异烟酸-巴比妥酸法测定食酒中的氰化物

异烟酸-巴比妥酸法测定食酒中的氰化物 58中国卫生检验杂志2004年2月第14卷第1期ChineseJournalofHealthL丑 toryTeehnolo~2004.February.14.No.1 【测定】 [文章编号]1004-8685(2004)01.58—02 异烟酸一巴比妥酸法测定食酒中的氰化物 胡海涛,马金波,彭德才,闫广杰 (1.沈阳市疾病预防控制中心,辽宁110031;2.沈阳市沈河区疾病预防控制中心,沈 阳110016) [中图分类号]0657.3[文献标识码]A 食酒中的氰化物是由制酒的一些原料中含有的氰甙类配 糖体,在发酵过程中水解产生的,其中氢氰酸(HcN)毒性极强, LD=0.05g.现对于食酒中氰化物的测定,国家化学方法 有异烟酸一吡唑酮法和吡啶一吡唑酮法.在实际工作中有一 些问题,比如吡啶一吡唑酮法的显色剂中,吡啶易挥发,且对 人体有害.作为第一法的异烟酸一毗唑酮法,显色剂不易于 保存,且在实际检验过程中常出现样品溶液浑浊的现象,对日 常的检验工作造成极大的不便.因此本文参考饮用水及车间 空气中氰化物测定方法,提出采用异烟酸一巴比妥酸法测定 食酒中氰化物的含量. 1材料与方法 1,1仪器721分光光度计,上海第三分析仪器厂生产. 1.2试剂 1.2,1氢氧化钠溶液(2g/L). 1.2.2氢氧化钠溶液(12g/L). 1.2.3磷酸二氢钾缓冲液(136g/L)称取13.6g磷酸二氢 钾,溶于纯水,稀释到100ml. 1,2.4氯胺T(1Og/L)称取1g氯胺T溶于纯水,并稀释到 lOOml. 1.2.5异烟酸一巴比妥酸溶液称取2.0g异烟酸,1.Og巴比 妥酸,溶于lOOml12g/L的氢氧化钠溶液(1.2.2)中,保存于棕 色瓶内,冰箱内可保存一个月. 1.2.6氰化物标准溶液(1btg/m1). 1.3实验方法 1.3.1吸取1.0ml样品于1Oral比色管中,加入2g/L的氢氧化 钠溶液至5ml,碱解10min.若样品有颜色或浑浊,可取25.0ml 样品于250ml全玻璃蒸馏器中,加入5ml2g/L的氢氧化钠碱解 10min,加饱和酒石酸溶液使之呈酸性,加热蒸馏.用1Oral2g/L 的氢氧化钠溶液吸收,收集馏出液50ml.取2.0ml馏出液于 lOml比色管中,加入2g/L的氢氧化钠溶液至5ml. 1.3.2分别吸取0,0.50,1.O0,1.50,2.00ml氰化物标准溶液 于5个1Oral比色管中,加入2g/L的氢氧化钠溶液至5ml. 1.3.3在样品管及标准管中加入2.5ml磷酸二氢钾缓冲溶液 和0.25ml氯胺T溶液,}昆匀后放置5min,然后加入2ml异烟酸 一 巴比妥酸显色剂,定容至1Oral,显色后,以0号标准管为参 比,用lcm比色杯比色.以氰化物质量为横坐标,吸光度为纵 坐标,绘制标准曲线,由曲线上查得样品中氰化物的质量,计 算含量. 1.4计算对于无色透明的样品,计算公式如下: 式中:.一样品中氰化物的含量(按氢氰酸计),nL; ml一测定用样品中氢氰酸的质量,p-g; v.一样品体积,ml. 对于有色浑浊的样品,计算公式如下: : v21000 式中:一样品中氰化物的含量(按氢氰酸计),rag/L; rn2一测定用样品馏出液中氢氰酸的质量,/-~g; ,,2一样品体积,rnl. 2结果与讨论 2,1显色时间在60Ohm,25?条件下对加入1.Oral氰化物 标准溶液的标准管进行测定,确定最佳显色时间,见1. 表1显色时间与吸光度 显色.时间(mh1)510152025303540455060 吸光度O.174O.198O.O.勰O.勰0.21DO.勰O.O.2050.2030.196 如表1所示,显色时间为15min时吸光度可达最大,稳定 显色范围为15—40rain,选择显色时间为20rain. 2.2最大吸收波长从580nm一610nm每隔5nm进行一次测 定(峰值处间隔2nm)以确定最大吸收波长,见表2. 表2吸收波长与吸光度 波长(nrn)580585590595596598600602604605610 吸光度0.1400.0.190O.236O.勰O.212O.210O.2)702030.1970.148 由表2可以看出在598nm处吸光度达到最大. 2.3标准曲线在以上条件确定之后,按照操作步骤进行标 准曲线的绘制,见表3. 表3标准曲线 由表3可确定曲线r=0.9996,a=一0.0008,b=0.2196. 2.4方法检出限本文采用的721分光光度计的灵敏度为吸 光度0.005,对应的氰化物最小检测质量为0.026t~g,若取lml 样品则最小检测浓度为0.026~~gml(对于有色或浑浊的样品最 小检测浓度同样为0.026~/m1). 2.5方法精密度和回收率在相同的实验条件下,对未知透 明酒样进行加标回收实验,同时确定方法的精密度.取20ml 未知酒样两份A和B,样品A按操作步骤进行测定,样品B检 测时,在取样后加入氰化物标准溶液0.5ml(相当于0.5氰化 物),同上操作.每份样品平行测定7次,实验结果,见表 4和表5. 中国卫生检验杂志2OO4年2月第l4卷第1期 ChineseJournalofHealthI~boratoryTechnology2OO4.Februa~..14.No.1 [文章编号]1004-8685(2004)01—59.02 [中图分类号]R155.51 RP—HPLC法测定染色黄鱼中的碱性橙含量 铁晓威,黄百芬,任一平 (浙江省疾病预防控制中心,杭州310009) [文献标识码]A 碱性橙(BasicOrange1I)是一种偶氮类碱性染料,俗名"王 金黄",主要用于纺织品,皮革制品及木制品的染色.根据美 国卫生研究所(NIH)化学品健康与安全数据库资料表明:摄 取,吸入以及皮肤接触该物质均会造成急性和慢性的中毒伤 有确凿的动物实验数据表明,该物质为致癌物,在接 害一. 触该物质时需使用无孔手套和呼吸面罩,以免对人体造成伤 害.根据《中华人民共和国食品添加剂使用卫生标准》(GB 2760)及《中华人民共和国食品卫生法》的相关规定,为禁止用 作食品添加剂的化学制品.由于碱性橙比其它水溶性染料如 柠檬黄,日落黄等更易于在鲜海鱼上染色且不易褪色,因此一 些不法商贩用碱性橙对黄鱼进行染色,以次充好,以假冒真. 欺骗损害消费者,危害消费者的身体健康. 目前国内尚无成熟的测定食品中碱性橙残留的方法,作 者建立了RP—HPLC法测定染色黄鱼中碱性橙残留的方法,取 得了满意的效果. 1材料与方法 1.1仪器与试剂美国BECKMANSYSTEMGOLJ)高效液相色 谱仪(126高压溶剂泵,166紫外一可见光检测器,508自动进样 器),32Karat色谱工作站,均质机,旋转蒸发仪,超声波振荡器, 离心机,碱性橙标样购自美国Sigma公司,甲醇为色谱纯,水为 重蒸水,其它试剂均为分析纯. 1.2色谱条件色谱柱:汉邦LichrospherC18(dp54.6tumiD ×150n~);流动相:甲醇一20mmol/L乙酸铵(印:40);流速: 1.0ml/min;检测波长449nm,柱温:室温,进样量:2oeJ. 1.3测定步骤按GB将黄鱼样品去骨去内脏,用均质机均 59 【测定方法】 质,准确称取均质后样品20.00g于200ml烧杯中,加入20g无 水硫酸钠搅拌均匀,加入50Tnl无水乙醇超声波提取15min,用 50ml无水乙醇再提取一次,合并两次的提取液,过无水硫酸钠 柱脱水.于70~C真空浓缩至干,加入1.0ml水,混匀后移入离 心管中20000r/min离心5Inin,取下层水相经0.45t~n的膜过滤 后进样分析. 2结果与讨论 2.1吸收波长的选择取适量标样用无水乙醇制成20t,g/ml 的溶液,在190nm一600Bin的波长范围内进行扫描,结果碱性 橙kmax=449nm(图1). 2.2流动相的选择 2.2.1甲醇含量对保留时间的影响用20mmol/L乙酸铵和 甲醇按一定比例?昆合考察不同配比对保留时间的影响(图2). 2.1.2流动相pH对保留时间的影响固定甲醇比例为60% (v/v)用乙酸和1M的氢氧化钠调节20mmol/L乙酸铵的pH 值,考察不同流动相pH对保留时间的影响(图3). 2.2标准曲线绘制准确称取碱性橙标样0.1000g用无水乙 醇溶解并定容到100m],分别量取此液(碱性橙浓度为1.0me/ ITI)适量,用无水乙醇稀释成浓度分别为0.39,0.78,1.56,3.12, 6.25,12.50,25.00,50.00,100.00,,~/ml的溶液,分别进样20, 记录色谱图和峰面积,以峰面积为横坐标,以碱性橙浓度为纵 坐标作图(图4). 得线性方程为:Y=1.38646×10—5X+0.00694053,r=0. 9999 {.}_{?}_{?}_{?}_{?}_{?}_{?}{?}_{?}_{?卜{?}{?}_{?}_{?}{?}{?}_{?}_{?}{?}_{?}_{?}_{?}{?}{?}_{?}{?}{?}_{?}_{?}{?}{?} _{?}{?}{?}_{?卜{?}{?}_{?}_{?}{?}{?}_{?}_{?}{?}_{?}_{?H?}_{?} 表4样品A测定结果 亟目吸光度含量()回收率(%) 由表4,表5可知应用本方法对于样品A,B测定的标准偏 差分别为1.o7%和0.94%,加标平均回收率可达99.5%,可以 满足日常检测的需求. 3结论 本方法常温下(25cc)即可快速显色(15min)并可稳定 25min,有利于日常快速分析. 本方法的实验过程中无须通过加弱酸,弱碱调节,DH可达 5.7—5.8,为适宜的显色条件. 通过实验验证,本方法可排除实验过程中样品溶液变浑 浊,无法比色的问题,可大大提高实际工作的效率. 参考文献 [1]杨惠芬,李明元,沈文,等.食品卫生理化检验标准手册[S].中国标 准出版社,1997. [2]中国预防医学科学院劳动卫生与职业病研究所.车间空气监测检 验方法[M].北京:人民卫生出版社,1990. [3]中华人民共和国卫生部卫生法制与监督司.生活饮用水卫生, 2001.6. (收稿日期:2003-08—2o)