中药材黄芪的高效液相色谱指纹图谱研究

中药材黄芪的高效液相色谱指纹图谱研究 中药材黄芪的高效液相色谱指纹图谱研究 ._.fi}泛学诼中药制剂工程与技术 2009Vo1.1ONo.3 中药材黄芪的高效液相色谱指纹图谱研究 石玉娟,李桂兰 (山西中医学院,山西太原030024) 摘要目的:对山西省浑源县不同购买批次的黄芪药材指纹图谱进行比较研究.:应用HPLC法.色谱柱:Thermo ODS(2.1mmxl50mm,5m);流动相:乙腈一水(3:7);流速0.8mL/min;检测波长254nm;柱温:3O?;分析时间:60min; 进样量:20L.结果:山西省浑源县3种批号的黄芪药材有l3个共有峰,其HPLC指纹图谱基本一致,但共有峰面积的 比值有一定差异.结论:通过HPLC法建立了黄芪药材的指纹图谱分析方法,该方法稳定,可靠,重现性好,为快速鉴别 区分不同来源的药材提供了科学的依据. 关键词黄芪:高效液相色谱:指纹图谱 中图分类号:R284.1文献标识码:A文章编号:1671—0258(2009)03—0024-03 HPLCFingerprintSpectraofRadixAstragaliofDifferentSources ShiYujuan,LiGuilan (ShanxiCollegeofTCM,TaiyuanShanxi030024) AbstractObjective:TostudycomparativelyonHPLCfingerprintspectraof3batchesofRadi xAstragalifromHunyuan County,ShanxiProvince.Method:HPLCwasperformedonThermoODScolumn(2.1mmxl 50mm,5Ixm)withacetoni- trile—waterf3:7)asmobilephaseatflowrateof0.8mL/min.Thecolumntemperaturewas30?andthedetectionwave-- lengthwas254nln.Analyzingtimewas60minandspecimenhandlingquantitywas20LResul t:3batchesofRadixAs- tragalifromHunyuanCounty,ShanxiProvincehad13characteristiccommonpeaks,butther atiosofcommonpeaksarea weredifferent.Conclusion:FingerprintspectraofRadixAstragaliwasconstructedbyHPLC .Thismethodisstable,reli- able,reproducible,andprovidesscientificbasisforherbaldiscrimination. KeywordsRadixAstragali;HPLC;fingerprintspectra 黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalusm— branaceus(Fisch)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao或 膜荚黄芪Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.的干 燥根,其主要有效成分为皂苷类,黄酮类,氨基酸类, 多糖类等,具补气固,利尿托毒,排脓,敛疮生肌的 作用.临床上主要用于气虚乏力,食少便溏,中气下 陷,久泻脱肛,便血崩漏,表虚自汗,气虚水肿,痈疽 难溃,久溃不敛,血虚痿黄,内热消渴,慢陛肾炎蛋白 尿,糖尿病等[.色谱指纹图谱可以较为全面地检测药 材中的各种成分[2].本实验采用高效液相色谱(HPLC) 法对产地相同不同批次购买的黄芪进行了指纹图谱 研究.指纹图谱反映的化学成分包括中药材中有效 部位所含绝大部分成分.或者有效成分的全部,可以 对中药材的优劣与真伪作出判断[引. 1实验材料 [基金项目]山西省科技厅资助项目(2007081032) [作者简介]石玉娟,女,助教,从事医学生物学教学与科研 [收稿日期]2009—04—18 1.1实验药材 3个批号的黄芪药材均购自山西省药材公司第 二批发部,为蒙古黄芪,主产地在山西省浑源县. 1.2实验仪器 美国Waters515型高效液相色谱仪,包括:高压 梯度泵,色谱泵,手动进样器,光电二极管陈列检测 器(2996型);超声波清洗器;德国Sartorius电子分 析天平. 2方法与结果 2.1色谱条件 色谱柱:ThermoODS(2.1mmxl50mm5m);流 动相:乙腈一水(3:7);流速0.8mI_/min;检测波长254 nm;柱温:3OoC;分析时间:60min;j~量:20Lo 2.2供试品溶液的制备 将黄芪药材剪碎成粗粉,过120目筛,每份取 中药制剂工程与技术 30g,置具塞三角瓶中,加甲醇140mL,浸泡过夜, 超声提取2次,每次10min;合并提取液后将溶液 过滤,回收甲醇至干,残渣加水10min溶解,转移至 分液漏斗中,用水饱和的正丁醇萃取3次,每次20 mL;合并正丁醇萃取液,减压回收至干,用甲醇溶解 并定容,置5mL量瓶中,制得样品溶液. 2.3对照品溶液的制备 称取黄芪对照品8g,置10mL量瓶中,加甲醇 溶解并稀释至刻度.制成含黄芪0.8mL的溶液,作 为对照品溶液. 2.4参照物的选择 通过对山西省浑源县不同批次购买的黄芪药材 HPLC色谱图考察.所有药材中l3号峰的含量较 高,且较稳定,因此,选取13号峰作为s参照物. 2.5方法学考察 2.5.1黄芪甲苷含量的测定分别量取各样品溶液 20L,注人高效液相色谱仪,记录60min色谱图后 进行测定,将测出的各样品溶液峰面积的常用对数值 代人回归方程,计算出各样品溶液的黄芪甲苷含量. 2.5.2稳定性实验取同一批号的黄芪样品,按2.2 项方法制备供试品溶液,分别在0h,2h,8h,12h, 24h进样检测指纹图谱,结果见表1.结果表明各色 谱峰的相对保留时间和峰面积比值的RSD均小于 3%,符合指纹图谱要求. 2.5.3精密度实验取同一批号的黄芪样品.按2.2 项方法制备供试品溶液,连续进样5次,测定其精密 ._.瘁酝滋学骺 2009~g第10卷第3期 谱要求. 2.5.4重现性试验取同一批号的黄芪样品5份. 按2.2项方法制备供试品溶液,分别进样,结果表明 各色谱峰的相对保留时间和峰面积比值基本没有明 显变化,RSD均小于3%,符合指纹图谱要求. 2.6指纹图谱的建立 按样品溶液的制备方法操作,分别取各批药材 制成样品溶液,取20L进样,测定结果见表2,表3 及图1.结果表明,山西省浑源县3个批号的黄芪药 材有13个共有峰,其HPLC指纹图谱基本一致,但 共有峰面积的比值有一定差异. AB 度.结果表明各色谱峰的相对保留时间和峰面积比A,B,C一黄芪药材样品指纹图 谱;D-黄芪药材对照品指纹图谱;._黄芪甲苷 值基本没有明显变化,RSD均小于3%,符合指纹图图13个批号黄芪药材样品及对 照品指纹图谱 表1稳定性实验结果 (下转第78页) l誊滋学诼讲座与综述 2OO9Vo1.1ONo.3 现在中医学的藏象学说中.古人虽然知道"八尺之 士,可以剖而视之"(《灵枢?胀论》),但又认为"藏府 之在胸胁腹里之内,若匣匮之藏禁器也".更重要的 是,基于不同于西方的思维方式,中国古代对于整体 性和运动性的强调,使得中医学未从解剖人手分析 人体的结构,成分,而是以极简单的解剖为基础,构 造出了以象为内容的学术体系.由"藏象"之名可知, 中医是以现之于外的象来把握藏之于内的脏,即"执 其见功处见其形",即黑箱方法.对此《灵枢?顺气一 日分为四时》中论述道:"内外相袭,若鼓之应桴,响 之应声,影之似形".《素问?六节藏象论》对心的描 述是:"心者,生之本,神之变也;其华在面,其充在血 脉,为阳中之太阳.通于夏气".其他四脏与此相仿. 由此可见,这里的心已不是解剖学中有一定形态结 构之心.而是一系列相关的生命活动的表现在人脑 中形成的综合的象.它不具有实体性,却正好可以作 为面向对象方法学中的一个对象来看待. 2.2中医整体的对象模型 我们首先建立面向对象的阴阳父类,并按层次, 分级建立各级子类.在完全模拟八纲的基础上,建立 五脏六腑的子类.然后按五行生克,建立不必知道生 理功能(黑箱)的结构模型.用面向对象的类所建立 起来的网络结构与中医基础理论中的阴阳,藏象网 络结构完全相同. 建立包括八纲,卫气营血,经络,证候,藏象及病 因,药性等全部中医理论的对象模型,以人为对象, 按四个层次划分对象类,结合致病因素所组织的类, 构成了复杂的多级子类系统. 推而广之,中医学中的其他概念,如气,血,津 液,精,神,经络等,都可以作为一个对象,对象之间 通过信息的交换相互密切联系,从而形成一个复杂 系统,中医学的计算机仿真便可由此开始. 2.3面向对象方法用于中医的前景 用面向对象的方法来分析中医系统理论时.发 现中医现存的证候分类中还存在许多缺陷,还应进 一 步完善,并且花费了大量的人力,物力,财力来研 究各种证候,制定了一系列.由于理论问没解 决,经过多年的定性或量化规范后的一系列中医证 候诊断标准在学术界并未达成共识.标准一直得不 到统一,更难得以推广.就面向对象和人工神经网络 的观点看来,目前所有这些标准,相当部分都是不准 确的,标准中病证同称,证症不分,证型繁杂,证名不 全,层次不清的混乱状况大量存在.错误的关键就在 于目前的标准把几个不同级别的证,症,病放在一 起,并且在还未了解中医理论实质就去制定标准等. 3小结 运用面向对象程序设计进行中医学的计算机仿 真,不仅可以提高教学,科研,临床的生产力,节省大 量的人力,物力,财力,而且可以摒弃简单系统实验 室的不足,为中医学提供实验的空间.16世纪,伽利 略通过引入可重复的受控实验室的思想.开创了近 代科学的实践.目前这一思想成为判定延续几千年 的中医学是否科学的依据,而这一思想的中心在于 能够实施一些实验,以检验关于待研究现象的假 说.面向对象的方法使我们可从宏观着手,即从阴 阳,经络,藏象开始,一直到证候,症状,疾病,器官, 细胞等层层分析下去,为中医的研究极大地拓展了 发展方向.运用面向对象程序设计进行中医学的计 算机仿真不仅可以对中医学概念,理论,方法的客 观性,有效性,实用性进行证实,而且有前瞻性和预 测性. 引人面向对象的方式为中医学现代化奠定了基 础,也是目前将当代最前沿的信息技术与最古老的 中医学相结合的最佳契机,必将引起中医界的一场 革命,这里有大量的工作尚待完成. (上接第25页) 3讨论 实验过程中曾选用甲醇一水(75:25,55:45)等不同 体系的二元梯度洗脱系统都未能得到较好的色谱图, 最终选择乙腈一水(3:7)作为流动相.实验结果表明,山 西省浑源县3个批号黄芪药材中主要峰群的整体图 貌基本一致,但各成分峰面积的相对比值有所不同, 为快速鉴别区分不同来源的药材提供了科学的依据. 本文采用HPLC色谱法.建立了黄芪药材的指纹图谱 分析方法,结果表明该方法稳定,可靠,重现陛好. 参考文献 [1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[s].北京:化学工 业出版社,2000:249. [2]谢培山.中药指纹图谱概念:属性,技术,应用[J].中国中药杂志, 2001,26(10):635-655. [3]李玉娟,王瑞,车镇涛,等.中药材指纹图谱质量控制方法研究 [J].中药新药与临床药理,2001,12(3):192.