【doc】下食管括约肌细胞的特点

【doc】下食管括约肌细胞的特点 下食管括约肌细胞的特点 CHINESEJOURNALOFANATOMYVo1.26No.62003解剖学杂志2003年26卷6 期 染色者为VEGF蛋白表达阳性. 1.4统计学处理VEGF蛋白表达与胃癌临床病理指 标间关系用检验. 2结果 2.1VEGF蛋白表达50例胃癌中VEGF表达阳性 率为46.0%(23/50),其表达具有明显的异质性,强阳 性染色的癌细胞多位于浸润前缘,某些血管内皮细胞呈 弱阳性染色,正常胃组织未见VEGF阳性表达. 2.2VEGF蛋白表达与胃癌临床病理指标间关系胃 癌高,中,低分化组VEGF蛋白表达率无明显差异(P> 0.05);浸润超过固有肌层组(14/22,63.6%)与未超过 固有肌层组(9/28,32.1%)相比有显着差别(P< 0.05);有淋巴结转移组(16/24,66.7%)与无淋巴结转 移组(7/26,26.9%)相比存在显着差别(P<0.01),胃 癌患者术后生存年限大于5年组(11/32,34.4%)与小 于5年组(12/18,66.7%)之间VEGF阳性表达率有显 着差别(P<0.05). 3讨论 正常情况下VEGF受体表达水平很低,大多数组 织检测不出.肿瘤细胞是肿瘤组织中VEGF的重要来 源[,VEGF可促进不同来源的内皮细胞分裂增殖和血 管构建,为肿瘤的生长提供营养,改变内皮细胞的基因 表达,并产生血浆纤溶酶原激活剂和胶原酶,促使癌细 胞向邻近纤维蛋白和结缔组织基质扩散.本实验结果 50例胃癌组织中VEGF表达阳性率46%,且强阳性染 色的癌细胞多位于浸润前缘.肿瘤外周组织VEGF-C 引起淋巴管扩大L5j,扩张的淋巴管可以收集间质液和从 肿瘤表面渗出的转移肿瘤细胞,促成了淋巴管转移,实 验结果提示vEGF蛋白表达与胃癌组织学分型无关; 浸润深度越深阳性率越高;有淋巴结转移组阳性率高; 胃癌患者术后生存年限越长阳性率越低.VEGF蛋白 表达可以作为胃癌组织发展与预后的预测指标,并为肿 瘤的抗血管生成疗法提供理论依据. 参考文献 1CarmelietP.Impairedmyocardialangiogenesisandischemic cardiomyopathyinmicela出ngthevascularendothdM growthfactorisoformsVEGF164andVEGF188.Nature Med,1999,5(5):495502. 2MiquerdL,LareBL,NagyA.Embry~cdevelopmentis disruptedbyn'O:l~tincree.sesinv-~oAarendothe~factor geneexpression.哪ent,2000,127(18):3941—3946. 3LarcherF,MurillasR,BolontradeM,eta1.VEGF/VPF overexpressioninskinoftransgenicmiceinducesangiogenesis, vascularhyperpermeabihtyandacceleratedttlnlordevelop— lTlel'lt.Oncogene,1998,17(3):303—311. 4田学军.吴健,孟麟,等.VEGF的单抗制备及胃癌细胞 MGC8O3表达VEGF的鉴定.中华肿瘤杂志,1999,21 (2):93—95. 5JeltschM.HyperplasiaoflymphaticvesselsinVEGF-Ctrans— genicmice.Science,1997,276(5317):1423—1425. 下食管括约肌细胞的特点 宁守斌张忠兵谢谓芬 (第二军医大学附属长征医院消化内科,上海200003) 下食管括约肌(U)是连接胃一食管的一段肌肉组 织,在其腔内形成高压区,具有极为重要的生理功能. U强无解剖学意义上的括约肌结构,但为什么具有括 约肌样的功能?组成LES的平滑肌细胞与食管其他部 分的平滑肌细胞在细胞形态及生理功能上有何差别? 本实验借鉴以往的胃肠道平滑肌培养方法L1.2],探索了 猫LES细胞的分离与培养方法,并初步比较了食管下 括约肌与食管体部平滑肌细胞在形态学上的异同. 1材料和方法 1.1分离培养LES组织取材参考文献[]并加以改 进:家猫一只(3600g,购自第二军医大学实验动物中 心),氯胺酮肌肉注射麻醉,胃镜插入食管测量齿状线 距后唇中点的距离(约27.5crn),食管测压确定LES 位置(距后唇中点约25.5crn至27crn处有长约1.5 cm的一段食管可测到3.2kPa左右的压力,该段组织 ?--—— 613?--—— 应为LES).胸腹联合剪开暴露食管,纵向剪开食管下 螭.可见明显的齿状线.根据测压确定的位置取1廿n 长的LES组织.另取,段长约1cm的下段食管组织 作为对照.将两块组织迅速用PBS清洗3遍,含庆大 霉素(1O?U/ra1)的D-Hanks液漂洗两遍仔细剪去 黏膜及黏膜下层,小心剥离内层环行肌及外屡纵行肌 条.剪成约2m小块,移人一无菌的l5离心管 中.加4ml0.1%胶原酶(I型.Sigm~公司,美国), 0.01%胰蛋自酶抑制剂于31?消化,30--45rain至组 织呈絮状,吸管反复吹打,用500m的分子筛过滤. 用古15%小牛血清的高糖(12rmnoi/L)DMEM(Gibco 公司,美国)培养基将细胞数调至2×10,接种于培养 瓶中,置于37"C,5%0的孵箱内培养.48h后更换 吉10%/b牛血清的高糖DMEM,以后每3d换1次培 养演.细胞融合80%时用005胰蛋白酶+0.02E1)一 TA消化渡消化,以1:3传代. 1.2形态学观察及鉴定用倒置相差显馓镜(Leica 公司,德国)观察细胞形态及生长方式;取对数生长期 的细胞.消化后离心收集,包埋切片后用透射电镜观察 培养细胞的超微结构特征;细胞爬片固定,以平滑肌特 异的reactin免疫细胞化学染色鉴定培养细胞的性质及 纯度;取部分消化分离的细胞,台盼蓝染色检查细胞的 存活辜. 2结果 2.1台盼蓝染色LES细胞及食管体部平滑肌细胞 存活率均大于94%. 2.2细胞的光镜及电镀观察光镜观察:培养16h细 胞开始贴壁生长,24h后细胞逐渐伸展,并分裂生长. LES细胞与食管体部细胞相比.在形态,大小及生长方 式上无明显区别细胞呈梭形,条状或细长的三角形. 其内有一个卵圆形的细胞棱,胞质均匀透明.细胞呈 柬状,放射状生长,随着细胞数增多,细胞平行排列井 与周围的细胞互相融合,呈单层细胞生长.电镜观察: LES细胞与食管体部细胞胞膜附近可见密斑和吞饮小 泡.胞浆内有很多束状排列的与细胞纵轴平行的肌丝, 肌束之间可见密体(图1).两者的唯一差别是,与食管 体部平滑肌细胞相比,LES细胞胞浆内有较多的粗面 内质网及线粒体(图2). 2.3抗o.action免疫细胞化学染色显微镜下可见 —— 614 95%以上的细胞染色阳性.胞浆中沿细胞纵轴密集排 列的束状肌丝被染成棕黄色,细胞棱没有着色. 圈1LEs细胞.x30000 图示柬状排列的与细胞纵轴平行的肌墼 肌丝柬之间可见密体 围2【J瞵胞.×9OO0 细胞中有较多的粗面内质网及线粒体 参考文献 .CtureddrcLlIar 1KaoHWFmnSE.GownAM,矗 mxloothmu~[etrc~ntherabbitcolon.InVitroCellDevBi0【. L粥8,24):787—794 2YuaaQ)(.MeRohertsJA,LaksJ】rrI昌删J,a2.NeMx~"a rabbitgastric~cnoothmuscleod【culture:EGFand1GF_?m-e pote~ltmit~gensJPediatrGosti~enlerO【Nutr,1993-'7 (2):1:53—160 3T6tmapA,SvaneD.FormanANitricoxideHa岫 N,~NCiahibtioajnq柏?^?nD叫sphincter,AmJ Ph~ot.1991.2卯(3pt1):G385一G389.