从川白芷中提取和纯化香豆素

从川白芷中提取和纯化香豆素 【关键词】 川白芷，总香豆素，碱溶酸沉，紫外分光光度法，含量测定 【摘要】 建立紫外分光光度计法测定川白芷中总香豆素含 量， :干川白芷粉末经过碱溶酸沉法提出，采用紫外分光光度法，检测波长为320nm对川白芷中的总香豆素进行测定，由于时间安排不合理，试剂不齐全，中间停电等原因，在安排的时间内实验没有完成。实验只做到香豆素的纯化阶段，以致没有测出川白芷中香豆素的含量。 【前言】 1.1白芷的概述 川白芷，又名:异形当归 ，多年生草本，高1,2米。根 直生，下面有数条支根。茎直立，圆柱形，中空，面 有细棱。以根入药，有祛病除湿、排脓生肌、活血止痛 等功能。主治风寒感冒、头痛、鼻炎、牙痛。赤白带下、 等症。其主要成分为香豆素类和挥发油 类,1,。挥发油 在白芷中含量很低，香豆素在白芷中含量远较挥发油类 高，据研究，可达1%左右,2, 。 1.2 为了进一步促进白芷香豆素的开发利用，对其有效成分的提取，分离，纯化，以及准确测量白芷中总香豆素的含量 。本文以白芷总香豆素为评价指标，通过碱溶酸沉法对川白芷粉末进行 提取，然后过滤分离，离心萃取，纯化，紫外分光光度计测波长，计算川白芷中香豆素的含量。 【器材】 2.1 材料 白芷Angelica dahurica(Fisch(ex Hoffm)Benth.et Hook(f购自自贡市药材市场。 2.2 仪器 恒温水浴锅，干锅，离心机，烧杯，铁架台，分液漏斗，纱布，玻璃棒，pH试纸，比色卡，紫外分光光度计 2.3 试剂 0.5%氢氧化钠溶液500ml，1摩尔每升盐酸250ml，乙醚 香豆素对照品,分析醇(甲醇)。盐酸羟胺，氯化铁溶液。 【方法】 3.1 原理 由于香豆素类可溶于热碱液中，加酸又析出，故可用0.5% 氢氧化钠水溶液加热提取，提取液冷却后再用乙醚除去杂 质，然后加酸调节pH至中性，适当浓缩，再酸化，则香豆素 类或其苷即可析出。但必须注意，不可长时间加热，另外加 热温度不能过高，碱浓度不宜过大，以免破坏内酯环。 3.2 及工艺参数 白芷(100克)?粉碎? 加入0.5%氢氧化钠溶液水浴加热提取 ?趁热过滤?滤液?冷却?加乙醚?萃取除杂?水层?调 节pH至中性?加热浓缩?盐酸酸化?析 ?取 少量 定性检测 出香豆素?过滤?洗涤?干燥 液料比3:1，碱溶温度70摄氏度，时间90min，离心30min 3.3实验详细操作步骤 a:粉碎于药店买取的200g白芷，放于500ml烧杯内，加入适 量氢氧化钠溶液使白芷粉完全浸没于溶液之中。 b:用玻璃板盖住烧杯口(防止游离香豆素挥发)，于七十摄氏度 水浴加热白芷与氢氧化钠溶液混合物一个半小时，趁热用纱 布过虑，使残渣与溶液分离。 C:待滤液冷却至室温，把滤液均匀装入离心管内，于4000转速 保持15min，取上清液，向上清夜中加入适量的四氯化碳， 搅拌倒入分液漏斗内，静置，分层，分液，留下水层，四氯 化碳层进一步操作回收四氯化碳。(四氯化碳使白芷中油脂 分解后不溶于水的醇类溶于四氯化碳) d:向分离后的水层中加入适量盐酸溶液，用玻璃棒蘸取溶液于 pH试纸上，然后与比色卡对照，调节溶液至中性。 e:加热浓缩，取少量浓缩后的溶液于另一干燥的烧杯内(香豆素 的定性检测使用)，然后向烧杯中缓慢加入盐酸，使香豆素 从溶液中吸出，待溶液中不再吸出香豆素，停止盐酸的加入。 f:组装好过滤装置，过滤，使香豆素与溶液分开，多次润洗香豆 素以便出去酸和盐。 h:干燥，把多次润洗后的香豆素放于玻璃皿中，放于干燥箱内 减压干燥，干燥后妥善放置以便用于定量检测。 3.4 数据计算公式 因为实验只进行到纯化干燥，后面的步骤没有多余时间操 作，所以尚未得到计算公式。 3.5 定性检测 向装有少量浓缩液的烧杯中加入盐酸羟胺，再加入少量盐酸 溶液使溶液为酸性，最后加入氯化铁溶液，溶液呈红色，提 取得到的物质是香豆素。 3.6 纯化方法 用95%乙醇，多次洗涤所得固体，离心除去酒精。 3.7曲线做法 分别精确吸取对照品溶液0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6毫 升置于10毫升容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，香豆素浓度 4.0，6.0，8.0，10.0，12.0微克每毫升，以(C)分别为2.0， 甲醇为参比，在320纳米波长处分别测定其分光度(A)以浓度 为纵坐标，吸光度为横坐标进行现行回归，计算出线性方程， 确定香豆素浓度在什么范围内呈良好线性关系。 3.8 样品测定 精密称取已干燥的白芷香豆素5毫克，4份。按供试品溶 液的配制方法制备供试样品，分别精密吸取供试样品0.2毫 升，按标准曲线制作方法，测定其吸光度，利用回归方程求 出供试品溶液中折合香豆素的浓度，并计算白芷中总香豆素 组分的含量。 【结果与讨论】 4.1 由于很多客观因素，造成实验不能顺利完成，所以结果无法 确定。实验时，用碱溶解白芷中香豆素所用的时间比实验前 工艺参数设定的是间长，一个原因是原料比预计的多，另一 个原因为糊糊状的液体不利于香豆素较短时间溶于稀碱内， 过滤时用的纱布，也是先前未曾考虑到的，离心机使用也是 临场想到的，还有一些药品实验室尚未提供，只有通过临时 配置，这些阻碍了实验前进的步伐。 【结论】 通过本实验才理解到纸上谈兵的危害，凡事都应当因地制宜， 实事求是，严肃务实的作风不你玩那个缺少。 【文献】 1,王梦月，白芷的化学成分研究进展.中药材，2002，25(6): , 446449. ,2,贾敏如，马逾英，等.不同入药部位及不同加工方法对白 芷香豆素类成分含量的影响.中药材，2004，27(11):826828. [3]作者:王梦月 贾敏如 马逾英 孙嘉敏 唐声武 蒋桂华 熊英 来源:医学期刊 / 中国医学