HPLC法测定双黄连胶囊中连翘酯苷A及连翘苷的含量

HPLC法测定双黄连胶囊中连翘酯苷A及连翘苷的含量 HPLC法测定双黄连胶囊中连翘酯苷A及 连翘苷的含量 中国药师2005年第8卷第5期385 HPLC法测定双黄连胶囊中连翘酯苷A及连翘苷的含量 廖朝峰胡志军谢红亮(深圳市宝安区人民医院广东深圳518000) 摘要目的:建立中成药双黄连胶囊中连翘酯苷A及连翘苷的含量测定方法.方法: 采用Phenomenex.ODS.C(250mill ×4.6mill,5um)柱,以甲醇(含1%的四氢呋喃)-水(伽.01mol?L磷酸二氢钾,PH3.2)为 流动相进行梯度洗脱,检测波长 280am.结果:连翘酯苷A及连翘A的线性范围分别为7.8—139.5Ixg?ml和2.6— 47.7g?rnl,,其线性关系良好.连翘酯 苷A平均回收率为100.3%,RSD为0.75%;连翘苷平均回收率为99.2%,RSD为 1.03%.结论:该方法准确可靠,可用于本制 剂的质量控制. 关键词双黄连胶囊;连翘酯苷A;连翘苷 中图分类号:R927.2文献标识码:A文章编号:1008-049X(2005)05-0385-02 DeterminationtheContentofForsythosideAandForsythininShuanghuanglianCapsulesby HPLC LiaoChaofeng,HuZhijun,XieHon~iang(Bao~mDistrictPeoplegHospital,Shenzhen5180 0,P.R.China) ABSTRACTObje~tive:ToestablishaHPLCmethodfordeterminationofthecontentsoffors ythosideAandforsythininShuang- huangliancapsules.Method:APhenomenx-ODS-CI8(250mm× 4.6mm,5um)wasused.ThemobilephaseWasmethanol(contai- ning1%THF)water(0.01mol?L, potassiumdihydrogenphosphatesolution,pH3.2)asgradientelution.thedetectingwavelen gth Wasat280am.Result:ThelinearrangesofforsythosideAandforsytinwereat7.8-139.5m?rnl _.and2.6-47.7m?rnl_.,respee? tively,thebothshowedagoodlinearcorrelation.theaveragerecoverieswererespactively100 .3%(F0rsythosideARSD0.75%)and 99.2%(Forsythin,RSD1.0%).Conclusion:Themethodisreliable,accurate,andverysuitabl etothequalitycontrolofShuang— huangliancapsules. KEYWORDSShuanghuangliancapsules;ForsythosideA;Forsythin 双黄连胶囊由金银花,黄芩,连翘等3味药材加工制备 而成.具有清热解毒功效,主治外感风热引起的发热,咽痛, 咳嗽等,疗效确切.该制剂中连翘为主要成分之一,占整个 处方药材质量的50%.连翘酯苷A和连翘苷为连翘的特征 成分.本文用高效液相色谱法…测定了双黄连片中连翘酯 苷和连翘苷A的含量,作为检测和控制该制剂的含量指标, 为该制剂的质量控制提供了可行的方法. 1仪器与试药 1.1仪器 SUMMITP680戴安高效液相色谱仪,检测器SPD-10A. 1.2试剂' 甲醇为色谱纯,磷酸二氢钾,磷酸及四氢呋喃等均为分 析纯,水为重蒸水. 1.3药品 双黄连胶囊(广东省惠州市中药厂生产,批号分别为 表23批样品的黄芪甲苷含量测定结果 批号黄芪甲苷含量(ms/支) O30604 O2O9O3 03o302 0.850 0.736 0.764 曾试用药典中黄芪药材提取方法,但在实验中发现通过 大孔树酯除杂质后,回收率较低,重复性也较差,用文中方法 030109,031012,031215);连翘酯苷A对照品(香港中文大学 生物系及中医药研究所李明博士提供,纯度>98.0%);连翘 苷(中国药品生物制品检定所提供). 2方法与结果 2.1色谱条件 色谱柱为Phemomenex—Cl8柱(250mm×4.6mm,5), 流动相为甲醇(含1%四氢呋喃)-水(含0.01mol?L磷酸二 氢钾,用磷酸调PH至3.2),梯度洗脱,梯度洗脱条件见表1; 流速为1.0ml?min,,检测波长280am,检测温度为室温; 进样5. 2.2对照品贮备液 精密称取连翘酯苷A15.5mg和连翘苷5.3mg,置100 加甲醇至刻度,摇匀,制得混合对照品溶液,备 rnl量瓶中, 用. 提取,重复性好,结果准确,背景干扰也小,方法简便,能有效 缩短检验周期. 参考文献 l苗明三,李振国.现代实用中药质量控制技术[M].北京:中国医药科技 出版社,128—132,826 2中国药典[S].2000年版.一部.521 (2004-05—18收稿2004-10-l1修回) 386ChinaPharmacist2005,Vo1.8No.5 表1流动相的梯度洗脱条件 2.3线性关系 分别精密吸取上述贮备液0.5,1.0,3.0,5.0,7.0,9.0 IIll,置10IIll量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀.依次进样10, 将所测峰面积(Y)与浓度(X)进行线性回归,得回归方程yl :3.04×10X一7.82×10,r:0.9998(连翘酯苷A),Y2: 1.71×10+1.15×10,r:0.9999(连翘苷),结果表明连翘 酯苷A在7.8—139.5?ml浓度范围内线性关系良好,连 翘苷在2.6—47.7?ml浓度范围内线性关系良好. 2.2精密度试验 取上述任一对照液,按含量测定项下方法操作,进样,测 定连翘酯苷A和连翘苷的峰面积,进样5次,其RSD分别为 0.6%及0.5%. 2.3重复性试验 取同一批号(批号:030109)样品5份,分别按含量测定 项下操作,进样测定,计算连翘酯苷A和连翘苷的含量.连 翘酯苷A为4.01mg/片(均值),连翘苷1.16mg/片,RSD分 别为0.7%及1.9%. 2.4稳定性实验 按含量测定项下方法制备供试品 取同一批号药品一份, 溶液,于2,4,6,8,12h进行测定峰面积,得RSD:1.09%. 样品在12h内稳定性良好. 2.5回收率试验 精密称取已测含量的样品6份,采用加样回收法,分别 精密加入连翘酯苷A和连翘苷对照品适量,按含量测定项 下方法操作,结果见表2. 表2回收率试验结果In:6) 2.6干扰试验 按处方组成和比例,称取除连翘以外其他药材,按片剂 制备方法制成缺一味制剂,并按供试品溶液制备方法制成阴 性对照液,依法进样,阴性对照色谱在连翘酯苷A和连翘苷 处无吸收峰,表明在试验条件下,处方中其它药材中成分及 连翘中其他成分对测定结果均无干扰.结果见图1. 2.7样品含量测定 2.7.1配制取本品10片,精密称定,研成细粉.取相当 于1片的细粉(约0.25g),精密称定,置100ml具塞锥形瓶 中,精密加入甲醇50IIll,称重,超声处理30min,放冷,用甲 醇补足重量,滤过,弃去初滤液,取续滤液作为供试品溶液. LLL10152o051015 AmInB A.对照品B.供试品C.空白对照 2005101520 minCrain 1.连翘苷2.连翘酯苷A 图1HPLC色谱图 2.7.2测定方法分别取上述供试品溶液10进样,记 录峰面积,按外标一点法计算双黄连片中连翘酯苷A和连 翘苷含量,结果见表3. 表3样品中连翘醋苷A及连翘苷测定结果 3讨论 连翘酯苷A和连翘苷为连翘的主要成分,本法能较好 定量测定双黄连片中连翘酯苷A和连翘苷的含量,方法简 便,准确,可作为双黄连片的控制指标. 对甲醇回流提取与超声提取两种方法进行比较,发现甲 醇超声提取液杂质少,色谱峰分离好.考察了不同超声提取 时间,结果30min与40min含量一致,故定为30min. 连翘酯苷A遇酸,碱或高温等不稳定,易引起分解;因 此在提取过程中应尽量避免酸,碱或高温. 曾有文献报道过采用HPLC法测定样品中连翘酯苷A 的含量…,但不适用于本品.本法于流动相中加入1%四氢 呋喃可改进各组分色谱峰的峰形,能与其它杂质组分获得较 好的分离. 参考文献 l张炜,张文.HPLC法测定感冒退热颗粒(冲剂)中连翘酯苷A的含量 [J].中草药,1999,30(4):268 (2004-04-05收稿2004-06?21修回)