化学发光免疫技术

化学发光免疫技术 第十章 化学发光免疫技术 Chemiluminescence Immunoassay 第一部分 目的要求和教学内容 一、目的要求 掌握:发光酶免疫分析、化学发光免疫分析、电化学发光免疫分析的原理;熟悉:化 学发光免疫技术的方法评价和在医学检验中的应用;了解:各种化学发光免疫技术类型的 技术要点、发光现象、化学发光剂种类及化学发光标记物的制备。 二、教学内容 1(发光与化学发光剂:发光，化学发光剂，化学发光标记物的制备。 2(发光酶免疫分析:原理，技术要点，方法学评价。 3(化学发光免疫分析:原理，技术要点，方法学评价。 4(电化学发光免疫分析:原理，技术要点，方法学评价。 5(化学发光免疫技术在医学检验中的应用。 第二部分 测 试 题 一、选择题 (一)单项选择题(A型题) 1(化学发光免疫检测的物质不包括 A(甲状腺激素 B(生殖激素 C(肿瘤标志物 D(血清IgG含量 E(血清总IgE含量 2(常用的HRP发光底物为 A(鲁米诺或其衍生物 B(AMPPD C(4一MUP D(吖啶酯 E(三联吡啶钌 3(常用的ALP化学发光底物为 A(鲁米诺或其衍生物 B(对一羟基苯乙酸 C(AMPPD D(吖啶酯 E(三联吡啶钌 4(电化学发光剂为 A(鲁米诺或其衍生物 B(对一羟基苯乙酸 C(4-MUP D(吖啶酯 E(三联吡啶钌 5(不需酶催化反应即可发光的发光底物是 A(鲁米诺 B(吖啶酯 C(三联吡啶钌 D(鲁米诺衍生物 E(4-MUF’ 6(4一MUP在AIjP催化下生成4一甲基伞形酮，在激发光作用下发出荧光的波长为 A(448nm B(360nm C(525nm D(570hm E(640nm 7(电化学发光免疫分析中，电化学反应进行在 A(液相中 B(固相牛 C(电极表面上 D(气相中 E(电磁铁表面 8(关于微粒子荧光酶免疫测定检测AFP，下列描述错误的是 A(常用的检测方法是双抗体夹心法 B(以微珠作为载体包被抗体 C(发光底物为AMPPD D(常用的标记酶为碱性磷酸酶 E(检测时激发波长为360nm 9(关于电化学发光免疫分析，下列描述错误的是 A(是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应 B(包括了电化学反应和光致发光两个过程 2+ C(化学发光剂主要是三联吡啶钌[Rubpy)] 3 D(检测方法主要有双抗体夹心法、固相抗原竞争法等模式 E(以磁性微珠作为分离载体 10(化学发光免疫分析的标记物为 2+ A(碱性磷酸酶 B(三联吡啶钌[Rubpy)] C(吖啶酯 3 D(鲁米诺 E(鲁米诺衍生物 11(参与三联吡啶钌电化学发光过程的物质是 A(碱性磷酸酶 B(三丙胺 C(吖啶酯 D(鲁米诺 E(HRP 12(化学发光免疫分析的分类依据主要是 A(按检测所需的时间长短分类 B(按所检测的物质类型分类 C(按检测反应的体系分类 D(按所采用的发光反应体系和标志物不同分类 E(按检测反应所采用的分离方法分类 13(化学发光酶免疫分析中对鲁米诺和过氧化氢起催化作用的酶是 A(ALP B(HRF， C(LDH D(AP E(ACP 14(关于电化学发光免疫测定检测血清HCG含量，下列描述错误的是 A(常用的检测方法是双抗体夹心法 B(常用磁珠分离技术 C(标记物是ALP一抗HCG抗体 D(B,F分离剂是抗HCG抗体包被的磁颗粒 E(发光反应需要三丙胺参与 15(用化学发光免疫测定技术中固相抗原竞争法测定CEA，若标本中CEA量越多， 则 A(形成的固相抗原一标记抗体复合物越少 B(形成的固相抗原一标记抗体复合物越多 C(待测的标本抗原一标记抗体复合物越少 D(未结合游离的固相抗原越少 E(游离的标记抗体越多 16(血清总IgE的定量分析不能采用的方法是 A(ELISA B(化学发光酶免疫测定 C(散射比浊免疫测定 D(电化学发光免疫测定 E(放射免疫分析 17(以AIJP为标记的化学发光酶免疫技术测定HBsAg，影响测定结果的情况是 A(血清 B(肝素钠抗凝血浆 C(EDTA抗凝血浆 D(肝素锂抗凝血浆 E(用分离胶分离的血清 18(可增强HRP催化鲁米诺氧化反应和延长发光时间，提高发光敏感度的物质是 A(萤火虫荧光素酶 B(H2O2 C(对-羟基苯乙酸 D(4-MuP E(三联吡啶钌 19(有关化学发光免疫分析测定血清AFP的描述，正确的是 A(标记物是吖啶酯标记抗AFP抗体 B(B,F分离采用PR沉淀试剂法 C(发光促进剂是萤火虫荧光素酶 D(常采用间接法 E(化学发光的条件是发光体系呈酸性 20(在微粒子荧光酶免疫分析中，作用于荧光底物4一MuP的标记酶是 A(AIJP B(HRP C(萤火虫荧光素酶 D(过氧化氢酶 E(葡萄糖氧化酶 (二)多项选择题(X型题) 1(化学发光免疫技术的方法学类型包括 A(时间分辨荧光免疫测定 B(化学发光免疫测定 C(荧光偏振免疫测定 D(化学发光酶免疫测定 E(电化学发光免疫测定 2(发光免疫技术的方法学类型包括 A(时间分辨荧光免疫测定 B(化学发光免疫测定 C(荧光偏振免疫测定 D(化学发光酶免疫测定 E(电化学发光免疫测定 3(可用于HRP的发光底物包括 A(鲁米诺或其衍生物 B(对一羟基苯乙酸 C(4一MuP D(吖啶酯 E(三联吡啶钌 4(ALP的常用发光底物包括 A(鲁米诺或其衍生物 B(AMPPD C(4一MuP D(吖啶酯 E(三联吡啶钌 5(在发光酶免疫分析中，抗原抗体反应模式主要有 A(固相抗原竞争法 B(双抗体夹心法 C(双抗原夹心法 D(PAP法 E(补体法 6(在化学发光免疫技术中，常用的B,F分离技术包括 A(磁颗粒分离法 B(微粒子捕获法 C(PEG沉淀法 D(PR试剂法 E(包被珠分离法 7(吖啶酯的发光特点包括 A(发光背景噪音低 B(化学反应简单 C(发光反应快速而无需催化剂 D(发光反应易受标本中抗凝剂(如EDTA)影响 E(易受血清非特异性酶的影响 8(在化学发光酶免疫测定技术中，常用的标记酶有 A(LDH B(ALP C(HRP D(gluCose oxidase E(ACid phosphatase 9(化学发光免疫分析通常用于 A(甲状腺激素检测 B(生殖激素检测 C(肿瘤标志物分子检测 D(贫血因子检测 E(淋巴细胞亚群检测 10(有关发光底物4一MUP(4一甲基伞型酮磷酸盐)发光特点的描述，正确的是 A(4一MuP在ALP催化下生成4一甲基伞形酮 B(激发光波长为360nm C(荧光波长为448nm D(需要H2O2参与发光反应 E(需在弱碱性的环境下才能发光 11(关于电化学发光免疫分析，下列描述正确的是 A(是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应 B(包括了电化学和化学发光两个过程 2+ C(化学发光剂是三联吡啶钌[Ru(bpy)] 3 D(检测方法主要有双抗体夹心法、固相抗原竞争法等模式 E(采用磁颗粒分离技术 12(下列关于化学发光免疫分析描述，正确的是 A(双抗体夹心法是用固相抗体和标记抗体与待测标本中相应抗原反应 B(双抗体夹心法分析其检测的发光量与待测的抗原含量成反比 C(固相抗原竞争法常用于小分子抗原的测定 D(固相抗原竞争法分析其检测的发光量与待测的抗原含量成正比 E(双抗体夹心法常用于大分子抗原的测定 13(化学发光酶免疫技术采用双抗体夹心法测定血清AFP，若血清中AFP含量越多，则 A(形成的固相抗体一抗原一标记抗体越多 B(形成的固相抗体一抗原一标记抗体越少 C(游离的固相抗体越少 D(游离的标记抗体越少 E(游离的标记抗体越多 14(作为化学发光剂应具备的条件包括 A(能参与化学发光反应 B(能与抗原或抗体偶联后形成稳定的结合物 C(偶联后仍保持高的量子效应和反应动力 D(能参与抗原抗体反应 E(不改变或极少改变被标记物的免疫活性 15(属于化学发光现象的是 A(FITC在激发光作用下发出荧光 B(对一羟基苯乙酸被HRP氧化而发光 C(萤火虫发光 D(AMPPD在碱I生条件下被ALP酶解而发光 E(吖啶酯在稀碱溶液中发光 二、填空题 1(化学发光免疫技术根据发光方式不同分为( )、( )和( )。 2(根据形成激发态分子的激发能相可将发光分为三种类型( )、( ) 和( )，发光剂分为( )和( )二种。 3(HRP常用的发光底物为( );AIJP常用的发光底物为( )和 4(发光酶免疫分析的技术要点包括( )、( )和( )三个过程。 5(发光酶免疫分析常用的标记酶有( )和( )，根据酶促反应底物不 同，发光酶免疫分析可分为( )和( )。 6(电化学发光免疫分析是( )和( )相结合的产物。它的标记物的发光原理与一 般化学发光不同，是一种在电极表面由( )引发的特异性化学发光反应，实际上 包括了( )和( )两个过程。ECL通过( )启动发光反应，而CL是通过 ( )启动发光反应。 三、名词解释 1(发光免疫技术(1uminescence immunoassay) 2(化学发光免疫技术(chemiluminescence immunoassay，CLIA) (发光(1uminescence) 3 4(发光剂(1uminescence reagent) 5(化学发光酶免疫测定(chemiluminescence enzyme immunoassay) 四、问答题 1(简述化学发光免疫分析的原理。 2(简述电化学发光免疫分析的原理。 (化学发光与荧光的根本区别是什么?简述化学发光的基本原理。 3 4(标记用的化学发光剂应符合什么条件? 5(在化学发光标记免疫测定中，使用吖啶酯作为标记物有何优点? 第三部分 参考答案与题解 一、选择题 (一)单项选择题(A型题) 1(D 2(A 3(C 4(E 5(B 6(A 7(C 8(C 9(B 10(C 11(B 12(D 13(B 14(C 15(A 16(C 17(C 18(A 19(A 20(A (二)多项选择题(x型题) 1(BDE 2(ABCDE 3(AB 4(BC 5(ABC 6(ABE 7(ABC 8(BC 9(ABCI) 10(ABC 11(ABCDE 12(ACE 13(ACD 14(ABCE 15(BDE 二、填空题 ， 1(化学发光酶免疫分析化学发光免疫分析 电化学发光免疫分析 2(光照发光生物发光化学发光荧光素生物发光剂 化学发光剂 3(鲁米诺AMPPD4一MUP 4(抗原抗体反应标记物游离部分和结合部分分离酶促发光反应及检测 5(AIJP HRP荧光酶免疫分析化学发光酶免疫分析 6(电化学发光免疫测定 电化学 电化学化学发光 电化合物混合 三、名词解释 1(发光免疫技术:是将发光分析和免疫反应相结合而建立的一种新的免疫分析技术。 这种方法不仅具有发光分析的高灵敏度，而且具有抗原抗体反应的高度特异性，包括光致 发光免疫技术和化学发光免疫测定技术。 2(化学发光免疫技术:是将化学发光分析和免疫反应相结合而建立的一种新的免疫 分析技术。该方法不仅具有发光分析的高灵敏度和抗原抗体反应的高度特异性，而且还具有分离简便、可以实现自动化分析的特点，包括发光酶免疫分析、化学发光免疫分析 和电化学发光免疫分析。 3(发光:一种物质由电子激发态回复到基态时，释放出的能量表现为光的发射，称为发光。分为光照发光、生物发光和化学发光。 4(发光剂:是指在发光反应中参与能量转移并最终以发射光子的形式释放能量的化 合物，分为荧光素、生物发光剂和化学发光剂。 5(化学发光酶免疫测定:采用以催化反应参与发光的酶如HRP或ATJP作为标记物， 标记检测用的抗原或抗体，待测标本与检测试剂进行免疫反应后，形成酶标抗原抗体复合物，结合在复合物上的酶催化其底物发生反应并产生发光效应。 四、问答题 1(化学发光免疫分析是用化学发光剂直接标记的抗原或抗体与待测标本中相应抗体 或抗原、磁颗粒性的抗原或抗体反应，通过磁场把结合状态(B)和游离状态(F)的化 学发光剂标记物分离开来，然后在结合状态(B)部分中加入发光促进剂进行发光反应， 通过对结合状态(B)发光强度的检测进行定量或定性检测。 2(电化学发光免疫分析是电化学发光和免疫测定相结合的技术，是一种在电极表面 由电化学引发的特异性化学发光反应，实际上包括了电化学和化学发光两个过程。ECL是 2+电启动发光反应。化学发光剂三联吡啶钌[Ru(bpy)]标记抗体，通过抗原抗体反应 3 和磁颗粒分离技术，根据三联吡啶钌在电极上发出的光强度的大小对待测的抗原或抗体进 行定量或定性检测。 3(化学发光和荧光的根本区别是形成激发态分子的激发能不同，荧光是发光物质吸 收了激发光后使分子产生发射光，化学发光是化学反应过程中所产生的化学能使分子激发 产生的发射光。 化学发光反应系统中以化学反应为基础，首要条件是吸收了化学能而处于激发态的分 子或原子必须能释放出光子或者能将能量转移到另一个物质的分子上并使这种分子激发， 当这种分子回到基态时能释放出光子。 4(能参与化学发光反应;与抗原或抗体偶联后能形成稳定的结合物试剂;偶联后仍 保持高的量子效应和反应动力;应不改变或极少改变被标记物的理化性质，特别是免疫 活性。 5(氧化反应不需催化剂，只要在碱性环境中就可进行，发光反应迅速，本底低;在 氧化反应中，结合物被分解，因此游离的吖啶酯的发光不受抑制;试剂稳定性好。