝鲜淫羊藿中发现个色酮类成分:,一二羟基一一对羟基一苯氧基一一异 戊 烯基色酮,从箭叶淫羊藿中发现个色酮类成分:一脱甲基一一甲基色原酮、一 脱甲基 一.甲基一一异戊烯基色原酮、一脱甲基一一异戊烯基色原酮【。 ..其它化合物 此外,还从淫羊藿属植物中分得胡萝卜苷、齐墩果酸、对羟基苯甲酸、,. 北京化工大学硕士学位论文 羟基苯甲酸、异甘草素、甘草素、黄茂苷、山奈素、山奈素双鼠李糖、木犀草素、 大黄素、麦牙酚、肌醇、三十三烷烃、,一二羟基何柏烷‘、和一羟基一一甲基一 吡喃酮等。 .淫羊藿的药理作用 现代药理实验研究表明,淫羊藿能增加心脑血管血流量,促进造血功能、免疫功能 及骨代谢,具有抗衰老、抗肿瘤等药理活性。 ..对心血管及循环系统的作用 近年来淫羊藿影响血流动力学的研究值得关注。岳攀等【】的研究表明淫羊藿提取 物能降低麻醉犬总外周血管阻力和左室舒张末期压,增加冠状动脉血流量、心输出量、 每搏输出量、心肌收缩参数、心肌舒张参数、心指数和心搏指数,即淫羊藿提取物能 改善麻醉犬血流动力学。毕可红等【】还从分子水平研究证实了淫羊藿苷促进骨 髓.集落形成,提高小鼠的造血功能。淫羊藿苷可诱导机体产生.、、 等,作用于骨髓多能干细胞,促使血细胞增殖、分化、成熟,对机体造血功能有重要 作用。淫羊藿对心血管系统有很好的保护作用。 ..对生殖系统的作用 淫羊藿作为常用的补肾壮阳中药,熊跃斌等【】人通过在体幼年小鼠及离体培养的 大鼠睾丸间质细胞研究了淫羊藿苷对雄性生殖内分泌的影响,发现淫羊藿苷能使小鼠 附睾及精囊腺增重,提示这可能与淫羊藿的壮阳作用有关。体外实验表明,淫羊藿苷 能明显促进大鼠间质细胞基础分泌,这为淫羊藿用于水平低下的男性不育症的治 疗提供了实验依据。许青嫒等【】人研究发现,淫羊藿对糖皮质激素所致“阳虚证’’有 明显的改善,各项指标恢复较快。用放射免疫法测定性激素水平的结果提示氢考所致 “肾阳虚”模型睾丸酮及雌二醇的水平均明显降低,而淫羊藿可以改善雄性动物性腺 的损害,提高睾丸酮的含量,雌二醇水平有所增加,但对黄体生成素水平降低不显著, 提示淫羊藿对垂体一性腺系统的功能具有促进作用。 ..抗衰老的作用 从基因层面上看,以促凋亡基因表达上调、抗凋亡基因表达下调为主要特征的表 达模式是衰老免疫稳态失衡的重要基因背景。陈瑜等‘’的研究表明淫羊藿总黄酮的作 第一章绪论 用规律在于逆转功能对立的促凋亡基因与抗凋亡基因、促增殖基因与抗增殖基因在衰 老淋巴细胞中表达的异常,重塑基因表达的良性平衡,重建衰老免疫稳态,从而达到 抗衰老的目的。从生化角度看,淫羊藿中的有效成分毙显提高动物血液及其 组织中超氧化酶歧化物,谷胱苷过氧化物.的活性;并能明显降低老龄 动物血清及肝组织中过氧化脂质的含量,使老龄动物心肌中脂褐质含量降低, 从而具有抗氧化延缓衰老的作用。 ..抗炎作用 张逸凡等【】的研究表明:淫羊藿总黄酮对巴豆油所致小鼠耳肿胀、醋酸所致小鼠 腹腔毛细血管通透性增加、角叉菜胶所致大鼠足肿胀及巴豆油所致肉芽组织增生具有 显著抑制作用,对佐剂关节炎大鼠的原发性足肿胀和继发性,足肿胀均有显著抑制作 用。刘铁汉等【 】利用放射免疫测方法研究淫羊藿苷及其肠菌代谢产物宝藿苷 和淫羊藿苷元对炎症性细胞因子的作用,发现在不同的实验条件下,淫羊藿 苷及其肠 菌代谢产物对各种炎症性细胞因子、.、.、等均有特异的抑制作用。 初步机理研究表明:淫羊藿总黄酮能显著降低炎症渗出物中前列腺素和丙二醛的含 量,提高小鼠红细胞过氧化氢酶的活力。对去除肾上腺小鼠耳肿胀仍然有抑制作用, 对大鼠肾上腺重量和肾上腺内维生素含量无明显影响。 ..抗肿瘤作用 近年研究表明,恶性肿瘤是与细胞凋亡调节紊乱、细胞增殖分化与凋亡平衡失调、 细胞增殖率高于凋亡率有关的疾病。肿瘤的发生、发展、转移、血管生成、耐药性和 预后等都与细胞凋亡有一定的关系。李贵新等【】的研究表明淫羊藿在体外诱导. 细胞凋亡,呈典型的细胞凋亡形态学和生化特征,并具有时间剂量依赖性。淫羊藿诱 导肿瘤细胞凋亡的同时,还能下调相关基因.和基因和蛋白表达水平。 淫羊藿还能显著抑制.细胞端粒酶活性,且端粒酶活性下降与细胞表面粒细胞分 化抗原 表达率呈负相关。 . ..对骨髓系统的作用 李青南等应用去睾丸方法,用雄性去势大鼠建立“肾虚症,通过骨代谢和骨组 织形态学等指标,系统地观察了淫羊藿对骨生物学的影响,证明了淫羊藿具有抑制骨 细胞功能,特别是使钙化骨形成增加,证实了淫羊藿确实存在着“补骨作用,说明 该药对骨质疏松有良好的防治作用【】。 北京化工大学硕士学位论文 现代研究表明长期应用肾上腺皮质激素可引起骨质疏松,其原因主要是由于其抑 制了肠钙的吸收和其本身负氮平衡,使蛋白质分解加速,骨基质合成减少所致。有许 多研究者初步探讨了淫羊藿的提取液,以及含有淫羊藿组成的复方制剂对长期应用肾 上腺皮质激素.醋酸泼尼松所致的不良反应的对抗作用。结果表明:大鼠服药个月后, 出现了非常显著的骨质疏松症和肾上腺皮质萎缩,但同时给予淫羊藿提取液治疗大鼠 不但其肾上腺萎缩受到抑制,还有显著促进骨形成的作用,骨小梁面积、密度均和对 照组相似,甚至还有超过对照组的趋势。 ..对免疫系统的作用 对免疫器官的影响淫羊藿多糖../使胸腺缩小【删,使胸腺.掺入 增加,白介素..合成增多,胸腺内和细胞数目减少,且高剂量显著 促进标记细胞的释放,而淫羊藿苷无显著变化【,但其可使胸腺细胞刺激刀豆球蛋 白认的反应来激活胸腺免疫作用【,还可使环磷酰胺所致免疫低下小鼠及荷瘤 鼠脾指数升高【】。淫羊藿苷明显增加正常小鼠脾脏重量,促进抗原激活的淋巴 细胞增殖,明显提高脾脏抗体生成水平,使小鼠脾脏溶血斑形成数明显增加。 淫羊藿总黄酮对大剂量氢化考的松和羟基脲所致免疫功能低下模型小鼠能显著增强 胸腺和脾脏指数,增加胸腺和脾器官的重量?】。淫羊藿黄酮和多糖制成的复合脂质体 可显著对抗“阳虚”模型动物体重、脾重的降低,提高种动物的.受体花环和 .花环率,改善其调节因子的活性,增强淋巴细胞的免疫活性【。 淫羊藿提取物可改善/肾切除慢性肾功能衰竭大鼠细胞免疫功能,并降低大鼠的 死亡率【删。对/肾切除慢性肾衰的大鼠模型具有免疫调节作用,能明显减轻其肾组 织学改变和减少细胞外基质产生【不。 对巨噬细胞的作用淫羊藿、及均可提高小鼠咖吞噬能力,其 中可增强脾脏淋巴细胞对免疫小鼠的发细胞毒作用【,对巨噬细胞和淋 巴细胞免疫功能具有增强作用【。可增强氢化考的松和羟基脲所致免疫功能低下 模型小鼠炭廓清指数,显著拮抗环磷酰胺所致小鼠血清溶血素抗体的生成水 平,降低 迟发型超敏反应强度,且证明免疫调节作用与其对/比值的调节作用有关【, 可显著增加小鼠纤溶活性【,与细胞酯多糖“/协同作用能促进.、 产生,有明显激活巨噬细胞的作用。 对、细胞的影响研究表明,对小鼠胸腺细胞有促进.掺入作用, 促进、细胞增殖,具有丝分裂原样作用【,可促进腹腔内超适剂量免疫诱导 的细胞产生,而对细胞的产生有减弱作用【】。淫羊藿总黄酮对人体细胞免 疫和细胞免疫功能均有明显的增强作用,其与个补肾复方都能够降低细胞凋 亡率, 并对促凋亡及抗凋亡基因群进行适度的调整【。柔毛淫羊藿甲醇提取液可抑 制淋巴细第一章绪论 胞转化,在体外可强烈抑制小鼠淋巴细胞对刀豆蛋、脂多糖的增殖反 应和混合淋巴细胞的反应,延长种系新生鼠心脏移植的存活率【】。 第二章四川淫羊藿化学成分的研究 第二章匹 淫羊藿化学成分的研究 .实验材料 ..实验药材 四川淫羊藿于年月购于河北省,由北京化工大学生命科学与技术学院喻 。 长远教授鉴定为 ..实验试剂 实验中使用的试剂和药品见表.所示。 表.实验试剂和药品药品名称 药品来源 级别或规格 三氯甲烷 北京化工厂 分析纯 乙酸乙脂 北京化工厂 分析纯 石油醚? 北京化工厂 分析纯 正丁醇 北京化工厂 分析纯 甲醇 北京化工厂 分析纯 无水乙醇 北京化工厂 分析纯 硫酸 北京化工厂 分析纯 无水硫酸钠 北京化工厂 化学纯 无水三氯化铝 北京恒边达化工厂 分析纯 工业酒精 北京华伟业食品添加剂有限公司 分析纯 羧甲基纤维素钠盐 中国医药集团上海化学试剂公司 化学纯 柱层层析硅胶 青岛海洋化工有限公司 .,.目 薄层层析硅胶 青岛海洋化工有限公司 化学纯 聚酰胺薄膜 锄 江省台州市路桥四甲生化塑料厂 柱色谱聚酰胺 江省台州市路桥四甲生化塑料厂 硅胶 .日本 .一 羟丙酰基交联葡聚. 公司 糖凝胶 瑞典 ????????????????北京化工大学硕士学位论文 ..实验仪器 实验中所使用的仪器见表.. 表实验仪器 .四川淫羊藿的提取 四川淫羊藿化学成分中主要的成分是黄酮类化合物,其含量也较高。淫羊藿化学 成分的提取过程分两个部分:一是乙醇加热回流提取;二是溶剂萃取。溶剂萃取按照 极性从小到大的顺序,依次使用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇。乙醇提取液和每 一种溶剂萃取部分均须蒸干溶剂、挥干水分,制成浸膏。 ...乙醇加热回流提取 圆底烧瓶中。量取约 % 每次称取约 的淫羊藿药材,加入 乙醇,加热回流提取 。回流结束后用布氏漏斗趁热抽滤,收集滤液。滤渣再用% 乙醇约 回流. 。回流结束后趁热抽滤,收集滤液,弃去滤渣。 每次药材加入量和回流乙醇的体积根据实际情况调节,以保证药材与乙醇充分接 触、充分回流。 合并两次滤液,用旋转蒸发仪减压真空度... ,水浴温度?蒸 第二章四川淫羊藿化学成分的研究 至不再有馏出液体为止,合并浓缩液晾干至无醇味,得浸膏。 ..溶剂萃取 乙醇回流提取中获得的半流体状浸膏经水稀释后,分装在四个 试剂瓶中, 作为溶剂萃取中的水相。分别用等体积的石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取。 经充分振摇后静置 分层,每种溶剂萃取三次。吸取有机层蒸馏并回收有机溶剂, 制得不同溶剂萃取的浸膏。 石油醚萃取脱脂:首先向四瓶浸膏水溶液中,分别加入等体积石油醚约 充分振荡后,静置左右。待完全分层后,再次振摇至混浊后,再静置待分层。 分层后用胶管和洗耳球吸取上层有机相。在?下用普通蒸馏装置蒸馏回收石油醚, 残留溶液在?下减压蒸馏至粘稠液体。重复萃取三次。 氯仿萃取并制备萃取浸膏:石油醚萃取完毕后,按同样方法用氯仿进行萃取。 分层后吸取下层氯仿,在?下普通蒸馏蒸干并回收氯仿,残留溶液在?下减压 蒸馏至粘稠液体。残液自然挥干至半固体状,获得氯仿提取物浸膏。 乙酸乙酯萃取并制备萃取浸膏:按上述同样方法用乙酸乙酯进行萃取。分层 后吸取上层乙酸乙酯,在?下普通蒸馏蒸干并回收乙酸乙酯,残留溶液在?下 减压蒸馏至粘稠液体。残液自然挥干至半固体状,获得乙酸乙酯提取物浸膏。 正丁醇萃取并制各萃取浸膏:按上述同样方法用正丁醇进行萃取。分层后吸 取上层有机相,使用普通蒸馏装置抽真空在?下,旋转蒸发仪真空度... 在?下减压蒸馏。蒸馏时向正丁醇溶液中加入一定量的水做挟带剂。蒸馏 回收的正丁醇和水静止分层后,用分液漏斗分出有机相;残留粘稠溶液自然挥干至半 固体状,获得正丁醇提取物浸膏。 ..萃取结果与讨论 萃取所得浸膏质量 四种溶剂萃取得到的浸膏质量和主要萃取物质如下: 石油醚萃取是为了除去叶绿素、胡萝卜素等脂溶性色素。 用三氯甲烷萃取得到游离生物碱、有机酸等,挥发溶剂得浸膏. 。 用乙酸乙酯萃取得到黄酮类、苷元等物质,挥发溶剂得浸膏. 。 用正丁醇萃取得到苷类、生物碱盐、鞣质、蛋白质、多糖等物质,挥发溶剂得浸膏 . 。 萃取过程中现象分析 ?石油醚萃取时,应萃取至无色,以避免叶绿素等及脂溶性成分干扰以后的分离 北京化工大学硕士学位论文 及纯化。 ?在溶剂萃取过程中多次遇到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇三种溶剂有机相与水相 乳化的现象。尤其是石油醚,一旦发生乳化十分稳定,静置数天不分层,严重影响了 实验进度。 实验中摸索出了一些避免和破除乳化的方法: 一萃取时振摇太过剧烈容易造成乳化,而振摇不充分又影响萃取效果。宜颠倒 大瓶三次静置待完全分层后,再颠倒三次,待其静置分层即可。 三乳化产生后,将大瓶置于?水浴中充分加热后,超声处理 。如此反 复两到三次可基本破除乳化。乙酸乙酯和正丁醇与水相的乳化层不稳定,只需轻轻旋 转振荡大瓶,使有机相和水相界面产生波动,然后静置待其分层。如此反复几次,也 可破除乳化。 溶剂蒸馏回收条件选择 石油醚沸程在?到?之间,常压下?蒸馏能蒸发回收大部分溶剂,但 仍有少量高沸点溶剂无法蒸发,采用?下减压蒸馏完全回收石油醚。氯仿和乙酸 乙酯也采用类似的先高温常压后低温减压的方法蒸馏。 正丁醇正常沸点为.?,常压下无法蒸馏,减压后水浴温度达到?才有 极少量正丁醇蒸发,即使使用旋转蒸发仪也要求水浴温度达到?以上。高温下淫 羊藿化学成分易被破坏,因此实验上均不可取。本实验中采用水作为挟带剂 正丁醇 与水体积比约为:,以提高蒸馏速度。 ..小结 干燥淫羊藿药材. ,用%醇加热回流两次,回收乙醇得浸膏,将浸膏溶 于适量水中,依次按极性大小用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取,分 别回收溶剂,得三氯甲烷萃取物. ,乙酸乙酯萃取物. ,正丁醇萃取物. 。其中,乙酸乙脂部分主要含有黄酮类物质,是本实验研究的重点。 .四川淫羊藿的分离 乙酸乙脂层是本实验研究的重点,但是此层中除含有黄酮类物质外,还含有其它 类物质。必须通过分离纯化才能得到纯净物,才能进行结构鉴定和进一步的研究。本 实验通过一些色谱的分离手段,从而得到纯化合物。 色谱分离法是中药化学成分分离中最常应用的分离法,其最大的优点在于分离效 能高、快速简便。通过选用不同分离原理、不同操作方式、不同色谱材料或将各种色 谱组合应用,可达到对各类型中药成分的分离和精制,亦可用于化合物的鉴定。常见 第二章四川淫羊藿化学成分的研究 的色谱分离方法主要有吸附、凝胶过滤、离子交换、大孔树脂、分配色谱等。 本实验中用到的分离色谱主要有硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱、葡聚糖凝胶柱色谱 和分配色谱。硅胶吸附色谱主要是利用硅胶对被分离化合物分子的吸附能力差异而实 现的分离。聚酰胺柱色谱的分离机理,~般认为是“氢键吸附”,其对各种黄酮类化 .羟丙 合物都有较好的分离效果,且容量比较大,适用于制备性分离。 酰基交联葡聚糖凝胶色谱按照分子体积大小,根据不同分子在凝胶颗粒上的孔洞和颗 粒之间的停留情况不同起到分离效果。反相分配色谱按照分子极性,通过不同分 子在硅胶载体上十八烷基硅烷固定相与流动相之间的分配系数不同起到分离效果。 黄酮类化学成分乙酸乙脂层萃取物分离过程实验流程见图.: 乙酸乙脂萃取物 硅胶柱色谱氯仿一甲醇梯度洗脱 , 飞 ... 薄层色谱检识后合并 厂???厂???丁 上 上嚣是鎏鋈 慝 匦翻 .. 辫 吣龇 团 . 障徽度 检识?%一% 竿 毒薄层检识 毒 毒 上薄层色谱检识 毒 匾习叵固 北京化工大学硕士学位论文 ..硅胶柱色谱 上样硅胶的制备 . 的乙酸乙脂萃取物浸膏,置于烧杯中用少量甲醇溶解,甲醇的用量越少越 好。另称取柱层层析硅胶.目. ,一般为样品量的.倍,加入到浸膏的 甲醇溶液中,充分搅拌,混合均匀。放置待其自然挥干甲醇,成为粉末、块状固体后, 置于研钵中研成细粉。 硅胶柱的装填 本实验中硅胶柱的装填都采用湿法上柱。 上样 空跑硅胶柱后,向上方添加氯仿使溶剂层达到一定的高度。将制得的浸膏上样硅 胶粉末缓缓加入溶剂层中,静置使之逐渐沉降累积于硅胶层的上表面,形成一层颜色 较深的上样硅胶层。 硅胶层析柱的浓度梯度洗脱 打开螺旋夹,先用纯氯仿做为流动相对层析柱进行洗脱,直到色带前缘到达靠近 管口的棉花处,开始用 锥形瓶接收洗脱液。待氯仿洗脱液的颜色较淡且基本不 变时,依次换用氯仿甲醇体积比从大的混合溶液进行洗脱。每一种体积比例的流 动相都须洗脱至接收的洗脱液颜色较淡且不再变化时,再更换下一种比例的流动相。 硅胶柱色谱实验数据 硅胶柱色谱的实验数据见表.。 表.硅胶柱色谱数据 第二章四川淫羊藿化学成分的研究 注:洗脱剂氯仿与甲醇的比例:时,洗脱液的颜色由褐色一墨绿一黄一浅黄。 洗脱剂氯仿与甲醇的比例:时,洗脱液的颜色由黄一深黄一亮黄。 洗脱剂的极性已逐步增加,但跳跃不能太大。 ..薄层色谱检识 薄层色谱又叫薄层层析,是色谱法中的一种,是快速分离和定性分析少量物质的 一种很重要的实验技术,属固一液吸附色谱,它兼备了柱色谱和纸色谱的优点。本实 验中用到的薄层色谱主要有硅胶薄层色谱和聚酰胺薄层色谱。 薄层色谱是在洗涤干净的玻璃板上均匀的涂一层吸附剂或支持剂,待干燥、活化 后将样品溶液用管口平整的毛细管滴加于离薄层板~端约锄处的起点线上,?干 或吹干后置薄层板于盛有展开剂的展开槽内,浸入深度为. 。待展开剂前沿离顶 端约锄附近时,将色谱板取出,干燥后喷以显色剂,或在紫外灯下显色。 一硅胶薄层色谱 薄层板的制备 ?羧甲基纤维素钠溶液的制备:向 去离子水中加入? 羧甲基纤维 素钠,将上述混合物置于加热套中煮沸 ,并不断搅拌。然后用棉花过滤,滤去剩 余不溶的羧甲基纤维素钠盐,制得羧甲基纤维素钠溶液,用作薄层色谱板的粘合剂。 ?称取适量的薄层色谱硅胶置于研钵中,再量取一定量体积的羧甲基纤维素钠溶 液每 硅胶加入 溶液。然后充分搅拌研磨,最后置于超声波清洗仪中超 声,以除去气泡。 ?将载玻片置于平台上,用药匙舀取糊状硅臆均匀地铺在载玻片表面。铺板时, 要注意不要引入小气泡。如有需要,可以用手托住玻璃板,有节奏的颠簸,使得糊状 硅胶分布匀称。尤其是载板的四个角,容易高出玻璃板其他部位,所以要格外注意。 颠好的板,表面看上去要光滑平整,没有气孔。薄层板铺好后一定要放置在平的台面 上,否则难保证板面硅胶的厚度均匀。 点样 用毛细管点于薄层板上,一般为圆点,点样基线距底边 左右,样点直径为 . 。点间距离约为. ,点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点 样时必须注意勿损伤薄层表面。 薄层层析点样方法应注意以下几点:样品最好用具挥发性的有机溶剂如乙 醇、氯仿等溶解,不应用水溶液,因水分子与吸附剂的相互作用力较弱,当它 占据 了吸附剂表面上的活性位置时,就使吸附剂的活性降低,而使斑点扩散。点样 北京化工大学硕士学位论文 量不宜太多,否则会降低值,一般为几到几十。原点直径要控制在 以内。欲达此目的,就须分次点样,边点样,边用冷、热风交替吹干。薄层板 在空气中不能放置太久,否则会因吸潮降低活性。 展开 将点好样品的薄层板放人展开缸中,浸入展开剂的深度为距薄层板底边的 ... 切勿将样点浸入展开剂中。密封室盖,待展开至规定的距离一般为. ,取出薄层板,晾干。 检识 将展开后的薄层板置于三用紫外分析仪 或 波长下观察并记录各暗 斑和荧光点的分布情况。再用%的硫酸乙醇溶液作为显色剂,喷洒于板上,用 热风 吹干或适当加热。观察并记录显色后的斑点情况。对比显色前和显色后板的 分布情况, 确定洗脱组分的变化规律。 二聚酰胺薄层色谱 聚酸胺薄膜是将聚酰胺作为涂料,涂布在涤纶片基上形成一层质地均匀紧密的多 孔薄膜。层析展层时,溶剂沿着细孔上升。其原理是与被分离物质之间形成氢键,其 氢键能力的强弱,确定吸附能力的差异。因此,在选择适当溶剂展开时使混合物达到 分离。此法具有分辨力强、灵敏度高、分离速度快、操作方便等优点。 聚酰胺薄膜适宜检识各类型含游离酚羟基的游离黄酮和苷,其色谱行为规律如下: 黄酮类化合物分子中能形成氢键的基团数目,即酚羟基数目越多,则吸附力越强, 在色谱柱上越难以洗脱。当分子中酚羟基数目相同时,酚羟基的位置对吸附也有 影响,如所处位置易于形成分子内氢键,则与聚酰胺的吸附力减小,易被洗脱下来。 分子内芳香化程度越高,共轭双键越多,则吸附力越强。不同类型黄酮类被 吸附的强弱顺序为:黄酮醇黄酮二氢黄酮异黄酮。游离黄酮与黄酮苷的分离 如以含水移动相作洗脱相剂如甲醇一水,则黄酮苷比游离黄酮先洗脱下来,且洗脱 的先后顺序一般是:三糖苷双糖苷单糖苷游离黄酮;若以有机溶剂作为洗脱 剂如 氯仿一甲醇,结果则相反,游离黄酮比苷先洗脱下来。洗脱溶剂的影响,聚酰 胺与各类化合物在水中形成氢键的能力最强,在有机溶剂中较弱,在碱性溶剂中最弱。 因此,各种溶剂在聚酰胺柱上的洗脱能力由弱至强的顺序为:水甲醇或乙醇浓度 由低倒高丙酮稀氢氧化钠水溶液或氨水甲酰胺甲基甲酰胺尿素水溶液。 薄层板的剪裁 本实验中使用的聚酰胺薄膜是购买现成的,不需要自己制备。其规格为 , 和 使用前应该裁剪成所需要的规格。实验中用 两种规格的薄层 板。当然可以根据实际需要有所变化。 点样第二章四川淫羊藿化学成分的研究 其点样的方法和上述硅胶薄层色谱点样的方法类似。但是,用毛细管点样时,一 定要注意点样量一定要小,而且点要尽量的圆、小,一般不超过 。因为,与硅 胶薄层色谱相比,聚酰胺薄层色谱更加的灵敏。因此,一定要控制好点样量。 展开 将点好样品的聚酰胺薄膜放入的展开缸中,可根据聚酰胺薄膜的大小选择适当的 展开缸,以节省展开剂。薄膜的光面向外,聚酰胺面向内。切记样点不能浸于展开剂 中。展开一定时间后,取出,晾干或用吹风机的冷风吹干。 显色 把干燥的聚酰胺薄膜置于三用紫外分析仪下观察,记录在 或 下点 的展开情况。以%的三氯化铝乙醇溶液作为显色剂,然后用热风吹干,同时要注意 风不能太大。观察并记录显色前后点的变化情况。一般情况下,黄酮类物质与三氯化 铝乙醇溶液形成的络合物多呈黄色,置紫外灯下显鲜黄色荧光。 ..聚酰胺柱色谱 常用的聚酰胺为聚己内酰胺锦纶和聚己二酰己二胺锦纶,因分子中 既有非极性的脂肪链,又有极性的酰胺基团,适用于分离非极性物质和极性物质,吸 附容量大,是一种用途十分广泛的分离方法。聚酰胺柱色谱对各种黄酮类化合物都有 较好的分离效果。其分离的机理一般认为是“氢键吸附”,即聚酰胺的吸附作用是通 过其酰胺羰基与黄酮类化合物分子上的酚羟基形成氢键缔合而产生的,其吸附强度主 要取决于黄酮类化合物分子中酚羟基的数目和位置等及溶剂与黄酮类化合物或聚酰 胺之间形成氢键缔合能力的大小。溶剂分子与聚酰胺或黄酮类化合物形成氢键缔合的 能力越强,则聚酰胺对黄酮类化合物的吸附作用将越弱。黄酮类化合物在聚酰胺柱上 洗脱的规律可参见聚酰胺薄层色谱对黄酮类化合物的规律。 .. 凝胶柱色谱 .葡聚糖凝胶分子中亲脂性的羟丙基基团同时具备吸附性层析和分 子筛功能独特层析的介质,如用甲醇分离黄酮苷,三糖苷先被洗下来,二糖苷其次, .可使用水、醇、丙酮、氯仿等各种试剂, 单糖苷随后,最后是苷元。 广泛用于各种天然产物的分离,包括生物碱、苷、黄酮、内脂、萜类、甾类等。 .的分离原理主要有两方面:以凝胶过滤作用为主,兼具反相分配 的作用在反相溶剂中。因为凝胶过滤作用,所以大分子的化合物保留弱,先被洗 . 脱下来,小分子的化合物保留强,最后出柱。如果使用反相溶剂洗脱, 北京化工大学硕士学位论文 对化合物还起反相分配的作用,所以极性大的化合物保留弱,先被洗脱下来,极性小 的化合物保留强,后出柱。如果使用正相溶剂洗脱,这主要靠凝胶过滤作用来分离。 .洗脱溶剂因分为两类:反相和正相两种。用得最多的是反相溶剂 印 洗脱,以甲醇一水系统最为常见,先用水,逐渐增加甲醇比例,最后用%甲醇冲 柱。正相系统以氯仿.甲醇最为常见,先用%氯仿.甲醇,逐渐增加甲醇比例,最后 用%甲醇冲柱。 凝胶的使用:凝胶在使用之前,一定要在适当的溶液中浸泡,待充分膨胀后才可 装入层析柱中。装好的层析柱,至少要用倍于层析床体积的洗脱液平衡,待平衡液 流完,液面在床表面上.衄时,才可加样。 凝胶的再生:一般不需经任何处理,只在层析柱用完之后,用缓冲液稍加平衡即 可进行下一次层析。如果整个柱有微量污染,可用. 氢氧化钠内含. 氯化钠 处理,即可。 .装柱方式类似于硅胶柱层析,但是上样、洗脱体系完全不同于硅 印 胶柱层析。 .. 反相分配柱色谱 硅胶反相分配色谱是以硅胶颗粒为载体,在其上覆盖了一层十八烷基硅烷作 为固定相,通过不同分子在固定相与流动相之间的分配系数不同起到分离效 果。极性 越小,越易溶于十八烷基硅烷的物质,在柱上停留越久,而极性越大的物质越容易被 洗脱下来,因此属于反相色谱,并且适合分离中性至弱极性物质。水作为极性溶剂可 以洗脱大极性物质,甲醇尽管在硅胶上的洗脱能力强于水,但是在分配色谱中,甲醇 又作为“弱极性”洗脱剂可以洗脱上几乎所有的弱极性组分。 .小结 本实验对乙酸乙脂萃取物进行了分离,通过硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱、反 .凝胶柱色谱进行分离和纯化,并通过硅胶薄层色谱和 相分配柱色谱、印 聚酰胺薄层色谱进行检识。由实验可知:?硅胶柱色谱是最普遍最常用的分离手段, 几乎没有特异性。但由于硅胶是极性吸附介质,因此它分离强极性至中性化合物的效 果更好。一般作为中药化学成分初分离的色谱手段,经硅胶柱初分离得到的若干个部 .凝胶柱色谱对于黄酮类 分再进行其他色谱的分离。?聚酰胺柱色谱和印 .凝胶柱色谱主要用于物质的纯化,一般情 物质具有很好的分离效果。印 况下上样量比较小。?聚酰胺薄膜对于黄酮类物质的检识灵敏度很强。一些无法用硅第二章四川淫羊藿化学成分的研究 胶薄层色谱分离的物质,可以用聚酰胺薄膜进行分离。由于聚酰胺对于黄酮类化合物 吸附能力较强,因此,需要用展开能力较强的展开剂,在展开剂中大多含有醇、酸或 水,或兼有两者。本实验中使用的展开剂为:乙醇一水,氯仿一甲醇。当用氯仿一甲 醇做为展开剂的时候,由于氯仿具有腐蚀性,应尽量减小氯仿所占的比例,以避免对 聚酰胺薄膜的腐蚀。?各种柱色谱和薄层色谱,个有所长,在实验中要充分运用各自 的优点,取长补短,相辅相成,以提高分离的效果。 本实验经过一系列的分离和纯化过程,共分离得到了个化合物。其中个为 黄酮类物质,个甾醇类物质,个脂肪酸类物质。 第三章化合物结构鉴定 第三章化合物结构鉴定 波谱分析技术已经成为确定中药有效成分化学结构的主要方法。尤其是最近发展 起来的超导核磁共振技术的普及和各种二维核磁共振谱及质谱新技术的开发利用,使 其进一步具备了灵敏度高、选择性强、用量少及快速简便的方法,大大加快 了确定化 合物结构的速度和提高了灵敏度。 四大波谱指的是:红外光谱瓜、紫外光谱、核磁共振波谱、质谱, 其在中药有效成分结构鉴定中发挥的作用各不相同,简介如下:?红外光谱,测定结 构时化合物只需一嵋,对于未知结构化合物的鉴定,主要用于功能基的确认,芳 香取代类型的判断;?紫外光谱的测定仅需少量的纯样品,这对于中药有效成分的研 究是非常有利的,其在中药有效成分的研究中具有多方面的用途。一般来说,光 谱主要可提供分子中的共轭体系的结构信息,可据此判断共轭体系中的取代基的位 置、种类和数目。由于光谱只能给出分子中部分结构的信息,而不能给出整个分 子的结构信息,所以必须与瓜光谱、谱、谱以及其它理化方法才能得出可 靠的结论;?核磁共振波谱是化合物分子在磁场中受电磁波的辐射,有磁距的原子核 吸收一定的能量产生能级的跃迁,即发生核磁共振,以吸收峰的频率对吸收强度作图 所得之谱图。能提供分子中有关氢及碳原子的类型、数目、互相连接方式、周 围化学环境以及构型、构象的结构信息。随着超导核磁的普及,各种同核及异核二维 相关谱的测试及解析技术等的开发应用日新月异,不断得到发展和完善,从而大大加 快了结构测定的工作的步伐。因此,在进行中药有效成分的结构测定时,谱与 其它光谱相比,其作用最为重要;?质谱分析法是通过对被测样品离子的质荷比的测 定来进行分析的一种分析方法。被分析的样品首先要离子化,然后利用不同离子在电 场或磁场的运动行为的不同,把离子按质荷比/分开而得到质谱,通过样品的质谱 和相关信息,可以得到样品的定性定量结果。随着现代分析技术的飞速发展,近年来, 新的离子源不断出现,使质谱在确定化合物的分子量、元素组成和由裂解碎片检测官 能团、辨认化合物类型、推导碳骨架等方面发挥着重要的作用。 对上述实验中分离得到的个化合物,根据化合物的理化性质和光谱数据进行 结构鉴定。本实验中主要用到了核磁共振波谱和质谱,其中谱用到 了.谱、谱和二维核磁共振谱.谱中的、。用 到的质谱是电喷雾电离质谱.。化合物的结构鉴定如下:北京化工大学硕士学位论文 化合物: 黄色粉末,反应和反应为阳性,紫外光灯下呈棕色荧光,紫外光 谱有黄酮类化合物吸收特征。将化合物酸水解,检出三.鼠李糖,示为黄酮苷 类化 合物。. /:,【】,结合、.推出分 子式为。表一中, .,处有位酚羟基质子信号,在 高场处轴.,有一个甲氧基信号, .,、.,提示为两个甲 基质子信号。 .、.、.的信号 谱中,整个碳谱共有个碳信号,其中 强度是其它信号强度的倍,可能是两个碳信号重叠,因此有个碳信号,除去黄 酮母核的个碳信号和个糖碳信号,还有个碳信号,其中有个是甲氧基的取 代信号,还有个碳信号,可能是取代基上的碳信号,其中 .和.推测分 .有个 别是黄酮环上?,?和,位的碳信号,位可能有含氧取代。 .为甲 碳信号,提示为个羰基碳信号, .为黄酮母核位羰基碳信号。 氧基的碳信号,.提示为甲基的碳信号。 .和谱表.表明有两个【..鼠李糖基信号,分别为., .,., 和 和 .,.,.,.,.,.;为., .,.,.,.。表谱, .,,.,,., ,. .,.,., ,.,,. 和?表.谱中, .处的信号表明可能存在丫.二甲基.色烯。 实验表明见图.,.”,” .,.与.” .存在远程相关, ?”, .,.与一” .存在远程相关,.”.与.”.存 在远程相关,.”.与.?.存在远程相关,进一步证明了丫.二甲基.色烯第三章 化合物结构鉴定 的存在。表.谱中,在 .,, 和.,, 处 有一个’’耦合系统,表明了对位取代环的存在。实验表明,.与 .也存在远 .存在远程相关,同时.’,’ .和., .与 程相关,因此甲氧基连接在.’位置。. .与. .,. .存 在远程相关,.” .与. .存在远程相关,表明丫.二甲基.色烯在. 和一位成环。? .与. .存在远程相关,.’.与.存在 远程相关,可以确定低聚糖的位置和连接顺序。 根据以上推断,确定了化合物的结构见图.,经系统查阅文献,未见报道, 。 是一个新化合物,命名为 图化合物重要的相关 . 北京化工大学硕士学位论文 表化合物的 和 波谱数据,’弛,, . . . . . ., . . . . . . .,, . . .,, . ., . .,,. . .,,. . . ., . ., . ., . ., . . . . .,, . ., . . . . :帮犁妒姗扩扩妒扩‰扩扩矿‖矿?兰一少妒矿‖毛 . .,, 第三章化合物结构鉴定 化合物; 黄色粉末,反应和反应为阳性,紫外光灯下呈棕色荧光,紫外光 谱有黄酮类化合物吸收特征。将化合物酸水解,检出.鼠李糖,示为黄酮苷类 化合物。. /:【,并结合、.给出分子式为 。?表.谱中, .似,处有位酚羟基质子信号;在高场处 .,有一个甲氧基信号; .,、.,提示为两个甲基质子信 号。 .,,., ,., ,.,处的信号表明了可 能存在异丙烯基呋喃基团。 和谱表.表明有两个.鼠李糖基信号,分别为 ., .,., 和 .,.,.,.,.,.;为., 和 .,.,.,.。 .谱中,整个碳谱共有个碳信号,其中 .、.的信号强度是 其它信号强度的倍,可能是两个碳信号重叠,因此有个碳信号,除去黄酮母核 的个碳信号、个糖碳信号和个甲氧基的取代信号,还有个碳信号,可能是 取代基上的碳信号,其中 .和.推测分别是黄酮环上,?和?,位的 碳信号,?位可能有含氧取代。 .有个碳信号,提示为个羰基碳信号,琵 .为黄酮母核位羰基碳信号。 .为甲氧基的碳信号。 图.实验表明,.” .与.” .,.” .存在远程 相关,一” .,.与” .存在远程相关,.” .与一” . 存在远程相关,进一步证实了异丙烯基呋喃基团的存在;同时亦观察到,化合 物的 .信号 .在化合物中消失,而观察到 .; .在化合物中消失, 而观察到 .;并且.” .与一 .,一 .存在远程相关, .与一 .,. .,. .