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HPLC维生素E尿囊素乳膏

2017-10-16 11页 doc 28KB 17阅读

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HPLC维生素E尿囊素乳膏HPLC维生素E尿囊素乳膏 LC法测定维生素E尿囊素乳膏用HP中维生素E与尿囊素含量 刘丽仙 (浙江省丽水市人民医院 丽水 323000) 摘 要 目的:采用高效液相色谱法测定维生素E尿囊素乳膏中维生素E与尿囊 素的含量。方法:高效液相色谱法。维生素E用C柱, 以甲醇为流动相,流速18 1.5ml/min,检测波长284nm;尿囊素用ZORBAX NH3柱, 以甲醇:水=80:20为 流动相,流速1.0ml/mi,检测波长为224nm。结果:维生素E线性范围 29.32µg/ml-175.92µg/ml, r=0.999...
HPLC维生素E尿囊素乳膏
HPLC维生素E尿囊素乳膏 LC法测定维生素E尿囊素乳膏用HP中维生素E与尿囊素含量 刘丽仙 (浙江省丽水市人民医院 丽水 323000) 摘 要 目的:采用高效液相色谱法测定维生素E尿囊素乳膏中维生素E与尿囊 素的含量。方法:高效液相色谱法。维生素E用C柱, 以甲醇为流动相,流速18 1.5ml/min,检测波长284nm;尿囊素用ZORBAX NH3柱, 以甲醇:水=80:20为 流动相,流速1.0ml/mi,检测波长为224nm。结果:维生素E线性范围 29.32µg/ml-175.92µg/ml, r=0.99999,平均回收率为98.89%,RSD= 1.54%(n=9); 尿囊素线性范围187.68μg/ml-938.40μg/ml,r=0.99995,平均回收率为99.90%, RSD=1.92%(n=9)。结论:本品制备简单,含量测定用高效液相色谱法,测定 方法专属性强,结果准确可靠,并能很好的控制制剂质量。 关键词 维生素E 尿囊素 高效液相色谱法 The Determination of VitaminE Allantoin Cream By HPLC ,Liu lixian (The Peapoles Hospital of Lishui City,Lishui 323000) ABSTRACT Objective:To establish a method for content determination of vitamiE allantoin cream by HPLC. Method:The content of vitamiE and allantoin are determined by HPLC. Vitami:Ccolumn was used with 18 methanol as a mobile phase,flow rate was 1.5ml/min,a detecting wavelength was at 284nm.Allantoin:ZORBAX NH3column was used with methanol:water=80:20 as a mobile phase,flow rate was 1.0ml/min,a detecting wavelength was at 224nm. Result: The linear rang of vitamiE was from 29.32цg/ml to 175.92цg/ml,r=0.99999, the average recovery was 98.89,RSD= 1.54%(n=9). The linear rang of Allantion was from 0.1803mg/ml to 0.9980mg/ml,r=0.99932,the average recovery was 99.25, RSD= 0.82%(n=9).Conclusion:This method is simple , special,and accurate for the determination of vitamiE and allantion by HPLC. It can be used in the quality control of this cream very well. KEY Words:VitaminE Allantoin Cream;vitamiE;allantion;HPLC 维生素E尿囊素乳膏是我院自行配制的主要用于滋养皮肤的外用药。 其主要成分为维生素E、尿囊素。外用维生素E具有延缓衰老,滋养皮肤 的作用;而尿囊素具有增加皮肤角质层水合作用,故其对皮肤干燥、皲裂 疗效满意,且此药副作用较轻微,可长期应用,但仍有局部红斑等副作用, 停药后自行消退。尚无其他重大副作用的报道。为了更有效控制该制剂的 质量,本文建立了高效液相色谱法测定维生素E和尿囊素含量,空白基质 无干扰,结果准确,现报道如下。 1仪器与试药 高效液相色谱仪(Agilent 1100),Agilent Extend-C18色谱柱(4.6× 250mm),ZORBAX NH3柱(4.6×250mm)。 维生素E对照品(中国药品生物制品检定所),尿囊素对照品(中国药品 生物制品检定所),乙醇为分析纯,甲醇为色谱纯。 维生素E尿囊素乳膏(丽水市人民医院制剂室,批号:20041222,20041227, 20050205)。 2文献调研与目的 维生素E尿囊素乳膏中维生素E的HPLC检测方法已有报道[1][2],山药中尿囊素的HPLC含量测定方法也有报道。本文的目的是我院为申报浙江省医院制剂批准文号而研究的含量测定的方法。 [1]3溶剂的选择 文献报道用甲醇作溶媒,结果维生素E提取率很低,回收率只 [3]有70%左右而不予采用。因维生素E在无水乙醇中易溶,用无水乙醇提取乳膏中维生素E,回收率满意,故采用无水乙醇作为溶媒。本为作者为考虑成本问,曾使用乙醇作为溶媒,结果回收率达到97%-98%,因本文是为申报批准文号而研究的方法,故力求更加完美,舍弃乙醇不用。尿囊素为水溶性化合物,用甲醇作为溶媒,效果满意。 4 分离柱和流动相选择 根据文献,测定维生素E用甲醇作为流动相,测定尿囊素用甲醇:水=80:20为流动相,分离效果较好,且出峰时间也好。本文作者曾参照文献报道,用0.03mol/L磷酸二氢钾(pH=6.0):甲醇=60:40作为流动相,用SOD-C柱(4.6×250mm)分离该制剂的尿囊素,结果尿囊素在2min时间出18 峰,可以说SOD-C柱对尿囊素基本不保留,且与甲醇溶剂峰同时出峰。因尿囊18 素分子结构中有-NH,故采用氨基柱,取得满意的分离效果。 2 5 检测波长的选择 维生素E的无水乙醇溶液和尿囊素的甲醇溶液分别在紫外-可见分光光度计上,在200nm-400nm波长处进行扫描,结果维生素E在284nm、尿囊素在224nm波长处具有最大吸收,故选择284nm、224nm作为检测维生素E和尿囊素的波长。 6 方法学的考察 6.1色谱条件与系统适用性试验 维生素E 用十八烷基硅烷健合硅胶为填充剂;甲醇为流动相;检测波长 [1]为284nm;流速1.5ml/min;柱温20?;进样量20μl。理论板数按维生素E计算,不低于3000。 尿囊素 用氨基硅烷键合硅胶为填充剂,以甲醇:水=80:20为流动相;检测波长为224nm;流速1.0ml/min;柱温30?;进样量20μl。理论板数按尿囊素计算,不低于2500。 6.2 线性关系 6.2.1 维生素E的线性关系 精密称取维生素E对照品约73.3mg置50ml量瓶中,加无水乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀,依次量取上液各1.0,2.0,3.0,5.0,10.0ml,分别置50ml量瓶中,加无水乙醇稀释至刻度,摇匀后,分别精密吸取20ul,注入液相色谱仪中,记录色谱图,并以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标做线性回归,A=3.72356 C+0.367478,r=0.99999,可见维生素E在29.32μg/ml-175.92μg/ml范围内线性关系良好。 6.2.1尿囊素的线性关系 精密称取尿囊素对照品约469.2mg置50ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,依次量取上液各1.0,2.0,3.0,5.0,10.0ml,分置50ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀后,分别精密吸取20ul,注入液相色谱仪中,记录色谱图,并以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标做线性回归,A=8.21104C+19.63444,r=0.99995,可见尿囊素在187.68μg/ml-938.40μg/ml范围内线性关系良好。 7 回收率试验 7.1维生素E的回收率 以绝对回收率示,测定高、中、低三个浓度样品,高浓度样品回收率100.26%,RSD=0.14%,中浓度样品回收率为97.05%,RSD=0.12%,低浓度样品回收率为99.37%,RSD=0.08%。平均回收率为98.89%,RSD 1.54%(n=9)。 结果见表一。 表一 维生素E的回收率试验结果 加入量 测得量 回收率 平均回收率 RSD μg/ml μg/ml % % % 90 89.42 99.36 90 89.37 99.30 90 89.51 99.46 114 110.79 97.18 114 110.41 96.85 98.89 1.54 114 110.70 97.11 142 142.45 100.32 142 142.14 100.10 142 142.51 100.36 7.2尿囊素的回收率 以绝对回收率表示,平均回收率为99.90%, RSD=1.92%(n=9)。结果见表二。 表二 尿囊素的回收率试验 加入量 测得量 回收率 平均回收率 RSD μg/ml μg/ml % % % 327.36 330.05 100.82 327.36 329.96 100.79 327.36 336.92 102.92 409.20 415.05 101.43 409.20 410.48 100.31 99.90 1.92 409.20 409.05 99.96 491.04 478.06 97.36 491.04 478.16 97.38 491.04 481.67 98.09 8稳定性考察 8.1维生素E 考察8小时内含量测定的结果。取本院制剂室制备的,批号为20050118的维生素E尿囊素乳膏,精密称取该乳膏0.9763g,置50ml量瓶中,加无水乙醇约40ml,密塞,于70?水浴中振摇,使维生素E充分溶解,放冷至室温,加无水乙醇至刻度,摇匀,置冰浴中冷却2小时,取出,迅速用微孔滤膜(0.45μm)滤过,放至室温,取续滤液作为供试品溶液。精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl,分别注入液相色谱仪,测定峰面积,代入上述线性方程,计算样品中维生素E的含量。结果维生素E的含量在8小时内较稳定,RSD=0.54%(n=10)。 如表三 表三 维生素E的稳定性试验结果 测定时间 含 量(μg/ml) RSD (%) 10:31 92.068 10:48 91.891 12:20 91.825 12:36 91.367 2:50PM 92.363 0.54 3:05 92.154 5:05 92.634 5:20 92.428 6:59 93.00 7:14 92.864 8.2尿囊素 在4h内考察样品稳定性。精密称取本院制剂室制备的,批号为20041207的维生素E尿囊素乳膏1.0073g,置50ml量瓶中,加水10ml,加热使尿囊素充分溶解,加甲醇适量,放冷至室温,加甲醇至刻度,摇匀,置冰浴中冷却2小时以上,取出,迅速用微孔滤膜(0.45μm)滤过,放至室温,取续滤液作为供试品溶液。精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl,分别注入液相色谱仪,测定峰面积,代入上述线性方程,计算样品中尿囊素(CHNO)的含量。4643RSD=1.06%(n=8)。 表四 尿囊素的稳定性试验结果 测定时间 含 量(μg/ml) RSD (%) 1:09 406.99 1:18 408.51 2:09 408.45 2:18PM 406.46 1.06 2:54 395.22 3:17 404.71 3:57 406.86 4:06 402.76 9重复性试验 9.1维生素E 按该法测定维生素E的含量,RSD=0.15%(n=9)。 9.2尿囊素 精密称取尿囊素对照品23.46mg,置50ml量瓶中,加水10ml,加热使溶解,放冷,加甲醇至刻度,摇匀,重复进样9次,测定峰面积,RSD=0.52%(n=9)。 表五 尿囊素的重复性试验结果 次序 峰面积 RSD (%) 1 3809.21 2 3799.28 3 3822.90 4 3936.39 5 3834.29 6 3830.18 7 3850.17 8 3855.68 9 3856.19 10样品含量测定 10.1维生素E μg/ml对照品溶液制备 精密称取维生素E对照品,加甲醇制成浓度为100的溶液。 精密称取维生素E尿囊素乳膏约1g,置50ml量瓶中,加无水乙醇约40ml,密塞,于70?水浴中振摇,使维生素E充分溶解,放冷至室温,加无水乙醇至刻度,摇匀,置冰浴中冷却2小时,取出,迅速用微孔滤膜(0.45μm)滤过,放至室温,取续滤液作为供试品溶液。 测定法 精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl,分别注入液相色谱仪,测定峰面积,代入回归方程计算样品中维生素E的含量。三批样品的测定结果见表六 表六 三批样品中维生素E的含量测定结果 批号 取样量 峰面积 测得量 百分含量 (μg/ml) (%) 20041222 1.0028 362.86 97.35 4.85 362.89 97.36 4.85 20041227 1.0232 370.52 99.41 4.86 370.38 99.37 4.86 20050205 1.0894 402.07 107.88 4.95 402.28 107.93 4.95 10.2 尿囊素 对照品溶液制备 精密称取尿囊素对照品,加流动相制成浓度为400μg/ml 的溶液。 供试品溶液的制备 精密称取维生素E尿囊素乳膏1g,置50ml量瓶中, 加水10ml,加热使尿囊素充分溶解,加甲醇适量,放冷至室温,加甲醇至刻度, 摇匀,置冰浴中冷却2小时以上,取出,迅速用微孔滤膜(0.45μm)滤过,放 至室温,取续滤液作为供试品溶液。 测定法 精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl,分别注入液相色谱仪,测定 峰面积,以外标法计算样品中尿囊素(CHNO)的含量。三批样品的测定结4643 果见表七 表七 三批样品中尿囊素测定结果 批号 取样量 测得量 含量 μg/ml μg/ml % % % 90 89.42 99.36 90 89.37 99.30 90 89.51 99.46 114 110.79 97.18 114 110.41 96.85 98.89 1.54 114 110.70 97.11 142 142.45 100.32 142 142.14 100.10 142 142.51 100.36 11 讨论 11.1 维生素E的测定关键在于样品的提取,本文作者曾采用超声提取法和甲醇加 热提取维生素E,均因回收率过低而失败.本文现采用无水乙醇热提取,可使维生 素E提取完全,在通过冰浴冷却除去霜剂中的基质,减少对色谱柱的污染。 11.2 尿囊素含量测定方法本文作者曾采用C-18柱进行实验,结果尿囊素不被该 柱,取得较满意效果。 柱保留,故采用NH3 11.3 本文采用高效液相色谱法测定维生素E尿囊素乳膏,经过方法学评价,证 明此法稳定,准确,可靠,可用于本制剂的含量控制方法。 参 考 文 献 1 王燕萍,马潇,张虹.HPLC法测定维生素E霜中维生素E的含量〔J〕.中国药事,2003,17 (4):230 2 周心如,曹京宜.山药中尿囊素的高效液相色谱分析方法研究.CHINESE JOURNAL CHROMATOGRAPHY,1996,14(2) 3 中国药典.2000.二部:798 4 姜玲,施明德,谢东梅.紫外分光光度法测定复方尿囊素乳膏中尿囊素的含量.安徽医科大学学 报,2000 Dec;35(6) 5 陈雅,陈钧,何凤慈.二阶导数光谱法测定维生素E乳膏含量.中国医院药学杂志,2003,23 (1):49 6 熊全美,张焱,陈庆华.HPLC法检测维生素E(微囊)制剂的含量及稳定性.中国医药工业杂 志,1994,25(9):401 7 王倩,范宏茜,哈国坚.气相色谱法测定维生素E微乳中维生素E的含量.广东药学院报,1997, 13(1):14-17 8 庄志铨,陈志良,李国锋.维生素E霜的含量测定.中国医院药学杂志,1996,16(9):415 9 冯端浩,倪福英,张冀.维生素E的配制与质量控制. 中国医院药学杂志,1997,32(2):119 10 冯琳,张红梅,王景祥.维生素E微囊的制备及稳定性研究. 中国医院药学杂志,1997,17(1): 3
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