穿心莲中穿心莲内酯的提取

穿心莲中穿心莲内酯的提取 摘要:从药用植物穿心莲中提取穿心莲内酯。150克穿心莲粗粉甲醇回流提 取～水沉去杂质～二氯甲烷脱酯,活性碳脱色～结晶得穿心莲内酯精品1.5克～收 率为1%～其含量为98.5%。 关键词:穿心莲 ,穿心莲内酯 ,提取工艺 Abstract: Withdraws the Andrographis Paniculta lactone from themedicinal plant Andrographis Paniculta( Uses the methyl alcoholbackflow to withdraw～ the water sinks ～the methylenechloride escapes the ester～the activated carbon decolorizes～thecrystallization results in the Andrographis Paniculta lactonehigh-quality goods 1.5 grams～ the returns-ratio is 1%, its content is98.5%( Key word: Common Andrographis Herb ，Andrographolide ，Extract method 1(前言 穿心莲为爵床科穿心莲属植物，药用叶或全草，秋初茎叶盛时采割，晒干。在中药里归为凉性药物。穿心莲在亚洲，几个世纪以前就用于治疗胃肠道和呼吸道感染、发热、疱疹、咽喉痛和各种细菌性感染。在中医里，穿心莲是一种治疗感冒的重要草药，它用于退 [1]热、驱毒。穿心莲不仅能抑HIV-1，还能抑制HIV-1对细胞的毒性和在细胞间的传播，从多途径抑制HIV-1，因而能防止HIV-1抗药性突变的形成。穿心莲价格低廉，且经过修 [2]饰的穿心莲内酯衍生物具有更强的抗HIV-1活性。因而穿心莲及其衍生物用于艾滋病的治疗具有广阔的前景。 由于穿心莲内酯是穿心莲的主要有效成分，穿心莲内酯的含量，与其产地、收期、部位和提取工艺有很大的关系。与茎、果相比，穿心莲叶中含穿心莲内酯最高;穿心莲内酯为酯类结构，在水溶液中易水解、开环、异构化，故影响药物稳定性。在对穿心莲内酯的稳定性研究中发现 ，在不同温度、不同pH值环境、不同的生物样品及不同有机溶剂中，穿心莲内酯稳定性都有较明显的差异。温度越低，穿心莲内酯的稳定性越好;在碱性条件下不稳定，且随着碱性强度的增加，其不稳定性增强;在pH值为7的条件下，该药并不稳定，其最稳定的pH值为3,5;在酸性条件下，该药较稳定，但并非酸性越强，稳定性就越好。目前已经发现穿心莲内酯具有以下药理作用: 抗菌消炎、解热作用;抗癌和免 [3-7]疫调节作用; 病毒和免疫增强作用;心血管作用;保护肝脏。 正由于穿心莲内酯具有这样广泛的药理作用，也使得人们对穿心莲内酯的提取工作发 1 生了强烈的兴趣和关注。 2(材料与方法 2(1 材料与仪器 干燥穿心莲全草 购于都江堰某药店 其余试剂为分析纯 甲醇 氯仿 丙酮 RE-52型旋转蒸发(上海亚荣生化仪器厂) SHB-3型循环真空多用泵(郑州杜甫仪器厂) 电热恒温鼓风干燥箱(上海跃进医疗仪器厂) 硅胶薄层板(上海分析仪器厂) 分析天平(上海精科天平厂) 微量移液管(上海求精玻璃仪器厂) 毛细管(上海分析仪器厂) 2(2 方法 有关穿心莲内酯提取分离的方法报道较多，有水提醇沉法、碱提乙醇重结晶法、水提 [8]大孔吸附树脂洗脱法等。现综合考虑操作的简易程度、成本高低以及环境保护、提取效率等因素，拟采用甲醇回流提取方法。 2(3具体操作步骤 2.3.1提取: 1000毫升烧瓶加入150克叶粉，再加入95%甲醇水液6倍(900毫升)，水浴(72?)加热回流提取两小时，过滤得滤液;第二次提取加入4倍液，回流两小时;第三次提取加入4倍液，回流提取1.5小时。三次提取液分别为:650毫升，610毫升，610毫升。合并三次提取液，备用。 2(3(2浓缩: 水浴(72?)，减压浓缩至稠膏状。 2(3(3水沉: 稠膏加入3倍原料体积的50%甲醇液(450毫升)，回流半小时，静置12小时，过滤，除去叶绿素。色素用少量50%甲醇洗涤一次，合并滤液和洗液。 2(3(4浓缩: 2 滤液减压浓缩(水浴72?)至出现严重混浊时为此(原料与药液之比约为1比0.25即40毫升左右)。放冷析出膏状物，倾出水液，得膏状物15克。 2(3(5脱酯: 膏状物加入3倍二氯甲烷(45毫升)，一倍自来水，回流2小时(水浴65?)，静置到室温后，放出二氯甲烷，再加入2倍二氯甲烷(30毫升)，搅拌20分钟，静置分层，分出二氯甲烷，再重复一次，分出二氯甲烷后，上层水液及不溶物加热(水浴60?)，赶尽二氯甲烷，放冷，过滤得穿心莲粗膏。 2(3(6脱色: 穿心莲粗膏加入30倍95%甲醇回流溶解，加入3克活性炭，加热回流一小时(水浴70?)，趁热真空抽滤，并用少量甲醇洗涤活性炭，合并滤液及洗液，水浴70度左右减压浓缩至有大量晶体析出为止，真空抽滤，并用少许甲醇洗涤晶体，抽干，70度以下烘干，得穿心莲粗晶2.6克。 2(3(7精制: 穿心莲粗晶2.6克，加入15倍95%以上浓度的甲醇(39毫升)，加入1克活性炭，70度水浴回流半小时，趁热真空抽滤，并用少量甲醇洗涤活性炭，合并滤液及洗液，水浴70度左右减压浓缩至有大量晶体析出为止，真空抽滤，并用少许甲醇洗涤晶体，抽干，母液再浓缩一半，再结晶，抽干，70度以下烘干，得穿心莲精品1.5克。 2.4 鉴定 取本品2mg，加乙醇3ml，微温溶解，放冷，加1%3,5-二硝基苯甲酸的乙醇溶液1ml，氢氧化钠试液2滴。 取本品10mg，加乙醇2ml溶解后，加乙醇制氢氧化钾试液2-3滴。 取本品加无水乙醇制成1ml中含4mg溶液,作为供试品溶液,另取对照品适量制成每1ml中含0.1mg的对照溶液。用毛细管分别吸取上述两种溶液点于同一硅胶薄层板上,以氯仿-乙醇(20:2)为展开剂。展开、凉干,置碘蒸气所中显色。 3.实验结果与分析 3 3.1提取结果与分析 实验结果如表1所示 原料 浸膏量 穿心莲粗品 穿心莲精品 穿心内酯收率 (g) (g) (g) (g) (%) 150 14 2(6 1(5 1 [9]张春滨等用冷浸提取方法，所用的时间需要2-3天，穿心内酯的收率为0.7%。用回流提取只需5.5小时，穿心莲内酯的收率为1%。回流提取方法与冷浸时取方法相比，不仅提取时间短,而且收率也更高。 [10]郭彬等采用水回流提取一般可将多糖等多种水溶性杂质提取出来，水提取出膏率较高，但穿心莲内酯水溶性较低，有效物质提取量较低，不适合穿心莲的提取。 [11]葛发欢等采用超临界CO2萃取技术，所得萃取物有效成分富集，稳定性好，穿心莲内酯收率高，但是设备投入较大，生产成本高。 与以上两种方法比较，甲醇回流提取方法工艺流程简单，所需设备要求不高，有机溶剂可以回收再次利用，成本较低，且穿心莲内酯收率较高，适用于工业化大生产。 3.2鉴定结果与分析 取本品2mg，加乙醇3ml，微温溶解，放冷，加1%3,5-二硝基苯甲酸的乙醇溶液1ml，氢氧化钠试液2滴。显紫红色。 取本品10mg，加乙醇2ml溶解后，加乙醇制氢氧化钾试液2-3滴.渐显红色。 取本品加无水乙醇制成1ml中含4mg溶液，作为供试品溶液，另取对照品适量制成每1ml中含0.1mg的对照溶液。用毛细管分别吸上述两种溶液点于同一硅胶薄层板上,以氯仿-乙醇(20:2)为展开剂。展开、凉干，置碘蒸气所中显色。显色结果如图1所示，在与对照品相应的位置上显相同的颜色的斑点，未出现杂质斑点。证明所提取的物质为穿心莲内酯。 4 图1 5 参考文献 [1] 中国药典[S].一部，2000.220 [2] 陈平圣.穿心莲抗癌作用的实验研究.实用中西医结合杂志[J],1991,1(4):33. [3] 黄泰康.常用中药成分与药理用册()[M].北京中国医药科技出版社,1999,1465. [4] 李良桥,康尔芳,贾丹兵等.穿心莲拓展应用.在医药学报[J],1995,23(4):18. [5] 彭光勇,周峰,丁如宁,等.莲必治注射液(穿心莲内酯)对免疫功能的调节作用.中国中药杂志 [J],2002,27(2):147. [6] 高福宽,张文同,周苏宁.穿心莲心血管药理作用研究进展.中草药.2000,31(10):6-8. [7] 汪宝琪,尹鸿.穿心莲内酯在免体内脏的分布研究.西北药学[J].1995,10(2):50-52. [8] 吴俊伟,古淑英.酸水法及其它方法提取穿心莲内酯的比较[J],1999,33(2):22-35. [9] 张春滨,王昆,顾文涛.穿心莲内酯工艺改进探讨[J].安徽医药[J],2002,6(3):7-8. [10] 郭彬，娄勇，蒋群等.穿心莲浸膏的提取工艺研究[J].安徽医药[J],2002,6(3):7-8. [11] 葛发欢,等.超临界CO2流体萃取穿心莲有效成分时的正交试验研究{[J].中药材[J]，2002，25 (2):69-71. 6