伤口愈合细胞划痕实验

伤口愈合细胞划痕实验 伤口愈合/细胞划痕实验新方法 细胞划痕实验(Wound Healing)是一种操作简单，经济实惠的研究细胞迁移/肿瘤侵袭的体外试验方法。这种方法的原理是，当细胞长到融合成单层状态时，在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。 基本的步骤包括“划痕”的制造，细胞迁移期间图像的获得以及后期数据的处理。 特点: 1. 在一定程度上模拟了体内细胞迁移的过程。 2. 非常适合研究细胞与胞外基质(ECM)，细胞与细胞之间相互作用引起的细胞 迁移。 3. 与包括活细胞成像在内的显微镜系统兼容，可用于分析细胞间的相互作用。 4. 研究细胞迁移的体外实验中最简单的方法。 传统实验方法 实验步骤: 1. 培养板接种细胞之前先用marker笔在12孔板背面画横线标记(方便拍照时定位同一 个视野)。 2. 细胞消化后接入12孔板，数量以贴壁后铺满板底为宜(数量少时可培养一段时间至铺满板底)。 3. 细胞铺满板底后，用1 ml枪头垂直于孔板制造细胞划痕，尽量保证各个划痕宽度一致。(人工枪头制造划痕难以保证划痕宽度的一致性，影响实验结果，这也是该方法最大的缺陷。) 4. 吸去细胞培养液，用PBS冲洗孔板三次，洗去划痕产生的细胞碎片。 5. 加入无血清培养基，拍照。 6. 将培养板放入培养箱培养，每隔4-6小时取出拍照。 7. 根据收集图片数据分析实验结果。 Culture Insert方法 1. 准备细胞，培养液，culture Insert。 2. 如图，将细胞接种于Dish中间的Insert，细胞长满Insert 区域后用镊子移除Insert即可产生500 μm宽度的划痕。 3. 每隔4-6小时拍照记录。 4. 根据收集图片数据分析实验结果。 实验原理示意图 总结:相比较于传统的划痕实验，Ibidi的设计更科学、重 现性更好: 除了保证划痕均一性的难题，相信各位同学觉得最难的还有 后期实验结果的处理，这里给大家分享一个操作非常简单的 在线软件，只需注册就可以免费使用，只要上传图片很快就 能把实验结果发到注册邮箱，非常方便。 Wound Healing Image Analysis - WimScratch Analysis Data Contains: Cell covered area Speed of closure (available ? 5 images) Acceleration characteristics (available ? 5 images) Overview chart Center piece approximation (available ? 10 images)