膈下逐瘀汤对肝纤维化大鼠组织形态学的影响

膈下逐瘀汤对肝纤维化大鼠组织形态学的影响 膈下逐瘀汤对肝纤维化大鼠组织形态学的 影响 中医药信息2OO7年第2I4卷第4期 方剂实验研究 ? 29? 膈下逐瘀汤对肝纤维化大鼠组织形态学的影响* 张洁玉,旺建伟2 (1.黑龙江中医药大学附属第一医院,黑龙江哈尔滨150040;2.黑龙江中医药大学,黑龙江哈尔滨150040) 摘要:目的:从形态学角度探讨膈下逐瘀汤对肝纤维化大鼠胶原代谢的干预作用.方法:采用ALA— kokkol腹腔注射DMN的方法制作肝纤维化动物模型.结果:光镜和电镜下膈下逐瘀汤及其拆方各组炎 性细胞浸润,纤维组织增长和其它各组对比有明显差异.结论:膈下逐瘀汤对肝纤维化大鼠胶原纤维增 生,毛细血管化等具有明显减轻作用. 关键词:膈下逐瘀汤;肝纤维化;实验研究 中图分类号:R289.5文献标识码:A文章编号:1002—24O6(2OO7)O4—0029—02 在各种病原引起的慢性肝病中,纤维化是慢性肝 病共有的病理改变,是慢性肝病向肝硬化发展的必经 阶段,早期阶段.它持续发展的中心环节在于肝细胞 损伤或坏死引起的炎性反应不断刺激肝组织非实质细 胞(主要是hepaticstellatecell,HSC),导致细胞外基质 (EcM)各成分合成增多,而降解相对不足,二者失去动 态平衡,致使ECM在体内过度沉积而引起肝纤维化. 在当前没有有效方法根治原发疾病的情况下,减轻肝 纤维化反应,阻断肝纤维化的发生和发展对防治肝硬 化具有重要意义.近年来,中医药在逆转肝纤维化,抗 HBV,减轻炎症反应,保护肝功能及改善临床症状等方 面表现出一定的潜力和优势,因此受到国内外众多肝 病研究者的探索和关注.目前认为,肝血瘀阻,肝络瘀 滞是慢性肝病肝纤维化的病理实质,本研究课题从形 态学角度探讨膈下逐瘀汤对肝纤维化大鼠胶原代谢的 干预作用uJ. 1材料与方法 1.1分组 Wistar大鼠7O只,随机分为正常对照A组(n= 10),模型对照B组(n=12),膈下逐瘀汤全方(桃仁9 当归9g,川芎6g,五灵脂6g,牡丹皮6g,赤芍5g,乌药 6g,延胡索3g,甘草9g,香附5g,红花9g,枳壳5g)c组 基金项目:*黑龙江省中医管理局课题(ZH04ZO2) 作者简介:张洁玉(1971一),女,博士,主治医师,现主要从事中医内科 疾病的临床研究. 收稿日期:2007—03—01 修回日期12007—03—29 (n=12),行气(桃仁9g,当归9g,川芎6g,五灵脂6g,牡 丹皮6g,赤芍5g,延胡索3g,红花9g)D组(n=12),活 血(香附5g,枳壳5g,乌药6g)E组(n=12),秋水仙碱F 组(n=12).分别称体重并标记,除正常组外,其余五 组均根据一kokkol的方法造模,用含5ml/LDMN 的0.15mmoL/LNacl溶液,按大鼠体重O.2ml/100g腹腔 注射,每周连续3d,每天1次,共3周.然后稳定1周. 1.2给药方法 各组药物浸泡1h后,第1次加12倍量水,煎煮 40rain,过滤,药渣再加1O倍量水煎煮40min,过滤,合并 两次滤液,浓缩至1:1浓度,放冰箱保存备用.分别为 全方组,行气组,活血组.秋水仙碱由法国HooDE实验 室提供,规格:O.5mg/片,批号:H53021369,用蒸馏水配制 成O.Olmg/ml溶液,低温保存备用.模型制备完毕后各 组均给药1个月,每日1次,剂量均按人鼠换算面积灌 胃,疗程结束后,眼眶取血,分离血清,取肝脏右叶同一 部位组织一部分切成lmm×lmm×lrrma肝组织数块,用 3%戊二醛固定,另一部分投入10%甲醛溶液固定,石蜡 包埋后切片,分别进行HE,Mallory染色. 1.3肝纤维化分级标准 参照王宝恩等[']对肝胶原增生程度分级标准,将 肝纤维化分为5级. O级:肝组织正常,无病理性胶原纤维增生; 1级:胶原纤维从汇管区或中央静脉周围轻度向 外延伸; 2级:胶原纤维延伸明显,但未包绕整个肝小叶; 3级:胶原纤维延伸明显,互相连接,包绕整个肝 ?30? 小叶; 4级:胶原纤维包绕分割肝小叶,以致正常肝小叶 结构破坏,假小叶形成. 2实验结果见表l. 表1各组肝纤维化分期 纤维化分期(s) 组别rl—u值 10 8 10 10 9 9 注:与正常对照组A比较*P<0.01;与模型对照组B比较?P<0.05, ??P<0.01. 光镜下见正常大鼠肝组织结构无异常.模型组大 鼠肝组织可见不同程度的纤维组织增生,由汇管区,小 叶间进一步深入并分割肝小叶,汇管区,肝窦及中央静 脉周围可见炎性细胞浸润,正常肝小叶结构破坏,假小 叶形成.秋水仙碱组仍可见炎性细胞浸润,但纤维组 织增生较模型组略减轻.膈下汤瘀汤及其拆方各组也 可见少量炎性细胞浸润,纤维组织增生明显减轻(图 略). 电镜下观察到正常组肝细胞结构完整,细胞器及 糖元丰富,血窦面有枯否细胞存在,内皮下可见少量胶 原纤维;模型组肝细胞结构差,出现糖元脱失形成的空 隙,毛细胆管有扩张,部分区域微绒毛短粗,血窦面有 大量的胶原纤维,贮脂细胞明显增生;秋水仙碱组肝细 胞结构尚完整,细胞器及糖元丰富,部分细胞内可见脂 滴,血窦面可见部分微绒毛突起,可见散在及束状胶原 纤维及贮脂细胞增生,膈下逐瘀汤及其拆方各组肝细 胞结构完整,细胞器丰富,糖元丰富,毛细胆管未见病 变,血窦面可见部分微绒毛突起,内皮下仅见部分胶原 纤维及少数贮脂细胞增生(图略). 3讨论 "肝血瘀阻"是慢性肝病纤维化的病理实质.清? 王清任善于运用活血化瘀药物,创制了一系列活血化 瘀的名方,其《医林改错》中曾指出:"无论何处,皆有气 血,气无形,不能结块,结块者必有形之血也.血受寒 则凝结成块,血受热则煎熬成块."强调癀积痞块的形 成与瘀血相关,治应理气活血,创膈下逐瘀汤以治之. 方中桃仁有破血行瘀之功,善泄血滞,祛瘀力较强,为 治疗瘀血内阻证的常用药物;红花辛香温通,专人血 分,可活血通经,祛瘀止痛;二者配伍,桃仁苦降下行, 润燥破血,红花辛散,活血散瘀,行散相宜而消瘀血,共 1TCM.July.2037,Vo1.24,NO.4 为君药.当归补血活血,祛瘀而不伤血;川芎可行气开 郁,活血止痛,与桃仁,红花相伍,可行一身上下之瘀 血;五灵脂,善止瘀血作痛;赤芍,牡丹皮可活血祛瘀止 痛.以上诸药可助桃仁,红花,活血祛瘀,消瘀攻瘙,故 共为臣药. "气塞不通,血壅不流",气滞可以导致血瘀,血瘀 亦能加重气滞,活血化瘀方中配伍行气药,可疏肝理 气,调畅气机,气机调畅则血运如常,不至于瘀积成癜, 使郁结得散,血络得通,血行则瘀无所留.故方中加入 延胡索,香附,乌药,枳壳为佐药.延胡索与香附,一为 血中气药,一为气中血药,二者配合,既行血中之气,又 行气中之血,气行血活,血活气顺,通则不痛,故止痛之 效颇着.乌药味苦,辛,性温,入脾,肺,肾,膀胱经.辛 温香散,能散诸气.《本草通玄》谓:"理七情郁结,气血 凝停,"枳壳能快气消积.甘草为使,取其甘平,人心, 肺,脾,胃经,能调和诸药,可延缓药力,顾护脾胃,使诸 药攻不伤正.以上所论,其配伍既行血分瘀滞,又解气 分郁结,行气以助活血,活血而不伤血,祛瘀又能生新, 合而用之,使瘀去气行,癜积可消. 正常肝脏能合成多种凝血因子,纤溶因子和抗纤 溶因子,肝纤维化时,肝细胞严重损伤和坏死,肝组织 中ECM异常沉积,并导致肝内血管和胆管的走向不 清,血行不畅,全血比粘度增加,门脉血流量增加,平均 血流速度明显减慢,以致肝血瘀阻,瘀血阻络.实验研 究证实,活血化瘀能改善结缔组织代谢,改善微循环, 增强内皮系统的吞噬功能,减少病变部位的缺血,增加 肝脏的营养与氧供,从而加速病理组织的吸收与修复. 参考文献: [1】王晓玲,刘平,支町成海,等.拆方扶正化瘀方对肝细胞及肝星状细 胞功能的影响[J].世界华人消化杂志,1999.(7):663—665. [2]IjuP,IjuQl,WangFIN,eta1.Effect0fsalvimolicacidBono0u8m productionandmitogen—activatedproteinkiIu8eactivityinratc s~1]Atetzlh[J].ActaPhmmacdSin,2002.(23):733—738. [3]0Id1gML,WuJ,WangHQ,eta1.Effect0fMaotaiLiquoriniI吐lcing metallothioneimandonc#..Ibaecells[J].WorldJGastmentemi, 2002,(8):520—523. [4]XL,LiuL,JiangHQ.SalviamitltionntdzamtIIH{764—3in. ducesIlqcmellateceilapopt~viacaspme一3activation[J].World Gasux~temi.2002.(8):515—519. E5]Yao】.(.TangYW,YmDM,eta1.Effects0fYi~rtDeco~otlon cratlonandaI~oels0fhq~ic#..Ibaecells[J].WorldJGastroenteml, 2002,(8):511—514. [6]王伯祥.中医肝胆病学[M].北京:中国医药科技出版社,1993.606 , 651. E7]王宝恩,赵洪涛,王泰玲,等.复方861对肝炎肝纤维化疗效的病 理组织学分析[J].中华肝病杂志,1997.5(2):77—78. ??