胃舒胶囊促进幽门螺杆菌感染大鼠胃粘膜修复的作用研究

胃舒胶囊促进幽门螺杆菌感染大鼠胃粘膜修复的作用研究 胃舒胶囊促进幽门螺杆菌感染大鼠胃粘膜 修复的作用研究 490陕西中医2007年第28卷第4期 ? 实验研究? 胃舒胶囊促进幽门螺杆菌感染大鼠胃粘膜修复的作用研究 王永红河北省邯郸市中心医院(056001) 马志红牛丽颖李仁玲王鑫国?河北医科大学中医学院(050091) 李向军刘敏彦石家庄以岭药业有限公司(050035) 摘要目的:观察胃舒胶囊对幽门螺杆菌相关性胃炎的治疗作用.方法:用平板掺入 法测定了胃舒胶囊及其主要成分对幽门螺杆菌的最低抑菌浓度.在制备的幽 门螺杆菌相关性胃炎模型上观察了胃舒胶囊在体内促进幽门螺杆菌感染大鼠 胃黏膜修复的作用.结果:胃舒胶囊在体外对幽I'1螺杆菌有明显的抑茵作用, 其最低抑茵浓度(MIC)为0.00298(g/m1).在体内,可明显改善幽门螺杆菌感 染大鼠的胃黏膜组织学变化,有促进胃黏膜修复的作用.结论:胃舒胶囊对幽 门螺杆菌相关性胃炎有治疗作用. 主题词胃舒胶囊/药理学大鼠 自1982年幽门螺杆菌(HP)被分离培养以来,经2O 年研究,目前已证实HP感染是慢性胃炎,消化性溃疡的 最主要病因,是胃癌和胃淋巴瘤发生的重要因素之一[1]. 胃舒胶囊临床上用于慢性胃炎及消化性溃疡的治疗,效 果颇佳.为观察其治疗幽门螺杆菌相关性胃炎的作用,本 课题通过体外试验测定了其最低抑菌浓度,同时在制备 幽门螺杆菌感染的模型基础上,观察了胃舒胶囊在体内 促进幽门螺杆菌感染大鼠胃黏膜修复的作用,为胃舒胶 囊的临床应用提供理论依据. 11.1实验药物胃舒胶囊(O.4g/粒,由黄芪 20g,蒲公英,白芍各30g,甘草15g等药组成,经5O%乙醇 提取制成胶囊剂);5NaHCOs由本室自配,尿素酶试纸 购自福建三明蓝波生物技术研究所. 1.2实验动物Wistar大鼠,雌雄不拘,体重12O一 140g,二级,合格证号:冀医动字04057号,由河北省实验 动物中心提供. 1.3菌株幽门螺杆菌采用国际统一的SS1 (Sydneystrain1)菌株,经鉴定CagA(+)和VacA(+), 购于中国药品生物制品鉴定所,本室超低温保存. 1.4培养基及菌液准备将SS1菌株复活后,接种 于改良的布氏琼脂培养基(含10%脱纤维羊血),在适宜 条件下,培养72h,根据菌落特征,革兰氏染色及生化反 应,确定幽门螺杆菌.用布氏肉汤洗下纯培养72h的幽门 *河北省科技厅资助课题(项目05276453) ?通迅作者 螺杆菌菌液备用. 2实验方法2.1体外幽门螺杆菌抑菌试验 2.1.1制备含药琼脂平板将受试物按倍比稀释配 制不同药物浓度的培养基,加热,调至各自所需pH值.1O 磅30min灭菌,冷至45?.倾注成无菌平板(平皿d一 65mm,10ml/平皿),最终使培养基中含受试物原液(O. 38g/m1)的稀释倍数分别为1:2,1:4…….1:1024. 同时做空白对照培养基. 2.1.2接种取传至第3代的幼龄菌,分别用生理盐 水按比浊管校正浓度为108cfu/ml的待检菌液,分别 接种于不同倍比稀释的各自含药琼脂表面,同时接种平 行点3点,使每点含2tA菌液,每一接种点的液滴直径为5 8mm.待接种点干燥后,翻转平板于36?恒温培养箱培 养72h观察结果.同时做空白对照,判定标准:以不出现 菌落的琼脂平板上的最低稀释受试物浓度为其最低抑菌 浓度MIC. 2.2体内对幽门螺杆菌感染的治疗作用 2.2.1模型制备:参照文献[2]的方法略加改动.大鼠 8O只,随机抽取其中1O只作为正常对照组(不感染,不治 疗),其余动物进行造模:在禁食12h后,先给动物灌胃 5NaHCO.溶液2ml/只.15min后灌胃幽门螺杆菌菌液 1.5ml/只.30min后给食.每周感染1次,共5次.于末次 感染后1周,取尾血进行血清学检查,查抗幽门螺杆菌相 关成分抗体,抗体阳性者视为造模成功. 2.2.2分组与实验方法:选择抗体阳性的动物共6O 只进入治疗实验,将造模动物随机分为4组,即模型对照 陕西中医2007年第28卷第4期 组(15只),胃舒胶囊低剂量组(i5只),胃舒胶囊中剂量 组(15只),胃舒胶囊高剂量组(15只).治疗组给药量分 别为0.28g/kg,0.56g/kg,0.84g/kg,配成相应浓度,均按 1.0ml/100g灌胃给药,模型对照组以等体积蒸馏水灌胃, 每日1次,共10d. 2.2.3动物的处理:实验期问,各组动物常规饲养, 定期观察动物一般情况,包括动物的精神状态,活动情 况,毛发光泽度及食欲.每周测1次体重. 给药结束1个月后进行有关指标检测.禁食24h后, 采取脱颈椎的方法处死动物,无菌操作取出鼠胃,沿胃大 弯剪开胃腔,用生理盐水冲洗胃腔,自幽门端相对固定部 位取胃组织用于病理组织学检查,光镜下观察胃组织的 病理学改变,并根据2000年全国慢性胃炎研讨会共识意 见的诊断标准为依据[3],进行组织学评分. 3结果3.1体外幽门螺杆菌抑菌试验结果见 表1.由结果可见,胃舒胶囊及其主要组分药对幽门螺杆 菌均有明显的抑菌作用,胃舒胶囊的最低抑菌浓度(MIC) 为0.00298(g/m1),其主要成份药的MIC分别为;蒲公英 提取物为0.00129,黄芪提取物为0.0103,自芍提取物为 0.00258,甘草提取物为0.0206,紫苏提取物为0.00258, 黄连提取物为0.00129. 表1体外对幽门螺杆菌抑茵结果 受试物最低抑菌浓度(MIC,g/m1) 胃舒胶囊 蒲公英提取物 黄芪提取物 白芍提取物 甘草提取物 紫苏提取物 黄连提取物 0.00298 0,00129 O.O1O3 0.00258 0.0206 0.00258 O.OO129 3.2各组动物一般情况:正常对照组大鼠活动灵 敏.被毛光泽,食量较大,体重增长较快;模型对照组大鼠 一 般情况较差,活动迟缓,毛色无光泽,食量小,体重增长 缓慢,形体较小.各治疗组较模型对照组的情况有明显改 善,食量较前增加,体重渐回升,尤以胃舒胶囊高剂量组 的情况改善较明显. 3.3治疗幽门螺杆菌后对胃窦部黏膜组织学的影 响 3.3.1肉眼观察:正常对照组大鼠胃黏膜呈粉红 色,表面平整光滑,胃壁肌张力较强.模型对照组动物胃 黏膜颜色较浅或暗红色,表面缺少光泽,胃壁肌张力较 差.各治疗组胃黏膜呈淡红色或暗红色,胃壁肌张力较模 型组有不同程度的改善. 3.3.2光镜观察胃黏膜炎症变化:正常对照组大鼠 胃黏膜上皮完整,固有层内有密集排列的腺体,部分大鼠 胃窦部的黏膜底部可见极少量散在的淋巴细胞(见图1). 模型对照组大鼠胃窦部的炎症程度较重,固有层内可见 较多的淋巴细胞,嗜酸性粒细胞及中性粒细胞浸润,但未 见黏膜的糜烂,出血和溃疡等改变(见图2).各治疗组动 物的胃窦部炎症均较模型对照组有所减轻,其中胃舒胶 囊高剂量组的动物炎症几乎全部消失(分别见图3,5). 图1正常组大鼠胃黏膜(HE2O×10) 图2模型对照组大鼠胃黏膜(HE20×10) 图3胃舒胶囊低剂量组大鼠胃黏膜(}{E2O×10) 492 图4胃舒胶囊中剂量组大鼠胃黏膜(HE20X10) 图5胃舒胶囊高剂量组大鼠胃黏膜(HE2OX10) 3.3.3组织学评分:慢性炎症评分:结果见表2.由 表2可见,与模型对照组(1.72士0.46分)比较,各治疗组 的慢性炎症评分均有明显下降.与模型对照组比较,胃舒 胶囊低剂量组(O.87士0.74分),胃舒胶囊中剂量组(O.73 ?0.88分)和胃舒胶囊高剂量组(O.27士0.46分),均P< 0.05,有显着性差异. 急性炎症评分:结果见表2.由表2可见,与模型对照 组(1.28土0.58分)比较,各治疗组的急性炎症评分均有 明显下降.与模型对照组比较,胃舒胶囊低剂量组(O.47 ?0.52分),胃舒胶囊中剂量组(O.47士0.51分)和胃舒胶 囊高剂量组(O.2O士0.41分),均P<0.05,有显着性差 异. 表2治疗幽门螺杆菌后对胃窦部黏膜 组织学的影响(?s) 与模型对照组比较:*P<O.05,**P<O.01 4讨论由幽门螺杆菌(HP)引起的胃炎约占慢 性胃炎的8o%左右.幽门螺杆菌的特殊结构及其多种致 陕西中医2007年第28卷第4期 病因子可从不同方面引起胃黏膜炎症.HP可通过多种作 用机制损伤胃黏膜,如释放多种致病因子如细胞毒素,尿 素酶,脂多糖,溶血紊等直接破坏上皮细胞的完整性,造 成细胞变性;亦可引起胃粘膜上皮局部的炎症反应,致机 体释放大量的细胞因子,通过免疫病理反应,造成黏膜细 胞损伤;这些慢性炎症还可诱导细胞的增殖和凋亡,或使 二者的平衡紊乱,而致细胞恶性转化.目前认为根除幽门 螺杆菌后,可以减轻临床症状,改善胃黏膜的病变,并能 加速溃疡愈合,明显降低溃疡复发率. 由于幽门螺杆菌定位在胃粘膜上皮表面粘液层下, 受到粘液的保护,影响了局部药物的作用,另外胃内和胃 粘膜的pH值范围较大,也影响了一些药物的稳定性,所 以一些体外实验对幽门螺杆菌有效的药物在人体内不一 定有效,而且终止治疗后幽门螺杆菌感染的复发率很高. 联合用药可使根除率大大提高,复发率降低,但又产生很 大的副作用,而且病人腹胀,暖气,纳差等症状改善较慢. 经过长期的医疗实践证明,中医药治疗慢性胃炎,消化性 溃疡的疗效肯定,愈后复发率低,且副作用少,长期应用 不会产生耐药性.大量的实验研究也证明中医药对提高 幽门螺杆菌根除率,减少药物副作用,增强胃粘膜保护, 提高溃疡愈合质量方面均有良好的作用.因此,发挥祖国 中医药学的优势,寻找一种能标本兼治的中成药具有十 分重要的意义. 胃舒胶囊由蒲公英,黄芪,白芍,甘草等药组成,具有 益气健脾,舒肝和胃,清热解毒之功.本次实验的结果表 明,该药体外对幽门螺杆菌有明显的抑制作用,体内可促 进幽门螺杆菌感染大鼠胃黏膜的修复作用,并呈量效关 系,是治疗幽门螺杆菌相关性胃炎的一种有效药物.结合 我们前面所做的试验[4],可推断胃舒胶囊治疗幽门螺杆菌 相关性胃炎的作用一方面与直接抑制细菌的生长繁殖有 关,也与该药增加胃黏膜的自身防御功能有很大的关系, 是通过多种机制发挥治疗作用的. 参考文献 [1]Internationalagencyforresearchoncancer (IARC).Sehistosomes,liverflukesandHelicobacter pylori.Monograhsontheevaluationoncarcinogenic riskstohumans,IARC,1994,61:177,240 [2]陈晶晶,姚楚净,庄韬等.幽门螺杆菌对大鼠的 实验性感染.中华医学杂志,1991,71(1O):59O,591 [3]中华医学会消化病学分会.全国慢性胃炎研讨 会共识[J]中华消化杂志,2000,20(3):199 [4]王永红,蔡拉平,马志红等.胃舒胶囊治疗幽门 螺杆菌相关胃炎的疗效观察.[J]河北中医药,2006, 21(3):37,38 (牧稿2006—06—15;修回2006—11-07)