医院废水中总大肠菌群的测定
[适用对象] 环境科学专业
[实验学时] 4学时
一、实验目的
通过本实验学会测定医院废水中总大肠菌群的方法,通过本实验把握无菌操作的基本规程,掌握水中总大肠菌群测定的基本原理,利用相关仪器根据既定的步骤测定水中的总大肠菌群。
二、预习与参考
参考实验指导书,结合实验特色查阅相关文献资料进行实验
。
三、实验
1、原理
应用灭菌的滤纸吸收选择性培养基,细菌通过滤纸纤维膨胀而被固定并生长繁殖,大肠菌群在发育时伴随产生琥珀酸脱氢酶将纸片上的TTC(红四碳唑)还原状成不可逆的甲臜产生红色色素,即大肠菌在纸片培养基上呈红色菌落,菌落周围产生苏圈是大肠菌分解乳糖产酸使指示剂变色的结果。
2、水样采集
用采水器或其他灭菌器采集水样500ml放入灭菌瓶内,如果是经加氯处理的废水,需加1(5,硫代硫酸钠5ml除去余氯。
3、方法和步骤
每份预监测水样,接种水样总量为55(5ml,分别接种大纸片五张,小纸片10张。每张大纸片接种10ml水样,五张小纸片每张接种1ml,
另五张小纸片接种1:10稀释的水样lml。接种水样时要均匀涂布于纸片上,用手轻轻压平,作好标记于铺有湿纱布的搪瓷盘中。测总大肠菌群37??l?培养18,24h观察结果,测粪大肠菌群44(5??l?培养18,24h,观察结果。
4、判定
(1)纸片上出现紫红色菌落,周围有黄圈者为阳性或出现片状红晕周围为黄地者亦为强阳性。
(2)纸片为一种颜色而无菌落生长者为阴性。
(3)纸片呈紫红色或紫色,菌落周围无黄圈者为阴性。
(4)酸性水样接种后纸片变黄,经培养无紫红色菌落者为阴性。
(5)纸片变色并呈不典型菌落结果可疑者,应作复发酵进行验证。
5(报告结果
根据阳性纸片张数,查MPN值表,报出1L水中大肠菌群或粪大肠菌群数。
四、主要食品设备功能和
清单
灭菌的滤纸、选择性培养基、1(5,硫代硫酸钠、采水器、灭菌瓶。
五、实验要求
如水样污染较重可采取适当稀释后接种,乘以稀释倍数,报出结果。
六、实验报告要求
1、根据实验要求,在实验时间内到实验室进行实验时,一边测量,一边记录实验数据。报告要求准确、美观。
2、 在实验中,如果发生实验测量数据与事先的计算数值不符,甚至相差过大,此时应该找出原因,不能不了了之。同时要把通过实验所测量的数据与计算值加以比较,如果误差一般5,以下。
3、在报告的最后要完成指导书上要求解答的思考
。
七、思考题
1、此种方法还可适用于哪种污水中大肠杆菌的测定,
2、对于生活饮用水测定水中大肠杆菌可采用哪用方法,
八、实验成绩评定办法
本门实验课程考核成绩占课程总成绩的30,,考核分实验预习、实验过程操作、实验报告和实验技能等四个方面,其成绩计算为预习实验(包括资料搜集)占10%、实验过程操作(包括实验流程、调试过程)占25,、实验报告(包括原理描述、数据记录、实验结果和效果)占25,、实验技能考核(包括解决问题的能力)或考试占40,。凡考核不及格者,应参加补考或重修。