【doc】柯萨奇病毒B4‘致低硒鼠心肌损伤的实验研究

【doc】柯萨奇病毒B4‘致低硒鼠心肌损伤的实验研究 柯萨奇病毒B4‘致低硒鼠心肌损伤的实验 研究 ? l00? l巷第!期 !ll:I2牛_月 巾H地方病学禁志 t;Einesc.JournalofEndemiology Ma V0l2 2I:I2 No.2 柯萨奇病毒B4’致低硒鼠心肌损伤的实验研究 曹丹阳.,周争望,张淑芹,白城.,曾完惠,钟学宽 1.哈尔淡医科A学克山病研究所,黑兜江喑尔滨150086;2哈尔滨医科大学实验动物学部,黑龙江哈尔滨 150086;3暗尔滨市南岗区卫生舫疰站.尤汀哈尔滨150001j :摘要]目的探讨柯萨奇病毒B,i’致低硒鼠心肌损伤的特点.方法用补硒和低硒饲料分别喂养昆明鼠4 周后交配?给其子代雄性鼠(出生后4周j腹腔接种柯萨奇病毒 B4’01mt,对照组接种等量RPM11640培养液. 观察备组鼠的心肌光镜结果,全血中答胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)活性和肝脏组中脂质过氧化物酶(IPO)古 量结果低硒和补硒饲料病毒组的心肌病变检出率分别为78.1和16.7.低硒和补硒饲料对照组的心肌未 见病变.低硒组『『『【巾GSHPx活性明显降低,IP/)含量明显增高结论低硒可以使柯萨奇病毒B4’致昆明鼠 心肌损伤加重 :关键词柯萨奇病毒{4’;低硒;心肌损描;谷胱甘肤过氧化抽酶 [中图分类号]()6126[文献标识码]A[文章编号:100?_4955(2002)0201?O3 FheexperimenlalresearchonmyocardialinjuryinducedbyCVB.’inSe—deficientmice CAtJDan—yang,Zltf)ULingwang.ZHANGShuqin,BAIXiao,ZENGXian huiZHONGXuek (1Ke~k,(月Ihsea.~e[nstilute,Har&nMedicalUntversity,Harbin150086.China;8Ex perimentalAnimalDe- “rr,llarbinMedi~alIrniz’erstty—ltarbin150088一China;3.EpidemicPre~,enlionStatio~zin]VangangDis— frid,urbinI50001.Chtd) Abstract:ObjectiveToinvestigalethecharacteristicsofSedeficientndce’sm yocardialinjuryinducedby CVB,I’.MethodsToriginalKunmingndcewert”fedwithSe-suementedf eedandSedeficientfeedrespec tivelyandmatedafterfourweeks.Thefourweekmalemicewereinoculatedjntr.Iperltal1ywithCVB4’.while controlgroupinoculatedwithequalquantityofRPMI1640inthes~lilewayMyocardialchangesofniJcein fourgroupswcrobservedthrough1ighrntk:rosco1)e,andtheactivityofGSH—Pxinwholebloodandtheconrent (】 fLP/)inliver…}alsoobservedResultsThedetectionrateofmyocardiatlesioninSe—deficientvirusgroup 78I,and1ha*ofSesupplementedvirusgroupwas187ThemyocardiumofthSed?fiitdSe aupplementedgroupshadDOpalhologicalchanges.ActivitiesofGSH—Pxi nwholebloodofSedeficientgroup ~MereobviouMvreduced.andtheconteDtofIPOinliver”~rasincreased.ConclusionsSdficiencYcanexaeer- b}ttOFaggraxalemyocardialinjt,ryinducedCVB,I’inKunmingmice Key,~ords:C,)xsackievirusB,i’;Se—deficient;Myocardialinjury;Glutathi oneperoxidase 克山病是一种原因未明的地方性12,肌病.多数 学者认为,低硒是克山病损伤的病毒株变成 有毒株,这些均为克山病的病毒病因的进一步研究 提供了佐证本实验旨在研究低硒条件下柯萨奇 B4’病毒(CVB4’)对小鼠心肌的致病特点. l材料与方法 1.1饲料组成饲料配方参见文献E8],低硒合成 第2堆曹计阳.等蚋萨.T病莓BI敛低硒鼠心肌伤口勺实验研究?】 O1? 饲料经测定硒为0.008rag/’kg补硒饲科硒为0.277 mg.,”kg.VE为41mg/kg 1.2实验动物昆明成鼠购白中国医学科学院实 验动物中心.分别给以补硒和低硒饲料喂养4后 交配,取其4周雄肚仔鼠作为实验用鼠. 1.3病毒CVB4病毒为中国学科学院昆明医 学生物研究所l973年提供,由哈尔滨医科大学微生 物教研室保存.经HeIa细胞增殖.注入低硒鼠体内. 并从低硒鼠心脏分离出的经鉴定仍为CVB4的毒力 增强株.暂命名为CVB4’经HeIa细胞增殖,并进 行病毒滴定.结果其I’CII)为10.实验用量为10 TCID011ml. 1.4动物模型将4周龄雄性鼠分为4组I组, ?组为低硒病毒组,低硒对照组,1I组,PC组为补硒 病毒组和补硒对照组.4组分别在低硒饲料和朴硒 饲料喂养的基础上.给以腹腔接种0.1m}CVB4’病 毒液和0.1ml的RPMIL640培养液.接种后d. 图1慨硝毒卅肌光镜观察结果?. 2.2小鼠VMC检出率补对照组『低硒对照 组均未检出VMC.而补硒病毒组VMC检率为 16.7.低牺病毒纽VMC榆出率为78.1低硒病 毒组与补硒病毒组以及病毒绀与对照组之间.差异 均有显着意义.见】 表1光镜下小缸VMC橙出率 洼I-qlr之州并椅箍,,一l_l一【 2.3垒血中(sHPx活性用低硒,补硒饲料喂养 处死小鼠进行实验观察 1.5观察指标(1)心肌光镜结果(2)小鼠病毒性 心肌炎(VMC)梭出率(3)全血中GSHPx活性:按 荣征星等微量全血法进行.(4)肝脏组织IP()的 含量:采曰TBA荧光测定法-- 1.6统计处理计数资料采用x检验,计量资料 用f检验. 2结果 21肌光镜结果低硒病毒组鼠感染CVB4’病 毒后7d.光镜下可见心肌细胞变性坏死,肌纤维溶 解消失,少量炎细胞浸润(主要是单核细胞和淋巴细 胞).形成散在灶状坏死和炎性病灶,病灶多位于左 室壁中层,见图l补硒病毒组可见心肌外膜下有少 量点片状炎性病灶,有以淋巴细胞为主的炎细胞浸 润,见图2,低硒对照组,朴硒对照组鼠心肌组织均 未见病变. 图!补硒病毒组心肌光镜观察结果6B× 4周后.在感染CVB4’后,分别测量全血中GSH—Px 活性,可见低硒组与补硒组之间差异有显着意义;接 种病毒后全血中GSHI,x活性降低,病毒组与对照 组之间差异有显着意义.见表2 表2小鼠全血中(rs?1]x活性洲定结果 往:,]组与I封l比较,I_l_一I;I,组与I.Be组比较.f】 l1. u1 ? 102?中国地方葙学杂志第2l卷 2.4肝脏组织I,PO的含量低硒组肝脏组织IP() 的含量明显高于补硒组,并且接种病毒后肝脏组织 IP()的含量也高于相应对照组见表3 表3/1,鼠肝脏组织IA,O的音量 住:】?组与?.?组比较,P<0.0 3讨论 硒是维持人类健康所必需的微量元素既往研 究克山病病区人群内外环境均处于硒缺乏状 态,因此说明硒在克山病的发病中起着重要作用.在 病区人群补硒有效地预防急型,亚急型克山病的发 生.但低硒尚不能解释克山病的年度高发,季节 高发的规律既往从克山病人分离到多株病毒,近年 来用分子病毒学的方法证实大部分克山病尸检心肌 中检出CVB病毒的RNA,从而提示克山病的发生 可能为低硒加肠道病毒特别是CVB病毒感染的模 式. 率实验所用的病毒为长期在实验室传代保存的 Nancy株CVB4病毒,经注人低硒鼠体内传代,从心 肌中分离到的经鉴定仍为CVB4病毒实验结果证 明该病毒感染4周龄昆明雄性仔鼠7d后处死,无论 低硒喂养和补硒喂养组均出现心肌病变.既往研究 证明Nancy株CVB.I致病力较弱.有报道用Nancy 株CVB4感染NIH/SWISS5,7d龄乳鼠.其心肌 炎发病率平均为21.5,病死率为19本实验 用CVB4’感染4周龄昆明雄性鼠成功复制心肌炎模 型,说明该病毒已在低硒鼠伴内毒力得到增强,可能 与发生突变有关.这与Beck所报道的CVB3/0在低 硒鼠体内由无毒株突变为有毒株,发生6个位点的 突变相一致. 在实验中所用的动物,病毒与剂量均一致.只有 饲料中含硒量不同,结果低硒病毒组小鼠病变均为 多发性局灶性心肌坏死,炎性细胞浸润较少,病变检 出率明显高于补硒组由于硒缺乏小鼠GSHPx活 性下降,导致氧自由基及脂质过氧化物的大量堆积, 已构成对心肌损伤的亚临床状态.硒缺乏时病毒在 小鼠心肌中的滴度增加,毒力增强,对心肌直接溶 细胞作用增大是导致低硒组病变加重的原因之一, 而病毒对心肌的损伤又加重了组织中脂质过氧化物 及氧自由基的进一步堆积,也是其中的原因 参考文献] [1:李广生低硒丑相关固素与克山病[M].长春:吉林科学技术 出版牡.I997.0002l? [2]于维汉,曾宪惠周葆韧,等贫硒富锰教大鼠心肌损伤丑其保 护因素的窭验研究1]]中国地方病学杂志199】】0(1):17. L3]富德谢云王晶等硒和氧基酸同时缺乏在克山病发 病中的意义ljJ.中国地方病学杂志I992]1(5):267 l4]钟学宽,张风民江自然,等掉位变法探讨柯萨奇病毒B组 病毒与云南亚急型克山病的关系J].中国地方病学杂志, lg93,l2【4):193 La]李延文,橱英珍陈灏珠,等克th病心肌蜡块标本的晒道病毒 RNA的检侧lj].中华医学杂志,19g5.73(6):344. [6:BeckMA.KolbeckH:,ShiQ”fncreasedvirulenceofa hui~nnterovLrus(eoxsackievirusB3)inse[enlumdeficient mice.口]JInfectI)is,1994.70(3j:35l357. iv]BeckMARapidgenomicevo[udonofanon-virulenteoxsack ievirusB3inselenium—deficientmice:J]BiomedEnvironSci, 199710(23)307-315 :8]钟学宽,周争望.高彦辉,等.低硒小鼠柯萨奇B组病毒重叠感 染与心肌损伤关系的研究[J中国地方病学杂志,2001.20 (i):j8 :9荣征星.j慧中,鲍景奇等.小鼠全血中答胱甘肚过氧化物酶 活力的微量测定往1]j.生物化学与生物物理进展1994,21 (4)=362366 flo]采嘉丽.奚为乎.蘖蕾等血和组织中脂质过氧化物测定法 TBA荧光分光光度}击_j].中#医学检验杂志,1987,10(1): 24. [1]j陈君石.u服亚硒酸钠预防克山病发病的研究[J]营养. i982.4f3):243-249 []2李家宜,孙国贤小鼠病毒性心肌炎[M:.哈尔滨:黑龙江科 学技术出版牡,19g3.2629