环境内分泌干扰物对罗氏沼虾生长发育及组织结构的影响

环境内分泌干扰物对罗氏沼虾生长发育及组织结构的影响 环境内分泌干扰物对罗氏沼虾生长发育及组织结构的 影响 密 级: 国内图二分类号: 哪.弓斗.弓 国际图分类号: 保密期间: 鸯 全日制硕士学位论文 环境内分泌干扰物对罗氏沼虾生长发育及组 织结构的影响 硕士研究生 薛海波 指 导 教 师 李广丽教授 别 学 位 类 理学 学 科 海洋生物学 研 究 方 向 海洋经济动物发育生物学 培 养 单 位 水产学院 授予学位单位 广东海洋大学 论文提交日期 年月日, 、 一‘ : : 及劢.据 : ...: ’ . : :. : : : :广东海洋大学 学位论文原创性声明 本人郑重声明:所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取 得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外,本论文不包含任何其 他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个 人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果 由本人承担。 作?:磷净皮仲年多月『日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的,同意学 校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查 阅和借阅。本人授权广东海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入 有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本 学位论文。 年解密后适用本授权书。 本学位论文属于、保密口,在 、不保密团。 请在以上相应方框内打“ 年窍日 怍导者师签签 名名 年旯日 边产 友两 版豸 葩茅环境内分泌干扰物对罗氏沼虾生长发育及组织结构的 影响 摘 要 本实验通过外部形态观察和组织学连续切片,研究了环境内分泌干扰物壬基 酚 和三丁基锡对罗氏沼虾生长发育、性腺分化及组织结构的影响,旨 在探索环境污染对经济虾类毒性及生殖损害等影响,建立经济甲壳动物污染 的危险 评价体系。主要结果如下: .在水温~?条件下,罗氏沼虾幼虾和成虾暴露在中的半致死浓 度分别为“和‖,安全浓度分别为和.‖。经浓度 分别为?‖、.‖、“/和吲的暴露后,罗氏沼虾成虾鳃、 肝胰脏和胃种组织均产生异常变化。?当浓度小于.‖时鳃叶结构变得模 糊,呼吸上皮细胞增厚,上皮细胞呈残损状,鳃叶未端出现褐色沉积物;在浓 度高于‖时,鳃叶基部的上皮细胞显著增多,鳃叶被大量血淋巴细胞浸润, 严重者呈弥漫性坏死,坏死的组织散落在鳃叶术端随处可见;?当浓度小 于‖ 时,肝胰脏细胞出现空泡化现象,有些个体的肝胰脏组织出现细胞溶解现象; 当 浓度为‖时,肝胰脏细胞空泡化严重,边界模糊且细胞溶解,肝小管萎 缩,肝细胞核缩小;?浓度小于‖时,胃角质层明显增厚:浓度为吲 时,上皮组织轮廓模糊,大量上皮细胞坏死脱落。 .在水温~?条件下,经浓度为?‖、 ?‖、‖和 ‖的 暴露.,不同浓度处理组体长和体重与对照组幼虾相比变化不明显 .;处理超过,除?‖处理组幼虾体长和体重与对照组相比无显 著差异外,其他各处理组幼虾体长和体重均明显低于对照组.。但 处理对罗氏沼虾幼虾的性别比例未产生影响,无法鉴定性别幼虾的性腺处于 未发育 状态,没有发现间性的个体。 .在水温~?条件下,罗氏沼虾幼虾和成虾暴露在中的半致死 浓度分别为和心,安全浓度分别为.‖和.”‖。经浓 度分别为?‖、‖和‖的暴露后,罗氏沼虾成虾鳃、肝胰脏和 胃种组织均产生显著变化。浓度低于./时,处理组的罗氏沼虾鳃上皮细 胞出现肿胀,支持细胞中的细胞核出现萎缩,血腔中血细胞聚集;肝胰脏细胞 出现 空泡化;胃角质层出现增厚。高于“‖处理组的罗氏沼虾鳃血腔中血细胞 肿胀,鳃叶萎缩变短,其基部的普通上皮细胞增多明显,上皮细胞膜皱缩,鳃 丝增 厚;肝胰脏空泡化程度严重,细胞核消失,并出现坏死区;胃角质层上皮组织 轮廓 模糊,上皮细胞出现脱落。.在水温...条件下,经浓度为./、./和/的浓度 暴露发现,处理一时,..和.?/浓度处理组罗氏沼虾体重、 体长明显低于对照组尸.,扎浓度处理组体重、体长与对照组相比, 具有极显著差异性.。但对罗氏沼虾幼虾的性别比例未产生影响,无 法鉴定性别幼虾的性腺处于未发育状态,没有发现间性个体。 关键词:壬基酚,三丁基锡,罗氏沼虾,生长,性别比例,组织病理.. , ,, , ,. , : .. 。, . . /,. ./., ,. , .? ,, / /, ., /,/, ;?, /,., . ,;? /, , /, .. / , ,/, /,./ ?.伊. 。。./ .., . . ?, ... 、/; .、 ../. . 、 、./., , /, , , ; ; . / , , ; , .; , . . , /,../,./, ?/ , ,,, ,.“/ .,.,./ ,,尸... ,. , . :,,.,, , 目 录 前言??.. .罗氏沼虾生物学?.. .. 形念特征??.. ..生活习性 .. 食性.. 生七?.. 生殖习性??.. ..营养价值??.. .内分泌干扰物的研究进展.. .. 内分泌干扰物的种类和来源.. ..环境内分泌干扰物的危害和作用机制??.. .壬基酚对水生生物的影响? .. 的一般毒性. .. 的细胞毒性.. .. 对免疫系统的影响. .. 的激素效应. .三丁基锡对水生动物的影响.. 对水生动物生长的影响和致死作用.. 对水生动物生殖发育和遗传的影响.. 对水生动物神经和免疫系统的影响?... .. 对水生动物体内各种代谢酶的影响.研究的目的和意义.. 壬基酚对罗氏沼虾毒性效应?. .材料与? .. 材料.. 方法..数据处理.结果? .. 中毒症状..急性毒性效应 .. 罗氏沼虾成虾组织病理变化. .讨论 .. 急性毒性的影响..对甲壳动物组织结构的影响 壬基酚对罗氏沼虾生长和性腺分化的影响? .材料与方法.. .. 实验材料??.. 方法?. ..数据处理??.. .结果. .. 壬基酚对罗氏沼虾幼虾生长的影响. ..性别比例及性腺组织学检查. .讨仑? .. 壬基酚对罗氏沼虾幼虾生长的影响 .. 壬基酚对罗氏沼虾幼虾性别比例和性腺分化的影响三丁基锡对罗氏沼虾毒 性效应??. .材料与方法 .. 材料?. .. 方法?. .. 数据处理??. .结果. .. 中毒症状..急性毒性效应. ..罗氏沼虾成虾组织病理变化. .讨论? .. 急性毒性实验 ..组织病理变化.. 三丁基锡对罗氏沼虾幼虾生长和性腺分化的影响. .材料和方法. .. 材料? .. 方法? .. 数据处理.结果? .. 三丁基锡对罗氏沼虾幼虾生长的影响..性别比例及性腺组织学检查.. .讨论? .. 三丁基锡对水生生物生长的影响? .. 三丁基锡对罗氏沼虾性别比例影响. 参考文献. 图版及说明??. 致谢??.. 导师简介?广东海洋大学硕士毕业论文 前言 . 罗氏沼虾生物学 罗氏沼虾 在分类上隶属于甲壳纲、 十足目、游泳亚目、真虾派、长臂虾科 、沼虾属,又名马来西亚大虾、淡水长臂大虾, 是世界上最大的淡水虾,大量产于印度.西太平洋区域的热带和亚热带地区,生活在 各种类型的淡水或咸淡水水域中【,】。 .. 形态特征 罗氏沼虾躯体肥壮、短粗。全身分为头胸部和腹部。头胸部粗大,腹部自前向 后逐渐变小,术端尖细。雄虾个体大于雌虾,雄虾第二步足特别发达,长度超过体 长,颜色鲜艳。罗氏沼虾外披一层几丁质甲壳。甲壳在头胸部形成头胸甲,完整地 覆盖于头胸部的背面及两侧,以凹下的沟和隆起的脊为界。整个身体由节组成,。 头部节,胸部节,腹部节。头部和胸部演变进化而成头胸部,它们的体节无 法明显地区分开来。罗氏沼虾体色呈淡青蓝色并间有棕黄色斑纹,雄虾第二步足呈 蔚蓝色,但随着栖息的水域环境的不同而变化。水域透明度大,体色则淡;水域透 明度小,体色则深。 ..生活习性 罗氏沼虾营底栖生活,喜栖息在水草丛中。一般白天潜伏在水底或水草丛中厂 晚上出来觅食。摄食的方式主要用对螫足来捕捉小动物和有机碎屑。罗氏沼虾仅 能作短距游泳,主要靠腹部的对附肢和尾节划动。随着生长发育阶段的不同,它 的栖息习性也有所不同,甚至是相反。幼体发育阶段生活在具有一定盐度的成淡水 中,若放入纯淡水中,不久就会死亡。幼体喜集群生活,经常密集于水的上层,有 较强的趋光性,但又避不强光和直射光。当幼体变态成幼虾后,可在淡水中尘活, 直至成熟产卵。此虾多数分布于水域边缘,喜栖息于水草和其他固着物上, 有时在 池中缓慢游泳。罗氏沼虾具明显的负趋光性,白天多呈隐蔽状态,活动较少,但在 投饵时照样觅食。夜间活动较为频繁,觅食产卵均在夜间进行,因此在夜间捕捞往 往比白天好。 ..食性 罗氏沼虾属杂食性动物,随着不同的生长发育阶段,其要求的食物组成是不同 的。在人工饲养条件下,刚孵出的幼体主要以丰年虫幼体为食,经?次蜕皮后个 体逐渐长大,可以摄食鱼肉碎片、鱼卵、蛋黄等以及其它细小的动物性饵料,经过 淡化处理后的幼虾则转化为杂食性,主要以水尘昆虫幼体、小型甲壳类、水生蠕虫、环境内分泌干扰物对罗氏沼虾生长发育及组织结构的研究 其它动物尸体以及有机碎屑、幼嫩植物碎片为食;成虾阶段食物更杂,动物性饵料 有水生昆虫、软体动物、蚯蚓、小鱼、小虾以及各种动物尸体:植物饵料有鲜嫩的 水生植物、着生藻类、谷物豆类等。在人工饲养条件下,以人工投喂商品饵料为主, 天然饵料为辅。通常动物性饵料是鱼、虾、贝类和蚕蛹、蚯蚓等。植物性饵 料是豆 渣、豆饼、花生麸、麦麸、米糠、酒渣、浮萍、水草等。若采取高密度养殖则人工 配合饵料是最佳的食物。因为颗粒饲料是以虾体营养需要及虾的适口性加工而成 的。但颗粒饲料必须有一定的耐溶性,以避免泡水后散失造成浪费和水质污染。 罗氏沼虾虽食性很广,但其对动物饵料有偏爱,若同时投喂颗粒饵料和蚯蚓则 先摄取蚯蚓;在饥饿和放养密度大的情况下,还以同类为食,这对蜕壳虾来说,危 害是比较大的。罗氏沼虾的摄食量有着明显的季节变化,主要受水温的变化影匈。 水温~?,摄食旺盛;水温?以下,摄食量减少。 ..生长 刚孵出的罗氏沼虾幼体长.~.毫米,营浮游生活。经天培育,蜕 皮次,变态为稚虾,体长可达毫米,转为淡水栖息生活。体长达厘 米的幼虾,经过个月的饲养,雄体长达厘米以上,体重克左右;雌体 长厘米以上,体重在克左右。若将越冬后的幼体体长厘米在春天 放养,到年底雌虾可达体长厘米,体重克,雄虾可达体长 厘米,体重克。 ..生殖习性 在自然条件下,一冬龄的罗氏沼虾达性成熟。在人工养殖条件下达到性成熟的 最小个体,雌体长厘米,体重克左右;雄体长厘米,体重克左右。性 成熟的雄虾第二步足特别发达,粗而长,呈蔚蓝色。生殖孔开口子第五步足基部, 性成熟的雌虾第二步足较小,呈浅蓝色,腹部较发达,侧甲延伸形成抱卵腔,用以 附着卵。生殖孔不口在第三步足基部。性腺位于头胸甲的背部,性成熟时,通过透 明的头胸甲背面近胃区可以见到橙黄色的卵巢和乳白色的精巢。雌虾在产卵前要脱 一次壳,称生殖蜕壳。蜕壳前活动减弱,对阳光反应迟钝,摄食明显减少。 罗氏沼虾的卵为中黄卵,充满着卵黄,随着胚胎发育,卵径由..毫米增 加到..毫米;卵色由橙黄色依次变为淡黄、淡狄,最后变为瓦灰色。罗氏沼 虾属一年产卵多次的一次性产卵类型,两次产卵间隔为天。怀卵量随个体 大小、营养水平而异,由几千到数力.粒不等。 ..营养价值 根据对罗氏沼虾的营养成分分析,其可食部分含蛋白质.%,脂肪.%, 水分.%,蛋白质含量与对虾.%相当,而比常见的草鱼.%、鲤.% 等食用鱼类都高。罗氏沼虾营养成分与海养对虾相当,而虾壳厚,附肢粗,可食部 分比对虾少。但罗氏沼虾适宜在沿海和内陆养殖而对虾只能在沿海养殖,养 殖 广东海洋大学硕士毕业论文 区域宽,可以就近活体上市,鲜活度高,运销成本低,市场售价相应也低于海养对 虾,因而大受欢迎,销量也大【川。 . 内分泌干扰物的研究进展 环境内分泌干扰物 ,称内 分泌干扰物 、环境激素 ,是一类外源 化合物,它能够干扰生物在保持体内平衡和调节发育过程中正常激素的产生、释放、 转移、代谢、结合、反应和消除,或者在未受损伤的生物或其后代中引起不良的健 康效应和内分泌功能的改变?’?。 由于世纪年代发现了乙烯雌酚综合症,年代在英国的沙布塔河有% 的雄性鲤鱼发生了雌雄同体的现象,年代在佛罗罩达洲和五大湖,发现爬行类和 鱼类的雌性化现象】,因此环境内分泌干扰物被人们称为“威胁人类存亡的定时炸 弹”。萨是由于对人类健康的流行病学调查的不展,以及对水生生物正 常发育的扰乱破坏作用,促使更多的研究者不始关注和研究,环境中具有激 素活性的化学物质是目前科学界关注的焦点。自世纪年代以来一些发达国家 相继在的种类、来源、对环境的污染等方面进行了大量的研究工作。 .. 内分泌干扰物的种类和来源 目前,许多化学物质己被确认为舡,它们包括天然的和人为制造的化学 品。当前确定为环境激素的物质有多种,其中农药类占种,工业用原料类 种,会属类种。总体而言,环境中存在的主要包括有机氯杀虫剂、工业污 染物、天然化学物质、医药用品等。尽管它们可能在环境中的浓度极小,但 一旦进 入人和动物体内,就会通过不同方式干扰内分泌平衡,引起多种异常现象。如 世纪年代在英国的沙布塔河有%的雄性鲤鱼发生了雌雄同体的现象,年代在 。 佛罗罩达洲和矗大湖,发现爬行类和鱼类动物的雌性化、生殖器怪异等现象 ...有机氯杀虫剂 自从世纪年代有机氯杀虫剂出现以来,一直被广泛使用。它们中有些非 常稳定,在释放后数十年还可以残留于沉积物中。有机氯杀虫剂大多数是亲 脂性的, 可以通过食物链的传递在一些肉食性水生动物和陆生动物的脂肪组织进行 生物积 累。它们主要包括六六六、氯月‘、氯氰菊酯、二溴氯丙烷、滴滴涕。 ...工业污染物 多环芳烃:种类多,如葸、苯并花、甲基胆蒽。它们的来源包括 地表径流、城市污水处理厂出水和大气沉降等。城市中大部分的被认为是化 石燃料燃烧产生的烃类通过大气沉降而来。 造纸厂和纺织厂出水:造纸厂在制浆漂白过程中产生的各种氯代酚和氯代有机 酸被释放到水中,其中也含有来自降解木材和其它所用化学品的复杂混合物,其中环境内分泌干扰物对罗氏沼虾生长发育及组织结构的研究 的许多成分难以确刘?。 工业清洗剂:自世纪年代以来就开始生产的烷基酚聚氧乙烯醚 是非离子表面活性剂之一,它们被大量用作清洁剂、除草剂、杀虫剂以及其它化学 品的添加成份。在这类化学品中约有%是壬基酚聚氧乙烯醚,%是辛 基酚聚氧乙烯醚。主要由污水处理厂排放,在污水处理过程中它们被降解 为稳定的疏水物质和辛基酚,并在污泥和河流沉积物中进行累积,它们具 有明显的雌激素效应。 ...天然化学物质 由污染农作物的真菌产生毒枝霉素,如玉米烯酮,具有雌激素性质。人和动物 分泌的激素:雌酮、雌二醇、雌三醇、睾酮。 ..环境内分泌干扰物的危害和作用机制 ‘ 在水体中积累到一定的程度就会对水体一水生生物系统产生严重危害, 并能通过食物链直接或间接地影响到人类的自身健康。如汞具有很强的毒性,影响 人体的生殖腺和甲状腺的分泌功能,表现为损害细胞内酶系统蛋白质巯基, 损 伤动物及人体的神经系统,本发生的水俣病是一个例子;镉的内分泌干扰效应表 现在干扰人类的雌激素分泌】,镉在体内滞留时长,在骨骼中的滞留半衰期是 年,在组织中积累有致癌性?】。铅的毒性主要表现为抑制血红蛋白合成,损害 造血和心血管系统、神经系统和。肾脏,干扰人体生殖腺的分泌【?。因此,对 人类健康危害很大,己经成为当今世界上最严重的环境问之一。 的生物学作用可人为地分为个阶段:一是进入生物体并在各组 织中吸收、聚积;二是在组织中产生影响,它主要是通过受体或非受体途径, 最终在靶器官中产生毒性效应。对人和动物的内分泌系统的影响机制可以分 为大类【】。 ...受体介导反应 通过模拟和拮抗内源性激素,介入内源性激素的介导反应,从而影响生 物体的内分泌系统。研究表明,当内源性激素受体同结构与内源性激素相似的环境 化合物结合时,会产生两种不同的效果:一种是加强内源性激素作用,从而表现出 内源性激素亢进效应;另一种则阻断内源性激素与受体结合,表现为内源性激素的 拮抗效应。 ...非受体介导反应 非受体介导的反应主要是通过影响内源性激素的合成、代谢以及运输等束实现 的。如有机锡化合物可以抑制生物体内细胞色素环化酶的活性,从而抑制雌 性动物体内的睾酮向雌二醇的转化,促使海洋腹足类动物雄性化,并最终导致种群 繁殖率的下降州;而的生物代谢产物.能抑制磺基转移酶的活性,影 响雌二醇的代谢速度,从而延长了雌二醇在生物体内的半衰期,起到干扰生物体内 广东海洋大学硕士毕业论文 分泌系统的作用;而多氯联苯类化合物呵以与运输甲状腺激素的血浆蛋白结合,影 ‘。 响甲状腺激素的运输 ...影响内分泌系统与神经系统、免疫系统的综合效应 内分泌系统、神经系统和免疫系统是个相互独立而又相互作用的体系,它们 通过共同的细胞因子、激素及激素受体构成复杂的关系网,相互调节,使机体在不 同条件下维持稳态。一方面,当外源性化学物通过受体介导反应,干扰生物体内分 泌系统时,也会影响到免疫系统和神经系统。反之,当免疫系统和神经系统受到环 境化学物的直接影响时,又会促使内分泌系统发育异常。实验证实,具有免 疫毒性,可以抑鼠细胞活化,直接抑制生物体激素免疫系统和细胞介导的免 疫途径,从而使神经.内分泌.免疫系统之间的网络被破坏。 .壬基酚对水生生物的影响 壬基酚。是壬基苯酚的简称,分子式,是一类主要 由对.壬基酚组成的各种异构体的混合物。从化学结构和化学性质来看,属于 酚 类抗氧化剂,广泛用于化学工业,制备合成洗涤剂、增湿剂、润滑油添加剂、 增塑 剂等。 .. 的一般毒性 实验表明,对水生生物都具有急性毒性,毒性范围在?/之间 】。淡水鱼黑头呆鱼、虹鳟鱼、蓝鳃太阳鱼的半致死浓度分别为 ?/、./和/,而它们的有效抑制浓度分别为“/、/ /、 和/引。甲壳动物糠虾、草虾、龙虾、泥蟹的半致死浓度分别为 /、 /和 /。 .. 的细胞毒性 引起虹鳟 原代培养的表皮细胞及来自鲤鱼表皮细胞 中高尔基体的空泡化掣。还能够破坏虹鳟雄鱼表皮结构,如使扁平上皮细胞 分离、细胞质空泡化、细胞核严重变形并且黏液细胞的颗粒状形念不规则, 这种影 响程度与处理的时’日和浓度呈萨相关。另外,引起鲤鱼 血液中红细胞和白细胞数目的降低;诱导海鲈鱼 肝脏中 含量增加以及使红细胞核畸形率增加等【】。 .. 对免疫系统的影响 对免疫功能也会产生影响,研究表明,能够抑制一氧化氮和仅.肿瘤坏死 的谷 因子的产生而影响免疫功能【】;能够改变大嘴鲈鱼 丙甘肽转移酶和依赖的醌还原酶催化途径从而影响肝脏的解毒 功能【;抑制海鲈鱼活力【】以及诱导美洲拟鲽的表达【从而干扰 肝脏的解毒功能。同样,等【】也指出通过调节与酶活 环境内分泌干扰物对罗氏沼虾生长发育及组织结构的研究 力影响其在大西洋蛙肝脏中的代谢。 .. 的激素效应 体内试验已经证明具有雌激素效应【?,的化学结构与动物的性类固醇 激素结构相似,已被证实能够干扰内分泌激素的调节,是一种影响生物生殖 系统的 环境激素。作为环境内分泌干扰物,它可诱导雄鱼如虹鳟、鳗鱼、鲤鱼、黑 头呆鱼、 青鳝卵黄蛋白原,一般只存在于成熟雌鱼体内的生成、睾丸退化、两性器官 卵睾形成、雄鱼雌性化以及受精卵孵化能力的下降等【。。在分子水平上,能 够干扰大西洋蛙垂体中促黄体生成激素基因的表达以及使美洲拟鲽的.羟化酶活力增力。 诱导卵黄蛋白原的产生:等【峙旨出能够导致雄性鳗鱼血浆 中卵黄蛋白原的增加。所有暴露在中的雄性剑尾鱼都可测到卵黄蛋白原的产生 【】,等【峙艮道虹鳟在胚期、仔鱼期和幼鱼期连续暴露中年后,与 对照组相比其卵黄蛋白原的表达量升高。等【指出卵黄蛋白原是研究内分 泌干扰物的一个敏感标志物,能够诱导虹鳟卵黄蛋白原基因的表达。另外, 等通过免疫组化技术对诱导的青鲻鱼的卵黄蛋白原进行了定位, 结果显示肝脏中卵黄蛋白原主要集中在血窦附近的肝细胞靠近细胞膜的胞质中,精 巢中主要是在组织问隙与生殖细胞中。 对雄性生殖腺的影响:雄性同本青鲻暴露于/中个月后, 介导的缺口木端标记法观测到精母细胞、支持细胞、问质细胞的凋亡较对照 中天后,雄 组提高倍,并可见睾丸组织纤维化?。暴露于/ 性剑尾鱼性腺相对重量随剂量的增大而减小,并出现睾丸组织结构的改变,如 支持细胞肥大,并有向输出小管细胞转变的迹象引。等手旨出通过影响 同本鳗鲡 的支持细胞而降低了生殖细胞的比例,干扰精子的发 育。 .三丁基锡对水生动物的影响 近年来,对水生动物的毒性效应研究受到国内外研究者的关注,并涉及软 体动物、腹足动物、甲壳动物,鱼类等各种水生动物,包括急性毒性、慢性毒 性、 神经毒性以及生物蓄积等。引起水生动物机体的损害主要表现在以下几个方 面。 .. 对水生动物生长的影响和致死作用 引起水生无脊椎动物如大型蚤、羽摇蚊、六附器毛突摇蚊、红德摇蚊幼 虫、羽摇蚊幼虫、霍镤水丝蚓、苏氏水鳃蚓、折叠萝卜螺、太平洋牡蛎等畸 变和死 亡【舶】。成熟的稀有赁句鲫暴露在/、/的水体中,在~小时内, 所有个体均死亡 ‘。等【研究了种浓度对淡水腹足类羽摇蚊发育和 生殖的慢性毒性作用,结果表明,在/浓度时羽摇蚊幼体的存活率显著下降, 广东海洋大学硕士毕论文 壳的生长受到抑制。这说明,具有极强的毒性,属于剧毒物质,可明显抑制水 生动物的生长。 等【指出,当浓度超过/时,海水种类的生物即表现出急性毒 性效应,而在淡水种类的生物中,产生急性毒性效应的最低浓度为 /。海水 种类实验生物对的敏感性从高到低依次为浮游动物、底栖生物和鱼类。淡水 种类敏感性从高到低依次为底栖生物、浮游动物和鱼类。 .. 对水生动物生殖发育和遗传的影响 能够影响生物的生殖功能,干扰体内激素分泌,在生殖和遗传方面产生不 良后果。 发现 年首次在英国 的性畸变现 象,即在雌性个体中发育出不『常的雄性特征,包括雄性生殖器官的生成及输 卵管 的卷曲【。等人证实贝类性畸变与有机锡污染密切相关?。大量的研究证实 能够引起海产贝类性畸变,从而使得该种群中雌性个体比例下降,幼体数目 减 少,最终导致种群的衰退。在英国,曾经发现引起荔枝螺性别变异和群体衰 退,造成许多地区的荔枝螺处于种群消亡的边缘。引起牡蛎畸变的现象在美 国、 加拿大、英国和法国都有发现【。研究发现,对海洋蠕虫: 的姐妹染色单体基因交换和染色体畸变也具有显著影响。大量暴露实验研 究表明,低浓度还可使软体动物发生性畸变,从而导致种群退化。斑马鱼幼 体暴露在.‖的水体中天后,该群体中的雄鱼数量显著偏高;暴露在 / 水体中的斑马鱼,产生的所有精子都缺少鞭毛。的研究认 为,繁贿行为的影响是阻碍生物繁贿的另一条途径。 ’ .. 对水生动物神经和免疫系统的影响 通过注射或水体暴露途径,进入血液中的化合物以某种形式穿过血脑屏 障,在脑中蓄积,进而产生神经毒性【们。在脑中主要的蓄积部位为问脑、菱脑 等组织,通过损伤鱼类味蕾、侧线系统,导致鱼类行为受阻,如寻找食物、辨别捕 食者、通讯等。在鱼类免疫毒性研究方面,】和研究结果揭 示,对鱼类的巨噬细胞分泌功能、抗体反应等方面有显著影响。 .. 对水生动物体内各种代谢酶的影响 酶类是生物体生命活动不可缺少的组成部分,它催化体内各种生化代谢反应。 当生物体暴露于环境污染物时,酶类的表达和活性就会受到影响,同样具有上 述效应,目前研究较多的为抗氧化系统酶类、细胞色素系统酶类等。研究表 明,可显著影响泥蚶、牡蛎、文蛤、小鼠、褐菖鼬、比目鱼和鲤鱼体内的过氧 化物歧化酶、碱性磷酸酶、谷胧甘肽还原酶和..酶纠彤。随着 研究的不断深入,将有越来越多的酶类如细胞色素环化酶等被报道?。 .研究的目的和意义 环境内分泌干扰物对罗氏沼虾生长发育及组织结构的研究 由于人类活动,特别是工业生产的发展和城市人口的过于集中,大量未经处理 的工业废水和生活污水排入天然水体,超过了水体的自净能力,影响水体的有益用 途,进而造成了水体污染。世纪五、六十年代,日本的水俣镇和富山县神通川发 现了“水俣病”和“骨痛病”,人们从而确认水中的污染物可通过食物链传递进入 人体并对人类造成严重的危害。当前,和在环境中分布广泛,可以通过皮 肤暴露和食物进入生物体内,对生物体产生严重的毒害作用,并且这种毒害作用随 着食物链传递和放大,威胁到人类的健康,它们的控制和防治已经刻不容缓。一些 国家纷纷出台了一些法律法规,将它们列为优先控制的污染物。我国关于环境污染 物的监测还主要集中在利用化学方法检测常规指标,往往是在环境中产生很大危害 时才引起人们的重视,而敏感生物指标可以在生物体发生严重损伤之前的就可以反 映出环境的污染状况,并且具有反应迅速、测定方便、方法简单易行、易于推广等 优点。因而,我们致力于寻求灵敏而有效的生物监测方法来指示环境中或生 物体内 和的污染和危害,这有一定的现实意义。 甲壳动物对水环境的变化反应十分灵敏,当水环境中的内分泌干扰物达到一定 的浓度时,就会引起一系列中毒反应,例如行为异常、生理功能紊乱、组织细胞病 变,直至死亡。水污染直接导致虾蟹成活率降低和养殖成本提高,因此,研究罗氏 沼虾各组织病理变化可以直接反映污染物污染程度,并间接反映出所处水体的水质 状况。目前国内外研究主要集中在内分泌干扰物对鱼或腹足类的毒性作用,关于内 分泌干扰物特别是和在甲壳动物生长、性腺分化及组织病理变化的研究少 见报道。 在本研究中,我们拟利用罗氏沼虾作为研究对象,建立一套完整的研究方法, 较为彻底地探索环境中和在经济甲壳动物体内累积的特征,特别是和 毒性作用对鳃、肝胰腺、胃和性腺的影响,进而探索水体和对经济养殖虾 类生长和性别分化的影响。这不仅在理论上可解释和对经济虾蟹类生长发 育毒性作用,更重要的是利用研究结果,可建立一套较为科学的自然水域和 对经济甲壳动物污染的危险评价体系,同时也为淡水渔业资源和水生态系统的保护 提供科学依据。.材料与方法 .. 材料 ...试验动物 罗氏沼虾幼虾..、成虾..来源于广东湛江广华虾苗场, 幼虾为陔虾苗场生产期间同步发育的健康个体。 ...化学试剂 均为对.壬基酚,先配成/的母液?冰箱中避光保存备用, 各处理组再用母液配制。无水乙醇在各处理液中的最终体积分数小于.%, 其他试剂均为分析纯。 ..方法 ...驯养 幼虾和成虾在实验自『驯养于×.×水泥池中,试验用水为自来水,的 本底浓度为../,采用连续曝气方式,水温控制在。,光周期为 :,每同投喂次饵料,暂养一周后不始正式实验。 ...急性毒性实验 急性毒性实验过程中的光照、温度等环境条件与驯养期相同。实验用容器为 .聚乙烯塑料桶,实验水体.,每桶随机放入尾罗氏沼虾,每个浓度组 设个平行,每更换一次实验溶液,确保浓度的稳定。实验不始后的每 对罗氏沼虾中毒症状进行仔细观察,每记录次死亡虾尾数并及时清除死虾。 根据预实验结果按等对数问距个浓度组,幼虾试验中浓度分别为/、/、/、 /、/、 /和/;成虾试验中浓度分 别为/、./、/、 ,/、/、 /和/。 ...成虾的慢性毒性实验 采用药浴方法,实验用容器为.,聚乙烯塑料桶,实验水体.。实验虾 体长.~.,每桶尾。根据急性毒性的实验结果设计个浓度组,浓度 分别为/、/、?/、“/和/,每组三个平行,实验过程中 每天投喂次,每天更换一次实验溶液,确保浓度的稳定。 暴露天后,取对照组罗氏沼虾和处理组罗氏沼虾的鳃、肝胰脏、胃,波恩氏液 ’固定,常规石蜡包埋,切片厚度,苏木精一伊红双重染色?, 环境内分泌干扰物对罗氏沼虾生长发育及组织结构的研究 显微镜拍照,观察其组织病理学变化。 ..数据处理 急性毒性实验的半致死浓度翮用浓度对数一概率单位直线回归法计算?,算 术法计算神,并根据下式计算安全浓度: 甜。×. . 结果 .. 中毒症状 不同浓度处理组的罗氏沼虾幼虾和成虾表现出相同的中毒症状:起初很活 跃,在水的中上层不停地游动或急速打转;随后活动不始减弱,游动减慢,出 现下 沉症状;继而体能衰竭,极少运动,受外界刺激后反应迟钝,身体逐渐变红,用 玻 璃棒触及腹部无任何反应时即为死亡。 ..急性毒性效应 表 对罗氏沼虾幼虾和成虾的的死亡率 . . 注:表中数据是平行组平均值十差,. 在不同试验浓度下,罗氏沼虾幼虾和成虾出现不同程度的中毒反应。对 罗氏沼虾幼虾和成虾的死亡率见表?。幼虾试验中,当浓度高于/时, 小时内,罗氏沼虾幼虾开始出现死亡,且死亡率随着浓度升高和处理时间的 延长而升高;但小时后,浓度高于/时即有罗氏沼虾幼虾不始死亡,死 亡率同样随浓度的提高而升高。成虾试验中,当浓度小于/时,除 暴露小时有.%的罗氏沼虾幼虾出现死亡外,浓度和处理时间对罗氏沼 虾幼虾未产生明显的毒害作用;当浓度大于/时,随处理浓度的增加 广东海洋大学硕士毕业论文 和处理时间的延长,罗氏沼虾幼虾死亡率均呈上升趋势,浓度达/时, 小时即有半数左右的罗氏沼虾幼虾出现死亡。 对罗氏沼虾幼虾和成虾急性毒性计算结果见表?,根据线性回归方程计算 出对罗氏沼虾幼虾和成虾的柏分别为“/和/,安全浓度 分别为/和.垤几。 表 对罗氏沼虾幼虾和成虾半致死浓度和安全浓度 .? . 为夕匕亡率,为浓度对数,为斜率,为方程截距. .. 罗氏沼虾成虾组织病理变化 ... 对鳃组织结构的影响 在慢性暴露试验中,鳃组织结构受到明显的损伤:损害程度随暴露浓度的 增加而加剧。暴露后,当浓度小于“/时鳃叶结构变得模糊,呼吸上皮 细胞增厚,上皮细胞呈残损状,鳃叶术端出现褐色沉积物图版图;在浓 度大于/时,鳃叶基部的上皮细胞增多明显,鳃叶被大量血淋巴细胞浸润, 严重者呈弥漫性坏死,坏死的组织散落在鳃叶术端随处可见图版图。而正常 罗氏沼虾的鳃叶结构清晰,上皮细胞币常图版图,图。 ... 对肝胰脏组织结构的影响 当罗氏沼虾成虾在暴露后,当浓度小于/时,肝胰脏细胞出现空泡化 现象,有些个体的肝胰脏组织出现细胞溶解现象图版图;当的浓度为 ?/时,肝胰脏细胞空泡化严重,边界模糊且细胞溶解,肝小管萎缩,肝细胞 核缩小图版图。而正常肝胰脏细胞无空泡化现象,肝小管『常图版图 ,图。 ... 对胃组织结构的影响 各处理组罗氏沼虾胃内食物少,组织病理变化表现为胃角质层增厚、变性、 上 皮组织轮廓模糊,大量上皮细胞坏死脱落。暴露后,浓度小于/时, 胃角质层明显增厚图版图;浓度为/时,上皮组织轮廓模糊,大量 上皮细胞坏死脱落图版图。而『常罗氏沼虾胃角质层正常,上皮细胞轮廓环境内分泌干扰物对罗氏沼虾生长发育及组织结构的研究 清晰,上皮为单层柱状细胞,细胞核呈圆形或椭圆形图版图,图。 .讨论 .. 急性毒性的影响 关于环境内分泌干扰物对甲壳动物的急性毒性,已有大量研究。孙超白掣‘ 研究了溴氰菊酯、甲基对硫磷、六六六和呋喃月.对隆线蚤的急性毒性,结果表明 种药物对水蚤.值分别为. /、. /、./和 ./。而陈良燕等【研究了溴氰菊酯对鱼塘浮游动物:枝角类蚤,秀体水蚤; 桡足类镖水蚤,剑水蚤现存量的变化,结果显示,溴氰菊酯对浮游动物的毒性随 浓度增加而加强,在本实验中,对罗氏沼虾幼虾和成虾的急性毒性,随着 处理时间和处理浓度的升高而升高。因此,不同毒物对甲壳动物的毒性不同,有些 相差很大,说明甲壳动物对不同的毒物敏感性不同, 在同一时间内,罗氏沼虾成虾的死亡率与浓度呈正相关,说明在一定浓度 范围内,对罗氏沼虾成虾存在急性毒性效应。在同一浓度下,死亡率与染毒 时’日呈正相关,说明在罗氏沼虾体内具有累积效应。线性回归方程的截距表示 生物种群对药物敏感性的异质程度。随着暴露时’的增长,值增大,表明随着 幼虾在中暴露时日的增长,群体的异质性减小,即个体的敏感程度更加接近圳。 对水生动物有一定的危害,但不同的水尘生物对的敏感性存在一定差异。本 试验中,回归方程的值随着时间的增加呈逐渐增大的趋势,说明随着染毒时 间的增长,罗氏沼虾成虾对的敏感性增强。当罗氏沼虾长期处于污染的水 体环境中,较低的浓度即会对罗氏沼虾产生毒性效应,较低浓度将对罗氏沼虾 成虾产生毒性效应。从罗氏沼虾的急性毒性试验中可以看出,罗氏沼虾幼虾和成虾 的相差比较大,分别为/和/,这说明幼虾和成虾对 的敏感性存在差异。这可能是由于幼虾的免疫系统等发育不完善,对环境内分泌干 扰物的抵抗力差造成的。 ..对甲壳动物组织结构的影响 在毒理学研究中,组织病理学是从形态学和组织学角度研究环境内分泌干扰物 对生物机体形态和结构产生的负面影响,以此作为分析判断环境内分泌干扰物对动 物机体毒性大小的一种参数。环境内分泌干扰物被甲壳动物吸收后,随着血 液循环 到达各组织器官。它首先使甲壳动物各组织器官的生物大分子的结构发生改变,但 随着环境内分泌干扰物浓度的增加和暴露时间的延长,其损伤作用逐步在细胞、组 织器官等各个水平上反映出来,妨碍组织细胞代谢过程而出现组织学损伤。 鳃是虾蟹类等甲壳动物进行吸收、生物转化和排泄的重要器官,当水体受到 污染时,与鳃接触并能迅速积累。多种环境污染物都会对呼吸器官产生影响,如 对中华绒螯蟹鳃有损伤作用啪,随着铜处理浓度的增大和处理时间的延长,鳃 广东海洋大学硕士毕业论文 上皮细胞微绒毛结构与基膜脱离,基膜下方呈较大的空腔,上皮细胞线粒体空泡化, 细胞结构破坏。矿能对中华绒螫蟹的鳃造成严重的伤害呻?,主要的病理变化是整 个鳃叶出现不规则地增厚,血腔增大,血细胞增多。本研究中对罗氏沼虾成虾 鳃组织的影响与他们研究的结果类似。在本实验中,发现大量的褐色沉淀物,与周 凯九对中国对虾细菌性黑鳃病的组织病理研究结果十分相似,褐色物质是组织中的 酪氨酸和,一二羟基苯丙酸因酚氧化酶的作用而氧化合成的,这是虾对异物 刺激做 出的积极防御反应。 甲壳动物的肝胰脏可以合成和分泌消化酶,当甲壳动物受到环境内分泌干扰物 胁迫时,肝胰脏是有害物质的主要积累场所,因此,环境内分泌干扰物对肝胰脏的 结构和功能造成损害。成永旭九研究对中华绒螫蟹蚤状幼体的影响中发现,斗 浓度超过/时,肝胰脏结构受到严重的损伤,细胞解体形成较大的空泡, 细胞也出现很多空泡,与正常的细胞相比,其结构受到明显的损伤,当浓度 超过?几时,肝胰脏遭到严重的破坏,无正常细胞结构。本文的研究结果和 他们的结果相似。王兰研究发现影响长江华溪蟹肝胰脏的生理功能,如核膜溶 解,粗面内质网小泡上的核糖体脱落并出现空泡化呻引。本研究中,引起罗氏沼虾 肝细胞空泡增多以及肝细胞的变形等,这与等盯?报道的能够在鱼体内积累, 从而引起肝细胞的组织病理变化是一致的。环境内分泌干扰物可以对甲壳动物的肝 胰脏造成结构和功能的损伤,如破坏肝胰脏细胞的细胞核、内质网、线粒体等主要 的细胞器结构和功能的完整性,从而影响肝胰脏币常的生理功能。 胃具有初步消化食物的功能,可以合成和分泌消化酶,当水体受到环境内分泌 干扰物污染时,刺激胃皮细胞,因此,环境内分泌干扰物对胃组织结构造成损伤。 本实验中,各浓度处理组的胃角质层增厚,上皮细胞脱落,可能是壬基酚直接 腐蚀胃黏膜组织,引起胃黏膜急性炎症,导致胃角质层增厚、变性、上皮组织轮廓 模糊。环境内分泌干扰物对罗氏沼虾生长发育及组织结构的研究 壬基酚对罗氏沼虾生长和性腺分化的影响 被广泛用作各种清洁剂和塑料添加剂成分,常温下相当稳定,可经多种途 径进入生物体内,有关对生长影响的研究主要集中在鱼类【川】,对甲壳动物生 长和性别分化的研究尚未报道。本研究以不同浓度处理罗氏沼虾幼虾,研究 对其生长和性别分化的影响,为酚类化学污染的治理提供基础资料,并为甲壳动物 保护和养殖奠定基础。 .材料与方法 .. 实验材料 ...试验动物 罗氏沼虾幼虾.来源于广东湛江广华虾苗场,为该虾苗场生产期间 同步发育的健康个体。 ...化学试剂 见...。 ..方法 ...慢性毒性实验 罗氏沼虾幼虾体长.~.在水泥池中驯化天,慢性暴露实验在盛 有.淡水的聚乙烯塑料桶中进行。根据幼虾急性毒性实验的结果,设定个实 验组,浓度分别为/、/、 /、/和 ./,每组三个平行, 每个平行尾,暴露天,每天更换%的实验溶液,确保浓度的稳定。水 温控制在?,光照:,处理第、、、测量虾的体长和体 重。 ...性别鉴定及性腺组织学检查 性别鉴定: 暴露后,分别从对照组及每个试验组中随机取尾幼虾 解剖镜下鉴定性别。性别分化的雌虾和雄虾的外部特征明显。雌虾的生殖孔 在第三 胸足基部;雄虾的生殖孔在第五胸足基部,并且第二腹足具有雄性附肢。 性腺组织学检查:幼虾暴露结束后,随机取尾放在氏液中固定 左右,系列酒精脱水,二甲苯透明,常规石蜡包埋,切片厚度 ,.染色, 显微镜下观察及摄影。 ..数据处理 采用.软件的单因子方差分析。实验结果以平均值?标准差 表示,.表示差异显著,.表示差异极显著。 .结果 广东海洋大学硕士毕业论文 .. 壬基酚对罗氏沼虾幼虾生长的影响 /、/和/的 在慢性暴露实验中,经浓度为/、/、 暴露.,不同浓度处理组体长和体重与对照组幼虾相比变化不明显 胗.;处理超过,除?‖处理组幼虾体长和体重与对照组相比无显 著差异外,其他各处理组幼虾体长和体重均明显低于对照组.。图., 图.。 叭 口对照 .口寸弛 . 口?/ .:囡/ 目/囹/ 趱悯 大 图 对罗氏沼虾幼虾体重的影响 . . 口对照 口/ 囡/ . 母心/ 四/ 宣 。. 丝 蕊 .天 图 对罗氏沼虾幼虾体长的影响 . . ..性别比例及性腺组织学检查 环境内分泌干扰物对罗氏沼虾生长发育及组织结构的研究 剂量对罗氏沼虾幼虾性别比例的影响见图.,对照组的雌性率约为%, 在不同浓度处理组中,雌性个体所占比例基本未发生变化,雌性率保持在 ~%。雄性个体所占比例随着浓度的增大而降低,无法鉴定性别比例也随着 的浓度的增大而增大。 暴露后,各处理组无法鉴定性别的幼虾中,浓度低于,/时,罗氏 沼虾幼虾的性腺处于未分化状态,性腺细胞为不规则或椭圆型图版;浓度高 于/时,幼虾性腺处于未分化状态,性腺细胞为圆型图版。在整个实 验中,未发现任何罗氏沼虾幼虾含有’日性性腺。对照组雌雄罗氏沼虾性腺 均为正常 卵巢和精巢组织,精巢中可以看到精原细胞图版?,雌虾卵巢中可以看到卵 原 细胞图版?。一尤法鉴定 雪昔 口雄性圈雌性 蓦%%%%%%%%%%% 对照 / / “/ / 浓度 图 对罗氏沼虾幼虾性别比例的影响.. .讨论 .. 壬基酚对罗氏沼虾幼虾生长的影响 在本实验中,第、各浓度处理组幼虾体重和体长与对照组相比无明显 的差异.,此时,罗氏沼虾幼虾处于生长发育的初期,以后,随着罗氏 沼虾的发育,处理组和对照组体重和体长的差异明显增大.。等 将新月鱼投入浓度为/的水体中染毒个月,导致体重、体长的减小。在 暴露过程中,随着暴露时间的延长,各浓度处理组的体重和体长逐渐减小。导 致这种变化可能的原因是造成幼虾鳃、肝胰脏、胃等组织的损伤影响罗氏沼 虾 呼吸、消化等一系列器官的生理功能,导致其生长发育缓慢。 动物的生长通常受到各种激素调控,当有外源性的内分泌干扰物干扰时,就 会 对其产生影响,多项报道表明激素和激素类似物影响动物正常的生长发育。 双酚 还具有显著的致畸作用,当双酚在/浓度范围内,都会显著地提高 广东海洋大学硕士毕业论文 ? 等?研究双酚暴露羽摇蚊发现, 斑马鱼子代中出现畸彤个体比例。 羽摇蚊水生生活时期有蜕壳现象,在‖浓度下会对羽摇蚊的蜕壳和体重产生影 响,但是在?‖浓度下就会导致口器的畸形。 被认为是一种类雌激素,作为内分泌系统分泌的激素通过体液传递信息, 调节蛋白质、糖和脂肪以及水盐代谢,促进细胞分裂和分化,影响中枢神经和植物 性神经系统的发育和活动。生命早期是生物体生长发育的敏感时期,在此时期易受 到内分泌物的干扰,引起生物体内分泌系统紊乱,进而对生物体产生严重影响。 ..壬基酚对罗氏沼虾幼虾性别比例和性腺分化的影响 种群性别比例维持在一个正常的水准对于一个物种的繁衍有着至关重要的意 义。雌雄比例失衡很可能会导致种群增殖能力下降,长此以往则有可能导致种群灭 亡。因此,性比失衡作为生物学指标也可以用来衡量环境污染情况。 低等脊椎动物和无脊椎动物的性别决定和分化不完全受基因控制,相当部分种 类在性别分化初期时,环境条件可影响雌雄性别的比例。暴露在,/中的虹 鳟,有%的雄鱼转变为雌鱼。将青鲻幼鱼暴露于中个月,可导致雌鱼的 比例增加【们。暴露在 /中的斑马鱼,雄鱼的数量减少。然而,本实验 中,虽然未导致性比出现明显差异,但抑制了性腺的发育。 在罗氏沼虾的性腺发育过程中,性腺发育初期,细胞呈圆型,随着性腺的发育, 细胞逐渐呈椭圆型或无规则。在本实验中,无法鉴定性别比例随着浓度的增多 而增大,无法鉴定性别的幼虾均为性腺未分化状态,这说明暴露严重干扰了罗 氏沼虾幼虾的性腺发育,并且随着处理浓度的提高,性腺发育被抑制的现象更明显。 导致这种现象的原因是壬基酚可能具有内源性激素活性,与生物体激素竞争靶细胞 上的受体,阻碍了天然激素与受体的结合进而影响季度信号在细胞、器官、组织的 传递,导致机体功能失调,从而影响性腺的发育。环境内分泌干扰物对罗氏沼虾生长发育及组织结构的研究 三丁基锡对罗氏沼虾毒性效应 作为有机锡化合物中毒性最强的物质,被广泛用作多种污损生物的灭杀剂 和化工材料。从世纪年代开始,对有机锡的污染进行了广泛而深入的研究, 内容涉及环境化学行为、生态毒理学等。近年来我国学者致力于对生物致毒机 理的探讨。对水生生物的毒性效应多见于对鱼类的研究,尚未见到对甲壳动物 影响的报道。通过对罗氏沼虾的毒性研究,可揭示有机锡污染物对水生生物的 毒性机理,对评价水产养殖环境污染程度,保护虾类资源和养殖环境具有重要意义。 .材料与方法 .. 材料 ...实验动物 见...。 ...化学试剂 为公司产品,先用无水乙醇配制成一定浓度的储备液, 避光于?保存,其他试剂均为分析纯。 ..方法 ...驯养 见...,的本底浓度小于./。 ...急性毒性实验 见...,根据预实验结果按等对数日距设计个浓度组,幼虾试验浓 度分别为、/、/、/、/、/和垤/;成虾试验浓 度分别为、/、/、/、/、/和/。 ...对成虾的慢性毒性实验 见...,根据急性毒性实验结果设计个浓度组,浓度分别为、/、 ”/和/。 ..数据处理 见..。 . 结果 .. 中毒症状 实验中,罗氏沼虾幼虾和成虾的中毒症状基本相同,表现为:在桶中狂游,之 后仰卧桶底,附肢剧烈抖动,最后死亡,死虾身体弯曲;个别虾中毒后身体竖 直上 窜,最后精疲力竭静伏于桶底而死。 不同药物浓度对罗氏沼虾幼虾的毒性有所不同,浓度愈高,毒性愈强。在实验 广东海洋大学硕士毕业论文 最初内,幼虾和成虾处理组中没有明显的中毒症状。随着作用时、日的延长, 对罗氏沼虾幼虾的毒性效应加大,高浓度下的罗氏沼虾幼虾?/组、成 虾肛/组游动加快,后开始出现死虾;其他浓度的罗氏沼虾,运动下降, 游动缓慢,有部分沉底;而空白对照组罗氏沼虾,在水体中分布均匀,游动正 常。 值得注意的是,部分虾死亡是先蜕皮后死亡,虾类之问还有相互残食的现象。 ..急性毒性效应 表 对罗氏沼虾幼虾和成虾的死亡率 . . 夕匕亡率% 受试动物 浓度/ ? ? ? ? 空白对照 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? .?. 幼虾 .?. .?. .?. .?. .?. .?. .?. .?. .?. .?. .?. .?. ? ? ? ? 空白对照 ? ? ? ? ? ? ? ? 成虾 ? ? .?. .?. 。?. .?. .?. .?. .?. .?. .?. .?. .?. .?. .?. .?. 注:表中数据是平行纲平均值十标准筹,. 表 对罗氏沼虾幼虾和成虾半致死浓度和安全浓度 .