关于客户反馈感受态细胞DH5α生长速度慢长斑小的问题的说明

关于客户反馈感受态细胞DH5α生长速度慢长斑小的问题的说明 北京庄盟国际生物基因科技有限公司 Beijing Zoman Biotechnology CO.,LTD 关于客户反馈感受态细胞DH5α生长速度慢/长斑小的问题的说明 随着我公司感受态产品的大量销售～有少数客户反馈感受态细胞DH5α生长速度慢/长斑小的问题。通过与客户沟通和大量实验证明:感受态细胞DH5α生长速度慢/长斑小是由于长斑数太多引起,并非感受态细胞质量问题。 现象:菌斑小,多,密. 原因:我公司感受态细胞转化效率高, 获得的转化细菌多,如果涂板菌液太多～则菌斑太密, 细胞营养不良～生长缓慢,导致菌斑偏小。 我公司的DH5α感受态～每一批次都有完善的质量检测～必须达到 88×10以上的转化效率。我们将感受态转化效率降低到10的7次方,甚至是10的6次方,然后按照客户的方式全部涂板～则平板上的菌斑数目适中～细胞生长快速快,菌斑体积变大,如果我们还是使用公司的正常产品～但减少涂布量～如涂布20-100ul等～也能达到实现上述目的。 结论: 菌斑大小和生长快慢与菌斑数目成反比关系 菌斑数目越多～菌斑生长越慢,体积越小。 建议长斑数:控制在1000个以内为最佳～超过10000个则严重影响细胞生长。 具体操作方法:建议转化时取部分菌液涂板～剩余菌液臵于4?保存～第二天观察长斑情况～若长斑太少可增加涂板量,若长斑太多则适当减少涂板量。 总的来说～涂布量的多少与转化子的多少有直接关系。而转化子的多少～就质粒而言～与质粒的大小、多少及纯度都有关系。对于连接产物则比较复杂了～转化子数目与载体、连接酶、片段大小及其浓度和纯度等因素相关～推荐按载体使用说明书操作。 第 1 页 共 4 页 北京庄盟国际生物基因科技有限公司 Beijing Zoman Biotechnology CO.,LTD 实验结果如下:37?过夜培养(19:00-8:00;13个小时左右) 感受态细胞DH5a 转化1ul 0.1ng/ul pUC19质粒梯度涂板 结论:长斑数越多～单位时间内长斑越小 第 2 页 共 4 页 北京庄盟国际生物基因科技有限公司 Beijing Zoman Biotechnology CO.,LTD 客户实例: 涂板量1/10菌液 减少涂板量 涂板量1/30 稀释3倍 37?过夜培养(13个小时左右) 第 3 页 共 4 页 北京庄盟国际生物基因科技有限公司 Beijing Zoman Biotechnology CO.,LTD 客户转化质粒 涂板量:1/10 减少后涂板量 1/100 稀释100倍 37?过夜培养(13个小时左右) 第 4 页 共 4 页