肿瘤坏死因子

肿瘤坏死因子 肿瘤坏死因子 背景:腰椎间盘突出症是骨科的常见病症之一，以腰腿痛为主要临床现，严重影响患者的生活质量。炎性因子在椎间盘退行性变中起到重要作用，有研究报道在退变的椎间盘组织中发现TNF-α异常表达。目的:制作肿瘤坏死因子-α(TNF-α)作用下兔椎间盘退变(IVDD)的动物模型，研究TNF-α对髓核组织的影响。方法:成年健康新西兰大白兔30只，体重: 2.5- 3.0Kg，经右后外侧入路暴露(L2- 3、L3- 4、L4-5和L5-6)四个椎间隙,椎间盘分组处理:L3/ 4、L4/5为作为实验组，每个椎间盘髓核使用微量注射器注射20ng/ul TNF-α15ul;L5/6作为对照组，每个椎间盘髓核使用微量注射器注射15ul PBS;L2/3作为空白组，不做处理。分别于术后4周、8周、12周随机抽取10只新西兰大白兔行X线及磁共振(MR)检查,检查完后处死实验动物，取髓核组织经行HE染色、免疫组化及原位末端标记检查。结果: (1)X线检查:术后第4周至第12周，X线可见实验组椎间隙高度进行性下降，平均DHI%值随时间延长而明显减小，与空白组、对照组相比术后 4、 8、12周三个时间点差异均有显著性意义(P0.05)，而对照组和空白组相比术后 4、 8、12周三个时间点差异无显著性意义(P0.05)。 (2)MRI检查:术后第4周至第12周，MRI可见实验组椎间隙T2加权像信号逐渐降低，按改良的Thompson分级分级随时间延长逐渐偏向严重，与空白组、对照组相比术后 4、 8、12周三个时间点差异均有显著性意义(P0.05),而对照组和空 白组相比术后 4、 8、12周三个时间点差异无显著性意义(P0.05)。 (3)HE染色:镜下观察:对照组及空白组在术前及术后各阶段组织学无明显改变，中央髓核组织可见大量的脊索细胞和少量的类软骨细胞;而 4、8周实验组组髓核细胞逐渐减少，12周髓核组织内可见大量纤维软骨组织。 (4)免疫组化染色及TUNEL显示:I型胶原、Bax表达及细胞凋亡率:术后 4、 8、12周三个时间点实验组和空白组、对照组差异有显著性(P0.05)，且实验组的表达和细胞凋亡率随时间增加，而术后 4、 8、12周三个时间点对照组和空白组无显著差异(P0.05);?型胶原、Bcl-2:术后 4、 8、12周三个时间点实验组和空白组、对照组差异有显著性(P0.05)，且实验组的表达随时间逐渐减少，而术后 4、 8、12周三个时间点对照组和空白组无显著差异(P0.05)。结论: 1.TNF-α可介导髓核细胞的凋亡，且凋亡率随时间延长而逐渐升高，即TNF-α可介导髓核的退变;微量注射器的穿刺作用对细胞凋亡无明显影响。 2.TNF-α介导的椎间盘术后椎间隙高度丢失，且丢失的高度随时间延长而逐渐增加;且TNF-α介导的椎间盘T2加权信号随时间延长逐渐降低。 3.TNF-α介导的椎间盘髓核细胞内?型胶原表达逐渐增多，?型胶原表达逐渐减少，从而椎间盘的抗压能力下降。 4.在TNF-α介导的髓核组织内bcl-2阳性细胞百分比逐渐降低，而bax阳性细胞百分比逐渐升高，说明TNF-α诱导的椎间盘退变过 程中，Bcl- 2、Bax发挥着重要调控作用。 5.成功建立了TNF-α作用下的IVDD动物模型。 摘要5-7Abstract7-9前言9-11材料和方法11-22结果22-41讨论41-48结论48-49 参考文献 49-53致谢53-54附录A 中英文缩略词表54-55附录B 个人简历及发表55-56附录C 综述56-65 参考文献 62-65