Survivin、Ki-67核抗原在涎腺基底细胞腺瘤、癌中的意义

Survivin、Ki-67核抗原在涎腺基底细胞腺瘤、癌中的意义 Survivin、Ki-67核抗原在涎腺基底细胞腺 瘤、癌中的意义 中国实验诊断学2010年12月第l4卷第12期 文章编号:1007—4287(2()10)12—1945—03 Survivin,Ki一67核抗原 在涎腺基底细胞腺瘤,癌中的意义 符良斌,廖天安,刘正,王鸿,王友元.,黄志权 一 1945一 (1.海南省人民医院口腔科,海南海口570001;2.新田人民医院; 3.中山大学孙逸仙纪念医院口腔颌面外科,广东广州510120) 摘要:目的探讨涎腺基底细胞腺瘤,癌中survivin达与Ki一67核抗原表达的相关性,了解其在肿瘤恶性增殖及 良恶性肿瘤鉴别诊断中的意义.应用免疫组织化学方法检测15例正常涎腺组织,28例涎腺基底细胞腺瘤,23 例基底细胞腺癌组织中survivin及I(i一67核抗原的表达;RT-PCR分析2例涎腺基底细胞腺瘤及2例涎腺基底细胞腺癌 survivin,Ki一67的mRNA表达水平.结果Survivin及一67核抗原在正常涎腺组织,基底细胞腺瘤,基底细胞腺癌中的 表达依次递增,差异有统计学意义(P<0.01);Ki一67核抗原的表达随surviviu表达增加而上升(P<0.05).涎腺基底 细胞腺癌survivinmRNA表达水平高于基底细胞腺瘤.结论Survivin,Ki一67核抗原的过度表达可能参与涎腺基底细胞 腺瘤的恶性增殖过程,并且可作为基底细胞腺瘤,癌的鉴别诊断分子指标之一. 关键词:基底细胞腺瘤;基底细胞腺癌;sttrvivin;Ki.67核抗原 中图分类号:R739.87文献标识码:A TheroleofsurvivinandKi-67nuclearantigeninbasalcelladenomaandadenocarcinomaFU Liang-bin.LIAOTian-an. Zhen,et.(DepartmentofStomatology,Hainanprovinci01people'sHospital,Haikou570001,China). Abstract:ObjectiveToinvestigatetherelationshipbetweensurvivinandKi一 67nuclearantigenexpressionglandandtoknow 山 emalignantproliferationanddifferentialdiagnosisvalueinbasalcelladenomaandadenocarcinomaof山esalivarygland.Methods ExpressionsofsurvivinandKi一 67nuclearantigenweredetectedbyimmunohistochemistryinnormaltissue(rt:15),basalcelladeno— ma(n=28)andbasalcelladenocarcinoma(n=23).111emRNAlevelsofsurvivin"andKi一 67nuclearantigenweredetectedbyRT- PCRin2casesofbasalcelladenomatissuesandadenocarcinomatissues.ResultsExpressionsofsurvivinandKi一67nuclearantigen innormaltissue,basalcelladenomaandbasalcelladenocarcinomaweregraduallyincreased(P<0.01).TheexpressionofKi一67 wasincreasedwi山 theincrementofsm'vivinexpression(P<0.05).ThemRNAlevelsofsurvivinwashigherinsalivaryglandbasal celladenocarcinomathanthatinsalivaryglandbasalcelladenoma.ConclusionOverexpressionofsurvivinandKi一67nuclearantigen maypromotemalignantproliferationofbasalcelladenomaofthesalivaryglandandtobeoneofthedifferentialdiagnosismolecular markerofsalivaryglandbasalcelladenomaandadenocarcinoma. KeyWOldS:Basalcelladenoma;Basalcelladenocareinoma;Salivmyglandtumor;Survivin;Ki一67nuclearantigen (ChinJLabD/agn,2010,14:1945) 涎腺基底细胞腺瘤,癌是同一种类型肿瘤的良 性型和恶性型,均好发于大涎腺,基底细胞腺瘤可术 后复发及恶变为基底细胞腺癌,基底细胞腺癌预后 较差,术后复发率较高_1j.本研究采用免疫组化的 方法检测survivin及Ki一67核抗原在涎腺基底细胞腺 瘤,癌中的表达情况,探讨survivin表达与l<j.67核抗 原表达的相关性,了解其在肿瘤恶性增殖及良恶性 肿瘤鉴别诊断中的意义. 1与方法 1.1材料 基金项目:广东省医学科研基金项目编号:B2008036 *通讯作者 选取1998年1月至2008年1月我院口腔科涎 腺肿瘤石蜡包埋组织标本,包括正常涎腺组织15 例,涎腺基底细胞腺瘤28例,基底细胞腺癌23例; 所有涎腺肿瘤发生于腮腺,颌下腺及上腭的小涎腺; 年龄18—83岁,中位年龄为45.5岁;男性32例,女 性l9例.所有涎腺基底细胞腺瘤,瘤病例为初诊病 例,未行任何抗肿瘤治疗.涎腺基底细胞腺瘤,癌的 病理诊断均按照口腔颌面肿瘤新分类_2J进行详细观 察和描述,所有标本均经本院病理科专家确诊,符合 原诊断.所有标本均由4%多聚甲醛溶液固定,石 蜡包埋连续切片,厚4pan,用预先经过防脱片处理 的载玻片贴片.另收集手术切除的涎腺基底细胞腺 瘤,基底细胞腺癌各2例,手术标本10min内置于液 氮保存. 1.2主要试剂 鼠抗人survivin单克隆抗体为美国SantaCrus公 司产品;Ki67核抗原鼠抗人单克隆抗体,SP免疫组 化试剂盒,DAB显色试剂盒及苏木精复染液为美国 Sigma公司产品,均购自北京中杉金桥生物技术有限 公司.RT及PCR试剂盒分别为日本Takara公司和 捷克Fennentas公司产品;琼脂糖为西班牙GENE TECH公司产品. 1.3方法 采用免疫组织化学sP法检测涎腺基底细胞腺 瘤,癌组织中survivin,Ki一67核抗原的蛋白水平的表 达情况,参考文献l_3j的方法进行操作.survivin,Ki一 67核抗原一抗的工作浓度分别为1:80及1:100. RTPCR法检测新鲜组织标本survivin,Ki.67核 抗原mRNA水平的表达.运用0lig5软件设计,上海 生工生物工程技术服务有限公司合成PCR扩增引 物,按试剂盒说明操作.Survivin:5.GCAGA TCTFGCTFCGCGATGTACGGGCC一3;5一CGTCGCGA GGGCTATGAACTAATGACCC一3,产物412bp;Ki一67 上游引物5一rITI,GGGTGCGACTFGACGA3;下游 引物5.TGATAGCCAGGCGTCTCGT..3,产 物181bp;内参对照j3一actin上游引物:5.GATGAG ArrrGGCATGGCTTF一3,下游引物:5一CTCAAG TFGGCA3GACAAAAA.3,扩增片断431bp. 1.4结果判定 Survivin染色以胞浆中染成棕色为阳性,少数出 现胞核阳性.K;67核抗原阳性染色定位于细胞核, 可存在于部分肿瘤细胞胞浆.免疫组化结果判定标 准参考文献l3J.凝胶成像系统中检测mRNA表达, 条带为白色即为阳性表达. 1.5统计学处理 应用SPSS13.0进行数据统计分析,检验及 确切概率法分析survivin和Ki.67核蛋白表达阳性率 的组问差异,Spearman等级相关分析survivin和Ki. 67核蛋白表达的相关性.以P<0.05为差异具有 ChinJLabDiac~a,December,2010,V0114,No.12 统计学意义. 2结果 2.1Survivin及l(j.67核抗原在涎腺基底细胞腺 瘤,癌中的表达 Survivin表达的阳性物质主要位于肿瘤细胞及 正常涎腺组织导管上皮细胞的胞浆,呈棕黄色或棕 褐色(图1).Survivin表达阳性率在正常涎腺组织中 为13.3%,基底细胞腺瘤中阳性率为.67.8%,基底 细胞腺癌中为91.3%,三者之间survivin的表达阳性 率依次升高,差异有统计学意义(=24.227,P< 0.001),且基底细胞腺癌中强阳性表达率较高.. 67核抗原表达阳性率在正常涎腺组织中为26.7%, 基底细胞腺瘤中阳性率为71.4%,基底细胞腺癌中 为100%,三者之间Ki.67核抗原的表达阳性率依次 升高,差异有统计学意义(见图2,=23.817,P< 0.001).见表1. 表1涎腺正常组织,基底细胞腺瘤,癌组织中 survivin及l(i-67核抗原表达情况 2.2涎腺基底细胞腺瘤,癌中survivin表达与l【i. 67核抗原表达的相关性 涎腺基底细胞腺瘤,癌中,survivin及Ki一67核抗 原均为阳性的病例有39例(76.5%),survivin及Ki 67核抗原均为阴性的病例有7例(13.7%),survivin 阳性/Ki.67核抗原阴性者1例,经Spearman等级相 关分析,survivin及Ki一67核抗原在涎腺基底细胞腺 瘤,癌中的表达显着正相关(r=0.691,P<0.001). 2.3涎腺基底细胞腺瘤,癌中SurvivinmRNA水平 的表达 电泳结果显示,Survivin基因扩增片断条带在基底 细胞腺瘤,癌中存在明显差异,基底细胞腺癌中Sm~~n mRNA水平表达均明显强于基底细胞腺瘤(图3). A:nom~salivaDrandtissue;B:basalcell~enomaA:nomnlsalivaryglandtissue;B:basalcell adenoma tissue:C:I~salcelladenc~rcinomatissue(SP×4oo)tissue;C:basalce? adenocarcinomatissue(SP×4?) 图1sIl】广vivin在涎腺组织的表达情况图2.67核抗原在涎腺组织的表达情况图 3涎腺基底细胞腺瘤,癌中survivin mRNA水平表达情况 中国实验诊断学2010年12月第14卷第12期 3讨论 Survivin在人类多种肿瘤组织呈异常高表达,如 肺癌,结肠癌,胰腺癌,前列腺癌和乳腺癌等,在肿瘤 的发生,发展中起着重要作用l,,.LoMuzio等[] 发现在口腔鳞癌中survivin的高水平表达与预后不 良有关.齐红等IsJ对涎腺良恶性多形性腺瘤的研究 中发现survivin的过表达可能参与多形性腺瘤的发 生,发展及恶变进程.在本研究,我们发现survivin 在正常涎腺组织中除导管上皮细胞外无表达,在涎 腺基底细胞腺瘤,癌中均有表达,均高于涎腺正常组 织,但两类肿瘤之间的表达差异亦较大,基底细胞腺 癌表达阳性率及阳性强度均高于基底细胞腺瘤,且 survivin在基底细胞腺癌中mRNA的表达水平亦高 于基底细胞腺瘤,这与其他学者在人体其他肿瘤的 研究结果一致,提示survivin在涎腺基底细胞腺瘤, 癌的发生,发展中有一定作用,特别是可能参与肿瘤 细胞恶性增殖,其具体机制尚需进一步研究. Ki.67是一种非组蛋白核抗原,基因定位于人染 色体10q5,除c0期外,其它各期均有表达,M期达 到高峰,参与细胞有丝分裂,其阳性表达高低与细胞 增殖活性密切相关,故检测I<i.67表达可反映出肿 瘤细胞的增殖状态,被视为评估肿瘤细胞恶性增殖 的可靠标志l.王友元等E3J研究发现Ki.67核抗原 的表达在普通型,生长活跃型及恶性多形性腺瘤中 依次递增,并认为Ki一67核抗原高表达可能和多形 性腺瘤癌变有密切联系.本研究结果显示基底细胞 腺癌的Ki一67核抗原在mRNA及蛋白水平表达活性 明显高于基底细胞腺瘤,可能预示着在基底细胞腺 瘤的恶变过程中,.67核抗原表达增强,肿瘤细胞 的增殖活性逐渐增强,最终得以无限增殖,说明Ki. 67核抗原与基底细胞腺癌的发生可能存在一定关 系. 在涎腺基底细胞腺瘤,癌组织中,.67核抗原 表达与survivin表达呈正相关,表明survivin与涎腺 一 l947一 基底细胞腺瘤,癌肿瘤细胞的分裂增殖存在一定关 系,survivin可能有促进涎腺基底细胞腺瘤细胞增殖 甚至癌变的作用,这些作用可能与survivin的抑制细 胞凋亡及促进细胞增殖的作用有关[9,10],其具体机 制尚待进一步深入研究.本研究结果为进一步研究 survivin在涎腺肿瘤中作用机制提供了新的依据, survivin,Ki一67核抗原的过度表达可能参与涎腺基底 细胞腺瘤的细胞恶性增殖过程.survivin,Ki.67核抗 原在涎腺基底细胞腺瘤与基底细胞腺癌的表达阳性 强度及阳性率均存在明显差异,对组织学类型不典 型涎腺肿瘤,可藉此作为鉴别诊断的分子指标之一. 参考文献: [1]BatsakisJG,hmaMA.Basaloid.salivarycarcinomalJJ.AnnOtolRhinol Laryn,1991,100(9pt1):785. [2]李江.口腔颌面部肿瘤分类新进展[J].中华口腔医学杂志, 2006,41(8):474. [3]王友元,陈伟良,张伟雄,等.Ez13n蛋白,iNOS在涎腺多形性腺瘤 恶性增殖中的意义[J].癌症,2O09,28(10):1072. 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