石蜡切片技术实验报告

石蜡切片技术实验报告 目:石蜡切片技术实验报告 学院:农学院，专业:植物学，姓名:张永丰，学号:2011202010 目的 石蜡切片技术，为以后的科研中切出合格的实验装片做准备。并观察植掌握 物叶的横切面内部结构。 材料:已经固定好的女贞叶 方法与操作步骤 一、 脱水:依次使用下列浓度的乙醇脱水 50%乙醇—70%乙醇—85%乙醇—95%乙醇—100%乙醇—100%乙醇 每步两个小时。 二、 透明:依次通过下列试剂进行透明 1、1/2无水乙醇1/2二甲苯(加少许番红粉末，对材料进行附染)两个小时 2、二甲苯两个小时 3、二甲苯一个小时 三、 浸蜡:浸蜡步骤如下 将材料瓶中的二甲苯取出1/2，加入剩余二甲苯的体积3/2倍的石蜡液于36?1、 处理35小时 温箱中 2、换用纯石蜡液于60?温箱中处理2小时，再换一次纯石蜡液处理2小时 四、 包埋与切片 在提前准备好的纸盒中放入少量蜡液。 1、 2、片刻后放入材料，避免形成断层还要注意材料摆放的位置和方向。 3、及时将蜡块冷却，防治形成结晶。 4、修块与粘连:将多余的石蜡切除，使蜡块成为梯形;将蜡块一正确的方向粘 连在枕木上。 5、切片:利用切片机将蜡块切成薄片。切片厚度为8,10μm，以每分钟40, 50转为宜。 6、粘片与展片:在载玻片上滴一滴黏贴剂和一滴蒸馏水用牙签涂匀，将蜡带光 面朝下固定于载玻片上，放到展片台上经加温使其充分展开。 7、干燥:将展好的片放于36?温箱中干燥16小时 五、脱蜡:切片分别经过下列步骤进行脱蜡 二甲苯 30min 1/2二甲苯1/2无水乙醇 5min无水乙醇 5min 95%乙醇5min 85%乙醇 5min 70%乙醇 5min 六、染色:染色分为番红染色和固绿染色两步 1、番红染色:将载玻片放入盛有番红染液(1%番红，70%乙醇)的染缸中染 色22小时 2、固绿复染:载玻片依次经过一下处理 70% 1min 85% 1min 95% 1min 固绿染液(0.1%固绿，95%乙醇)20秒 3、脱水:95% 1min 100% 1min 100%1min 4、透明:1/2二甲苯1/2无水乙醇 1min 二甲苯 1min 二甲苯 七、封片 中性树胶封片，干燥 八、镜检 将封好的装片在显微镜下观察，并挑选清晰的具有叶横切面典型结构特征的部位拍照。 结果与 一、结果分析 皮(远轴面) 栅栏组织 韧皮部 叶脉 木质部 表皮(近轴面) 二、方法分析 1、包埋是材料放置的位置不正确加之材料较大，为切片带来较大困难，以致切 片效果不理想。 2、番红染色时间短，观察结果中应该是红色的部位不明显。 3、固绿复染时间短，表皮细胞染色不清晰。 4、材料固定时间过长，或者处理过程中使得材料变脆，切片时把叶的远轴面表 皮与叶片脱离，使得观察结果中的很多叶片没有远轴面表皮。