【doc】香砂六君浓缩丸中陈皮甙含量的高效液相色谱分析

【doc】香砂六君浓缩丸中陈皮甙含量的高效液相色谱分析 香砂六君浓缩丸中陈皮甙含量的高效液相 色谱分析 第19卷第1期湖南师范大学自然科学l996年3月ActaSciNatUmvNorm}hn丑 nVoI_19No.1 M盯.1996 香砂六君浓缩丸中陈皮甙 含量的高效液相色谱分析 汤澍徐秉坤? (湖南师范大学测试中心,长沙.410081) 2,/ 摘要用三羟甲基胺基甲烷(磷酸调pH值至2.7)甲醇作流动相进行梯度洗脱.建立 丁香砂 六君浓缩丸中陈皮甙含量的反相高效}使相色谱分析方法.本法分析速度快.重现 性好,陈皮甙的平 均回收率为97.O4. 善,至里互星鎏墼-!生堕堕塑垒堂分类号0656.28 HPLCAnalysisofHesperidininXiangshaliujunConcentratePill TangShuXuBing" (ExperimentalCenter,HunanNormalUniversity,Changsha.410081) AbstractAnHPLCmethodfortheanalysisofhesperidininXlangahaliujun concentratepi【【waspresented.Elutedhygradientmodefrom70A(O.02too|/lTris— H3PO',pH2.7)and3C}B(methano1)to3C}Aand70B,aquantitativeseparationof hesperldinwithothercomponentsinthepil1waaohtained.Theresultsdemonstratethatthis analysismethodisquickandsimple,andtheaveragerecoveryofhesperidinis97.04. KeywordsXia"gshaIiujunconcentratepill;hesperldin;HPLC 香砂六君浓缩丸是一种具有健脾开胃,行滞化气等功效的新药.它由陈皮,木香,砂 仙,当 归,茯苓,红姜等多味中药配制而成.其中有效成份陈皮甙的含量是该药质量的重要指标,它可 用紫外分光光度法…,薄层扫描法以及高效液相色谱法测定.其中,紫外分光光度法只 能测定含对陈皮甙不干扰组分的样品或单一的陈皮甙,薄层扫描法定量测定则需对斑点的深 度进行对比.精度差.而采用高效液相色谱法,尽管香砂六君浓缩丸经反复抽提后组成仍很复 杂,但经分离后能消除干扰,准确测定其陈皮甙的含量. 1实验部分 1.1仪器与试剂 岛津LC一6A高效液相色谱仪,SPD一6AV紫外可见光分光光度检测器C—R3A色谱数据 ?收稿日期r1995-O7—15 潮南师范大学自然科学第L9卷 处理机.色谱柱YWG—ODs(25cm×4mn2) 甲醇为色谱纯试剂,磷酸,三羟甲基胺基甲烷为分析纯,水为二次蒸馏水. 1.2色谱条件 在紫外检测波长286tim下,采用流动相A:0.02mol/i三羟甲基胺基甲烷水溶液,用磷酸 调pH至2.7,流动相B甲醇,控制流速为lmL/min,进行梯度洗脱. 1.3样品处理 将香砂六君浓缩丸粉碎成粉末,精确称取5g置于索氏提取器中,先用石油醚(bp:3O, 60?)提取2h将石油醚挥发至干,再用含0.1mol/iNaOH的5o乙醇溶液2oml回流提取2次 4h,然后过滤,最后用甲酰胺定容至100mi. 2结果与讨论 2.1色谱分离 用起始条件为7o三羟甲基胺 基甲烷一磷酸缓冲液(pH=2."和 30甲醇,终止条件为3O%三羟甲基 胺基甲烷一磷酸缓冲液和7O甲醇, 按图l虚线所示的梯度进行洗脱.由 图1可见陈皮甙和其它组份完全分 开,达到了基线分离.相同条件下.可 获得实际样品的分离图.我们曾试着 采用文献4,5中所报道的分离条件. 即磷酸溶液+甲醇体系.但由于样品 虽经处理仍很复杂,不能排除对陈皮 甙测定的干扰.实验中,我们在流动 相中加入三羟基胺基甲烷,发现可使 陈皮甙的保留时间拖后,从而改善了 与其它干扰物的分离.这是由于无机 盐能增加流动相的表面张力.我们用 此法还测定了片剂药物中的陈皮甙, 图谱也很理想【见图2),达到了基线 分离. 围1香O,-v,君浓缩丸样品色谱圈围2片荆药枷的色谱囤 (a为陈皮甙峰.虚线为洗脱梯度)(丑为陈皮甙嶂) 2.2陈皮甙峰面积与浓度的线性关系考查 按本文所述色谱条件分别进样对照样品溶液5,8,10,15.20~.1,测定峰面积.陈皮甙 在4.74 g,18.96g的回归方程为Y一6123.76+9279.00X,r一0.9979,陈皮甙进样量与峰面 积 呈很好的线性关系,因此可用外标法定量测定. 3.3精密度测定 在上述色谱条件下.对2个样品分别重复进样3次,得其陈皮甙的含量,精密度的计 算结果 见表1.它们的保留时间的变异系数达到0.8161,满足定性,定量分析要求. 第1期汤澍,镣秉坤:香砂六君浓缩丸中陈皮甙含量的高技液相色谱分析 表1精密度测定 2.4回收率实驻 准确量取一定量样品?再加入陈皮甙标准物适量,在上述色谱条件下,进样20l,测其 回 收率.从表2可见回收率良好,可达97.04. 表2回嫂率测定 2.5不同溶剂的比较 陈皮甙属于黄酮类化合物,多含 酚羟基,显一定的酸性.可溶于碱性 溶液中.据此性质,采用碱醇作溶 剂,但实验发现其标准物的HPLC图 谱上,出现了两个色谱峰(见图3的a, b峰),可能是由于碱浓度过大,破坏 了黄酮母核,进一步实验表明选用甲 酰胺作溶剂,此现象消失(见图4),只 有a峰.我们还曾经根据陈皮甙易溶 于乙酸乙酯的性质,用乙酸乙酯作提 取剂和溶剂.但测得的陈皮甙的含量 明显低些,约为甲酰胺作溶剂的三分 之一,而且甲酰胺在低温下不凝固, 对样品测定无干扰,故甲酰胺是理想 的溶剂. 2.6样品的分析 处理好的样品在上述邑谱条件3 下进样201.用外标法定量得其陈皮 甙的含量1号: 碱醇作溶剂的标样色谱盈固4 (b,c为陈皮甙的两丹裂峰) 甲酰胺作溶剂的标样色谱圈 (a为雕皮甙的标准峰) 0?2178mg/ml一2号:0.3615mg/m1.从结果可知.样品中陈皮甙的含量较高.本法能准确测定 陈皮甙的含量,可以作为控制产品质量标准的方法, 湖南师范大学自然科学第lg眷 3结论 采用反相高效液相色谱,我们建立了香砂六君浓缩丸中陈皮甙的分析方法.根据此法我们 还测定了片荆中陈皮甙的含量.实验结果表明本法作为陈皮甙的分析方法操作简便,准确,适 用于药厂产品的质量控制. 参考文献 周添浓.陈佃,刘权蛇胆陈皮束工艺质量研究_中成药.1993.15(4):8 常珉,蒋敏,李安娟.祝实及其三种中成药中陈皮甙的荧光薄层扫描定量法.药物分析杂志.199o,l0(2):94 金乃宝.李德英,曾茂法.反相高效液相色谱法检测陈皮甙中的有关杂质.现代应用药学,1991,8(s):31 史林,聂万达,壬文发.香砂养胃丸中厚朴醇.冻皮甙的含量测定.中草药,1992,23(5)247 艳国强-幕唐,刘振毕.国公酒中陈皮甙含量的高教液相色谱法测定.中成药,1992.14(7):14 :人民卫生出版社,1986. 唐得时.中药化学.北京