高效液相色谱-蒸发光散射法测定驴胶补血颗粒中黄芪甲苷的含量

高效液相色谱-蒸发光散射法测定驴胶补血颗粒中黄芪甲苷的含量 高效液相色谱-蒸发光散射法测定驴胶补血 颗粒中黄芪甲苷的含量 时珍国医国药2007年第18卷第1期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2007VOL.18NO.I (重庆)0.6g9份,分别按样品中总葸醌含量的80%,100%和 120%精密加入对照品,每个梯度3份.按照2.2.1项下制备供 试液,按2.3项下方法操作,测定,计算回收率.结果见1. 表1回收率实验 样品号古加对量量平收率R%SDragtrt/mg,m/IIlgJ? 2.9样品含量j|f定精密量取供试品溶液各2ml,按2.3项下方 法同法操作,计算,即得.样品的含量测定结果见表2. 3讨论 3.1从线性,稳定性,精密度,重复性及加样回收率等实验结果 可以看出用紫外分光光度法测定决明子中葸醌类成分的含量准 确性高,重现性好,方法简便易操作. 裹2不同产地决明子含量测定结果% 3.2本文中作者首次采用聚酰胺树脂对决明子药材蒽醌类成 分进行纯化,使样品与对照品溶液的扫描图最大吸收波长一致, 更准确地反应决明子药材中蒽醌类成分的含量. 3.3本实验过程中水解条件对蒽醌类成分含量影响较大,实验 的水解条件经过筛选得出,笔者将另文列出. 参考文献: [I]陆惠英,吴银生.分光光度法测定决明子中的蒽醌类成分[J].苏州 医学院,1999,19(5):510. [2]国家药典委员会.中国药典,I部[S].北京:化学工业出版社, 2005:附录VA. 高效液相色谱一蒸发光散射法 测定驴胶补血颗粒中黄芪甲苷的含量 马淑杰 (吉林省松原市中心医院138000) 摘要:目的建立驴胶补血颗粒中黄芪甲苷的含量测定方法.方法采用高效液相色谱 (HPLC)法,蒸发光散射检测器, 色谱柱采用安捷伦Cl8(4.6mm×250mill,5)柱,乙腈.水(37:63)为流动相,流速为 1.0ml,柱温为40~C,漂移管温 度105~C;载气流速为2.7ml?min,.结果结果表明黄芪甲苷进样量在2.505— 12.525g范围内呈良好的线性关系, 相关系数为0.999l,平均回收率为100.1%,RSD为0.54%(=6).结论该方法简便,准确, 重现性好,可作为该制荆的 质量控制. 关键词:高效液相色谱一蒸发光散射法;驴胶补血颗粒;黄芪甲苷 中图分类号:R284.2文献标识码:A文章编号:1008.()805(2007)01-0098-02 DeterminationofAstragalosideinLvjiaobuxueGranulebyHPLC—ELSD MAShu-jie (DepartmentofMedicament,SongyuanCentralHospital,138000,China) Abstract:0bjectiveToestablishanHPLC— EI_SDmethodfordeterminationofastragalosideinLvjiaobuxueGranule.Methods WithAgilentXDBCl8(4.6mmx250mm,5trm),acetonitrile— water(37:63)wasusedasthemobilephase,thetemperature ofdrifttubeWas105?.ResultsThelinearityWasobtainedfrom2.505, 12.525g(r=0.9991).Theaveragerecoverywas 100.1%withRSD=0.54%(,l=6).ConclusionThemethodissensitive,simple,specificandac curatefordeterminationofas' tragalosideinLvjiaobuxueGranule. Keywords:HPLC—ELSD:LvjiaobuxueGranule;Astragaloside 驴胶补血颗粒由阿胶,黄芪,党参,熟地黄,白术,当归等组 成,具有滋阴补血,健脾益气,调经养血之功效.主要用于久病体 虚,血亏气虚,妇女血虚,经闭,经少等症.方中黄芪具有益气养 血的功效,而黄芪甲苷是其中主要化学成分.本文采用高效液相 色谱一蒸发光散射器法对黄芪甲苷含量进行研究. 1仪器与试药 日本岛津LC一2010C高效液相色谱仪,class—vpver.6.I色 谱数据处理工作站;AlhechELSD2000ES.驴胶补血颗粒(湖南 收稿日期:2006-05-II;修订日期:2006-II-20 作者简介:马淑杰(1974?),女(满族),吉林辽源人,现任吉林省松原市中 ? 医院主管药师,学士学位,主要从事临床药学与药品不良反应监测 工作, ? 98? 九芝堂股份有限公司);乙腈为色谱纯,水为重蒸水(新鲜制备), 其余试剂均为国产纯.黄芪甲苷对照品(批号0781— 200109,中国药品生物制品检定所). 2方法与结果 2.1色谱条件与系统适用性实验色谱柱:用十八烷基硅烷键合 硅胶为填充剂(安捷伦C4.6mmx250mm,5m);流动相为 乙腈一水(37:63);流速1.0ml;进样量15ILl;ELSD参数:漂移 管温度105~C;载气流速2.7ml?min,;柱温40~C.理论板数按 黄芪甲苷峰计算应不低于4000.用蒸发光散射检测器检测. 2.2洛液制备 2.2.1对照品洛液的制备精密称取黄芪甲苷适量,加甲醇制成 0.5mg/ml的溶液,即得. 2.2.2供试品洛液的制备取本品细粉约10g,精密称定,置索 蜩 0 叭 4?02?m耋!m }罢善!l晷蟠啦掰啪螂 mm仉m仉仉 抛m抛啦拨抛 mmmmm 猫m?mm?斯 仉仉mm仉m LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2007VOL.18NO.1时 珍国医国药2007年第18卷第1期 氏提取器中,加甲醇40ml,冷浸过夜,再加甲醇适量,加热回流4 h,提取液回收甲醇并浓缩至干,残渣加水10ml,微热,使溶解,加 水饱和的正丁醇振摇提取4次,40ml/次,合并正丁醇液,用氨试 液振摇提取2次,40ml/次,弃去氨液,正丁醇液蒸干,残渣加水5 ml使溶解,放冷,通过已处理好的D101型大孔吸附树脂(内径 1.5cm,长12cm),以水5Oml冲洗,弃去水洗液,再用40%的乙 醇3Oml洗脱,弃去洗脱液,继用70%的乙醇8Oml洗脱,收集洗 脱液,蒸干,用甲醇溶解并转移至5ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇 匀,即得. 2.3测定法精密吸取对照品溶液10,2ol,供试品溶液15l, 注入液相色谱仪,测定,以外标两点法对数方程计算,即得. 2.4方法学考察 2.4.1流动相的选择分别以甲醇一水(4|0:60),乙腈一水一四氢 呋喃(33:67:4),乙腈一水(32:68)及乙腈-水(37:63)为流动 相.结果表明,以乙腈一水(37:63)为流动相,色谱峰分离效果最 佳,无干扰,且保留时间短,故选用该流动相. 2.4.2柱效的考察按正文方法测定,得到芍药苷对照品以及供 试品的色谱图(见图l一2).暂定理论塔板数黄芪甲苷峰计算应 不低于4000. t/min 圈1对照品溶液色谱圈 f/min 圈2样品色谱圈 2.4.3阴性干扰实验按本品处方工艺及正文供试品溶液制备 方法制备不含黄芪甲苷的阴性对照溶液,按正文含量测定方法进 行测定,所得到的色谱图中,在与黄芪甲苷对照品峰相应的保留 时间位置无干扰峰检出,即阴性无干扰.见图3. f/min 圈3阴性干扰色谱图 2.5线性关系考察精密称取对照品黄芪甲苷20.o4mg,置l0 Tnl量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,再精密量取2.5ml, 置l0ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液.分 别精密量取5,10,15,2o,25,注入液相色谱仪,以峰面积的常 的常用对数进行线性回归,得回归方程:,, 用对数对进样量() =1.049X+6.380(r=0.9991).结果表明黄芪甲苷进样量在 2.505—12,525p,g范围内呈良好的线性关系. 2.6精密度实验取同一浓度(0.501mg/m1)黄芪甲苷对照品溶 液,按色谱条件连续进样5次,进样量20l/次,峰面积, RSD为0.71%.结果表明本法精密度较好. 2.7稳定性实验取本品细粉10.002g,按正文含量测定方法制 备供试品溶液,按正文色谱条件每隔6h进样1次,进样20~l/ 次,记录峰面积,RSD为2.11%,结果表明供试品溶液在24h内 稳定性较好. 2.8重现性实验取同一批号(批号050205)样品,按正文含量 测定方法,分别配制6份供试品溶液进行测定,计算含量,RSD为 1.14%.结果表明本法具有良好的重现性. 2.9加样回收实验分别取重现性实验项下用样品(含量为 0.2367mg/g)约7g,共6份,精密加入黄芪甲苷对照品溶液1.0 Tnl(0.501mg/m1),按正文含量测定方法中供试品制备方法制各 样品,测定.结果见表1.结果表明方法的准确性较好. 2.1O样品测定分别取5个批号的样品,按正文含量测定的方 法进行测定,计算含量.结果见表2. 表1加样回收率测定结果 n=6 衰2样品含量测定结果 3讨论 3.1据文献记载J,黄芪甲苷含量测定方法很多,有比色法, 分光光度法,薄层扫描法,高效液相色谱法等,但由于黄芪甲苷仅 在200nm波长处有微弱吸收,因而干扰大,灵敏度低.ELsD为 通用型质量检测器,特别适合无紫外吸收的化合物的含量测定, 目前在黄芪等含皂苷类药材及制剂等药品质量控制中使用较 多J,具有灵敏度高,结果可靠的优点.因此笔者采用了HPLC — ELSD法对驴胶补血颗粒中黄芪甲苷的含量进行了测定. 3.2实验中选用乙腈一水(37:63)及乙腈一水一四氢呋喃 (33:67:4)为流动相,二者均达到了满意分离效果,黄芪甲苷 峰与相邻峰分离度大于1.5,理论塔板数以黄芪甲苷峰计算均大 于4000,综合考虑,在测定中选用己腈一木(37:63)为流动相 3.3结果表明,该法操作简便,重现性好,可用于驴胶补血颗粒 的质量检测. 参考文献: [1]池玉梅,姜海英.HPLC士差折光检测测定黄芪及其注射液中黄芪 甲苷含量[J].中国药学杂志,2001,36(1):49. [2]徐希科,李慧粱,柳润辉,等.HPLC—ELSD法测定黄芪药材中黄芪 甲苷[J].中草药,2005,36(11):1720. ? 99?