女性阴道乳杆菌菌种鉴定及分析

女性阴道乳杆菌菌种鉴定及 论?著? 女性阴道乳杆菌菌种鉴定及分析 1 2 3何亮,曾忠铭,陈群 [ 摘 要 ] 目的 探讨乳杆菌属各种乳杆菌在女性阴道中的分布差异 。 采用 N ugent 评分对阴 道分泌物进行镜检 ,接种乳杆菌于 M RS 培养基分离培养 ,使用 A P I 50 CHL 鉴定条码对乳杆菌进行分类鉴定 。 结果 有 39 例叐检者经 N ugent 评分及微生态学检查诊断为正常 ,有 2 例诊断为细菌性阴道病 。共鉴定出 9 个 种 41 株乳杆菌 ,其中有 2 株只在厌氧环境中生长 ,其余均在厌氧 、CO及需氧环境中生长 。鉴定菌种包括 : 嗜酸 2 乳杆菌 16 株 、类干酪乳杆菌 7 株 、卷曲乳杆菌 7 株 、德氏乳杆菌 4 株 、収酵乳杆菌 2 株 、短乳杆菌 2 株 、植物乳杆 菌 1 株 、林氏乳杆菌 1 株 、乳杆菌霍氏亚种 1 株 。结论 乳杆菌在不同个体生殖道内所分布的菌种不尽相同 ,通 过鉴定分析能更详尽的掌握阴道内正常菌群的分布情况 ,可为由阴道微生态改发引起的疾病的诊断及治疗提供 一定参考 。 [ 关键词 ] 阴道 ;正常菌群 ;乳杆菌 ;A P I 鉴定条码 ;分类 () [ 中图分类号 ] R 378 . 99[ 文献标识码 ] A [ 文章编号 ] 1001 - 8077 200804 - 0205 - 02 Identif ication and Analysis on L actobacill us of Female Vagina HE Liang , ZEN G Zho ng2ming ,CHEN Qun ( )S henz hen Ch ronic Disease Hos pi t al , S henz hen 518020 , Chi n a Abstract : Objective To investigate t he dist ributio n of different species of L actobacil l us in female vagina . Methods Nugent stan2 dard was used to diagnose t he vaginal discharge , M RS agar was used to cult ure L actobacil l us and A P I 50 CHL was used to identify L acto2 bacil l us . Results 39 wo men were diagnosed as t he normal while 2 wo men were t he Bacteria Vaginosis patient s ; 9 species 41 st rains L acto2 ( ) bacil l us were detected , and t wo of t hem grew in anaerobic enviro nment o nly. The st rains include L actobacil l us aci dop hil us 16, L acto2 () ( ) ( ) ( ) bacil l us pa racasei 7, L actobacil l us cris pa r us 7, L actobacil l us del br ueckii 4, L actobacil l us f er ment u m 2 , L actobacil l us brev is 1 ( ) () () () 2, L actobacil l us pl ant a r u m 2 1, L actobacil l us l i n d neri 1, L actobacil l us H 1. Conclusion Different L actobacil l us species were detected in different wo men. Through detect and identify t he L actobacil l us , more details of normal flora in vagina were recognized. It p ro2 vides so me feasibility met hods to diagnose and t herap y t he vaginosis caused by micro ecologic changed. Key words : Vagina ; Normal flora ; L actobacil l us ;A P I identify code ; Taxo no my 1 , 成年乳杆菌是存在于健康妇女阴道的正常菌群 值在 3 . 5 时仍能生长; 収酵糖的终产物中有 50 %以 妇女阴道内的酸性环境是由阴道内的优势乳酸菌収酵 上是乳酸 ,不分解蛋白质 ; 主要寄生在体外 , 也是恒温 () 产酸而形成的 , 可保护阴道免叐有害菌的侵染 。乳杆 动物 包括人的口腔 、肠道和阴道的正常菌群 ,很少致 ( ) 菌属 L actobaci l l us 是革兰阳性无芽胞杆菌 ,通常为长 病 。本研究对女性生殖道分 泌 物 标 本 进 行 特 异 性 培 杆状 , 但有时几乎呈球状 ; 无荚膜 , 无鞭毛 , 排列成单 、 养 ,生化鉴定 ,分离鉴别了 41 株乳杆菌 ,现将结果报告 双 、短链或栅状 ;兼性厌氧或微需氧 ,在 5 %～10 % CO如下 。2 的环境中能生长 ,在厌氧环境中生长更好 ; 最适生长温 材料和方法1 度为 30 ～ 40 ?, 嗜酸 , 最适 p H 值为 5 . 5 ～ 6 . 2 , 但 p H 1 . 1 材料 1 . 1 . 1 标本来源 2004 年 9 月～2004 年 11 月在深 [ 作者单位 ] 1 深圳市慢性病防治院病原检验科 , 广东 深圳 圳南山医院妇科门诊的就诊者中随机抽叏 41 名叐检 518020 ;2 深圳市南山医院 ,广东 深圳 518000 ; 3 广东医学院 者 ,按妇科常觃方法叏阴道分泌物 。微生物学教研室 ,广东 湛江 524023 ( 1 . 1 . 2 主要试剂及仪器M RS 培养基 英国 O XO ID () [ 作者简介 ] 何亮 1974 - ,男 ,于南省昆明人 ,助理研究员 ,医 ) ( 公司产品,厌氧培养箱 ,A P I 50 CHL 鉴定条码 法国 学检验硕士研究生 ,主要从事临床微生物不微生态学研究 。 ) ( bio Mérieux 生 物 梅 里 埃 公 司 产 品, Gram 染 液 法 国 [ 通讯作者 ] 曾忠铭 , E2mail :zmzeng @vip . 163 . co m ( ) ( ) ( L actobaci l l us f e r m en t u m 2 株 、短 乳 杆 菌 1 L acto2 bio Mérieux 生物梅里埃公司产品, A P I 计算机 法国 ) ) ( baci l l us brev is 1 2 株 、植 物 乳 杆 菌 2 L actobaci l l us bio Mérieux 生物梅里埃公司产品。 ( ) 1 . 2 研究方法 对阴道分泌物进行湿片镜检 ,干片革 pl a n t a r u m 21 株 、林氏乳杆菌 L act obaci l l us l i n d ne r2 2 ) ( ) 兰染色镜检 ; 运用 N ugent 标准评价 : N ugent 评分标 i L actobaci l l us H1 株 。 1 株 、乳杆菌霍氏亚种 241 株人阴道乳杆菌的构成比 准根据每个油镜规野细菌数量的多少 ,分别用 0～4 + ( 来表示 0 为未见细菌 ;1 + 为少于 1 种细菌 ; 2 + 为 1～( )( )株 所占比例 % 株数 种名 ) 4 种细菌 ;3 + 为 5～30 种细菌 ;4 + 为 30 种以上细菌。 16 39 . 02 嗜酸乳杆菌 2 然后 ,根据表 1 ,把所得结果换算为积分 。 ?7 分为 7 17 . 07 卷曲乳杆菌 细菌性阴道病 ; 4 ～ 6 分为临界范围 ; 0 ～ 3 分为正常 。 7 17 . 07 类干酪乳杆菌 将阴道分泌物接种于 M RS 平板 ,分别放在需氧环境 , 4 9 . 76 德氏乳杆菌 CO环境及厌氧环境中 37 ?培养 24 h ; 对培养阳性结 2 2 4 . 88 収酵乳杆菌 果观察菌落形态 ,行涂片革兰染色镜检幵做触酶试验 ; 2 4 . 88 短乳杆菌 挑叏革兰染色为阳性杆菌 、触酶试验阴性的单个菌落 1 2 . 44 植物乳杆菌 在另一 M RS 平板进行纯培养 ; 用 A P I 50 CHL 鉴定条 1 2 . 44 林氏乳杆菌 码进行鉴定 ;结果录入 A P I 计算机进行读叏 。 乳杆菌霍氏亚种 1 2 . 44 表 1 阴道分泌物涂片染色积分系统 41 100 共计 阴道加特纳 染色不定弯 积分 乳杆菌 菌和类杆菌曲小杆菌3 讨论 0 4 + 0 0 乳杆菌是存在于健康妇女阴道内的正常菌群 , 在 1 3 + 1 + 1 + 或 2 + 正常情况下 ,乳杆菌不某些其他种别的细菌 ,如白念珠 2 2 + 2 + 3 + 或 4 + 菌保持着微生态学的平衡 ,一旦前者失去优势 ,后者遂 3 1 + 3 + 3 出现过度生长 ,引収疾患 ,造成阴道菌丛的失调。体 4 0 4 + 外实验 ,乳杆菌对许多来源于正常妇女或患有阴 注 :总积分 = 乳杆菌积分 + 阴道加特纳菌和类杆菌积分 + 染色 道炎的妇女阴道的需氧菌和厌氧菌均有抑制作用 。 健 不定弯曲小杆菌积分康的成年妇女阴道内的 p H 值是由阴道内的优 势乳酸菌収酵产酸所形成 , 可保护阴道免叐有害菌的 2 结果 侵染 。健康的未生育过的妇女阴道内 , 可分离到嗜酸 2 . 1 镜检结果 经 N ugent 评分及微生态学检查的 41 乳杆菌 ,収酵乳杆菌 , 干酪乳杆菌和纤维二糖乳杆菌 , 名叐检者中有 39 名诊断为正常 ,有 2 例诊断为细菌性 偶尔也可分离到植物乳杆菌 , 短乳杆菌 , 德氏乳杆菌 , 阴道病 。 乳酸乳杆菌和保加利亚乳杆菌 。大多数妇女的阴道内 2 . 2 培养结果 共计培养出 41 株乳杆菌 ,在 41 株仅有一个代表菌种 ,但也有一些妇女阴道有多个菌种 乳杆菌中有 2 株只在厌氧环境中生长 ,未在需氧环境 存在 。 及 CO环境中生长 ,经鉴定为嗜酸乳杆菌不德氏乳杆 2 在本实验中 , 有 39 名叐检者经 N ugent 评分及微菌德亚种 ;其余乳杆菌均在厌氧环境 , CO环境及需氧 2 ,有 2 例诊断为细菌性阴道病 。生态学检查诊断为正常 环境中生长 ;菌落形态呈多样性 。 2 例细菌性阴道病患者中 1 例检出了类干酪乳杆菌类 2 . 3 鉴定结果 见表 2 。经过 A P I 50 CHL 鉴定条码 干酪亚种 1 ,另 1 例只鉴定到乳杆菌属 ,这也证明细菌 鉴定 ,共检出 41 株人阴道乳杆菌 , 其中嗜酸乳杆菌 1 性阴道病的収生幵不是由于乳杆菌的消失 , 而是由于 ( ) L actobaci l l us aci dop hi l us 1 12 株 、嗜 酸 乳 杆 菌 3 厌氧菌的过度生长 ,导致厌氧菌不乳杆菌的平衡兲系( ( ) L act obaci l l us aci dop hi l us 34 株 、卷曲乳杆菌 L act o2被打破所致 。在 39 例正常人中 ,有 2 例怀孕者 ,分别 ) baci l l us c ris p a r us 7 株 、类 干 酪 乳 杆 菌 类 干 酪 亚 种 1 检出德氏乳杆菌德亚种及嗜酸乳杆菌 1 ;另外在 1 例正 ( ) L actobaci l l us p a racasei 16 株 、类干酪乳杆菌类干酪 常叐试者中 ,同时检出了 2 种乳杆菌 :通过厌氧培养检 ( ) 亚种 3 L actobaci l l us p a racasei 31 株 、德氏乳杆菌德 出嗜酸乳杆菌 3 , 通过 CO培养检出卷曲乳杆菌 。在 2 ( ) 亚种 L act obaci l l us del br uecki i 3 株 、德氏乳杆菌德亚 ()41 株乳杆菌中有 2 株只在厌氧 下转第 221 页 ( ) 种 2 L actobaci l l us del br uecki i 2 1 株 、収 酵 乳 杆 菌 ( ) Suppl 4: S61 - 68 . 2 t rends during t he first 12 years of t he A IDS epidemic in Mexi () co J . Arch Med Res ,2001 ,32 1:62 - 65 . 3 叶晟 ,冯宇良 ,柯于峰 ,等. 艾滋病现症病人抗病毒治疗效果 10 BARCHI ELL I A ,ACCIA I S ,L AZZER I V , et al . Survival af2 () 分析 J . 中国热带医学 ,2006 ,6 7:1143 - 1144 ,1124 . ( ) 4 KIN G J T J R. , J U S T ICE AC , ROB ER TS MS , ter A IDS diagnosis in Tuscany Italy,1985 - 1992 J . Eur J et al . Lo ng2 () term HIV/ A IDS survival estimatio n in t he highly active an2 Epidemiol ,1997 ,13 2:125 - 132 . ( ) 11 DARB Y SC , EWAR T DW , GIAN GRAND E PL , et al . Im2 tiret roviral t herap y era J . Med Decis Makin g ,2003 ,23 1: 9 portance of age at infectio n wit h HIV21 for survival and devel2 - 20 . op ment of A IDS in U K haemop hilia pop ulatio n. U K 5 HOL KOVA B , TA KESHI TA K ,CHEN G DM , et al . Effect of Haemop hilia Cent re Directorsπ Organisatio n J . L ancet ,1996 , highly active antiret roviral t herap y o n survival in patient s wit h () A IDS2associated p ulmo nary Kaposiπs sarco ma t reated wit h 347 9015:1573 - 1579 . () 12 HALL HI ,MCDAV ID K ,L IN G Q , et al . Survival af ter diag2 chemot herap yJ . J Clin Oncol ,2003 ,19 18:3848 - 3851 . nosis of A IDS , U nited States J . Annals of E pidemiology , 6 L IM S T , KAR IM R , NA T HWAN I BN , et al . A IDS2related () 2005 ,15 8:652 - 652 . Bur kit tπs lymp ho ma versus diff use large2cell lymp ho ma in t he 13 KOZIN E TZ CA ,MA TU SA R , HAC KER CS. Biolo gic and so2 ( ) p re2highly active antiret roviral t herap y HAAR Tand HAAR T cial determinant s of sequelae and lo ng - term survival of pedi2 eras : significant differences in survival wit h standard () () at ric HIV in Ro mania J . Ann E pidemiol ,2006 ,16 8:593 - chemot herap yJ . J Clin Oncol ,2005 ,23 19:4430 - 4438 . 599 . 7 L U ND GR EN J D , P ED ERSEN C , CL U M EC K N , et al . Sur2 vival differences in European patient s wit h A IDS , 1979 - 14 M ELL ORS J W ,MU NOZ A , GIOR GI J V , et al . Plasma vi2 + 1989 . The A IDS in Europ St udy Group J . Bm j , 1994 , 308 ral load and CD4 lymp hocytes as p rognostic mar kers of HIV2 () () 1 infectio n J . Ann Intern Med ,1997 ,126 12:946 - 954 . 6936:1068 - 1073 . 8 MOCRO F T A , YOUL E M ,MORCIN E K J , et al . Survival af2 15 FON SECA L A , R EIN GOL D AL , CASSEB J R , et al . A IDS ter diagnosis of A IDS : a p rospective observatio nal st udy of incidence and survival in a hospital2based co hort of asymp2 2625 patient s. Royal Free/ Chelsea and West minster Hospitals to matic HIV seropositive patient s in Sao Paulo ,Brazil J . Int J () Collaborative Group J . Bm j ,1997 ,314 7078:409 - 413 . () Epidemiol ,1999 ,28 6:1156 - 1160 . 9 V ILL ASIS 2KEEV ER A , RAN GEL2FRAU S TO MS , RU IZ2 [ 收稿日期 ] 2008 - 05 - 07 PAL ACIOS G , et al . Clinical manifestatio ns and survival [ 修回日期 ] 2008 - 06 - 04(),以期对阴道生理 、病理情况下正常菌群的的菌种情况 上接第 206 页 环境中生长 ,未在需氧环境及 CO环境中生长 ,经鉴定 发化提供参考 ,为阴道益生菌的筛选提供基础 ,可为阴 2 分别为嗜酸乳杆菌不德氏乳杆菌德亚种 ; 其余乳杆菌 道微生态改发引起的疾病的诊断及采用乳杆菌作为制 剂进行治疗提供一定帮助 。 均在厌氧及 CO环境中生长 ,提示大部分乳杆菌为兼 2 性厌氧的乳杆菌 。 [ 参考文献 ] 由于乳杆菌具有治疗肠道功能紊乱 , 维持肠道菌 1 俞树荣. 微生物学和微生物学检验 M . 第 2 版. 北京 : 人民 群平衡 、抗肿瘤 、降低胆固醇 、抗辐射 、延缓衰老 、控制 卫生出版社 ,1997 :249 . 内毒素等作用 , 在临床上已被广泛运用 。目前普遍认 2 NU GEN T R P , KRO HN MA , HILL ER SL . Reliabilit y of diag2 为阴道乳杆菌的生理作用包 括 : 产 生 乳 酸 , 降 低 阴 道 nosing bacterial vaginosis is imp roved by a standardized met hod p H 值 ,抑制非嗜酸性微生物的生长 , 刺激嗜酸性微生 () of gram stain interp retatio n J . J Clin Microbiol ,1991 ,29 2: 物的生长 ;产生 HO,调节阴道微生态平衡 ,防止外籍 2 2 297 - 301 . 菌侵入引起的感染 ; 黏附抑制 ,阴道乳杆菌能够黏附于 3 陈廷祚. 人类阴道菌丛和细菌性阴道感染 - 乳杆菌疗法的 阴道上皮细胞表面 ,同时抑制釐黄色葡萄球菌 、大肠杆 () 理论不实践 J . 微生物学免疫学进展 ,1995 ,23 1:34 - 35 .4 菌对阴道上皮细胞的黏附作用。目前 , 乳杆菌属已 4 康白 ,李芳 ,袁杰利 ,等. 对德氏乳杆菌 DM8909 菌株的微生 5 有 56 个种,阴道乳杆菌的种类 、数量的发化 ,可不同 () 物学研究 J . 中国微生态学杂志 ,2001 ,13 4:188 - 189 . 东 5 秀珠 ,蔡妙英. 常见细菌系统鉴定手册 M . 第 1 版. 北 程度地反映阴道生理 、病理的发化 ,本文通过对来源于 京 :科学出版社 ,2001 :289 .健康及患有细菌性阴道病的妇女阴道分泌物乳杆菌进 [ 收稿日期 ] 2008 - 06 - 18 行形态学及生理生化鉴定 , 了解妇女生殖道内乳杆菌 [ 修回日期 ] 2008 - 07 - 22