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药敏试验---纸片扩散法

2017-09-17 3页 doc 41KB 403阅读

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药敏试验---纸片扩散法药敏试验---纸片扩散法 实践六 药敏试验---纸片扩散法 ?实验目的: 学习了解细菌对药物的敏感试验的常用方法。 学习对药物的敏感试验的操纸片法作方法。 ?实验内容与基本要求: 药物敏感试验的操法方法.抗菌药物在疾病防治上已得到了广泛的使用,但是对某种抗菌药物长期或不合理地使用,可引起这些细菌产生耐药性,。如果盲目地滥用抗菌药物,不仅造成药物的浪费,同时也贻误了治疗时机。药物敏感试验,是一项药物体外抗菌作用的测定技术,通过本试验,可选用最敏感的药物进行临诊治疗, 同时也可根据这一原理,测定抗菌药物的质量,防伪劣假...
药敏试验---纸片扩散法
药敏试验---纸片扩散法 实践六 药敏试验---纸片扩散法 ?实验目的: 学习了解细菌对药物的敏感试验的常用方法。 学习对药物的敏感试验的操纸片法作方法。 ?实验内容与基本要求: 药物敏感试验的操法方法.抗菌药物在疾病防治上已得到了广泛的使用,但是对某种抗菌药物长期或不合理地使用,可引起这些细菌产生耐药性,。如果盲目地滥用抗菌药物,不仅造成药物的浪费,同时也贻误了治疗时机。药物敏感试验,是一项药物体外抗菌作用的测定技术,通过本试验,可选用最敏感的药物进行临诊治疗, 同时也可根据这一原理,测定抗菌药物的质量,防伪劣假冒产品和过期失效药物。 ?主要器材与药品 器材:试管架、试管、平皿、接种环、镊子、普通琼脂培养基或特殊培养基等。 药品:药敏试纸,被试细菌。经分离和鉴定后的纯培养菌株(例如大肠 杆菌、链球菌等),黄色葡萄球菌、痢疾杆菌18,24小时培养物、普通琼脂平板、小镊子;含有青霉素、庆大霉素、红霉素、复合磺胺、链霉素等抗生素的干燥滤纸片。 ,营养肉汤,琼脂平皿,棉拭子,镊子,酒精灯, 药敏纸片若干。 原理: 又称Bauer-Kirby法。是将干燥的浸有一定浓度抗菌药物的滤纸片放在已接种一定量某种细菌的琼脂平板上,经培养后,可在纸片周围出现无细菌生长区,称抑菌圈。测量抑菌圈的大小,测量各种药敏纸片抑菌圈直径的大小(以毫米表示),即可判定该细菌对某种药物的敏感程度。体外药敏结果可作为动物选用药物的参考。 方法 (1)将金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌培养物密集均匀地涂布整个平板,也可以挑取待试细菌于少量灭菌生理盐水中制成细菌混悬液,用灭菌的棉拭子沾取菌液涂布到上述培养基表面,尽可能涂布的致密而均匀。 (2)将含有抗生素药物的滤纸片用烧灼灭菌的镊子分别贴于平板表面,相互间应间隔一定距离,为了抗菌纸药片与培养基表面密贴,可用镊子轻按下纸片。纸片在培养基上的分布,一般可为中央贴一种纸片,外周以等距离贴若干种纸片,这样一个直径为90mm平板可贴6,7个抗菌药纸片。如果药敏纸片上没有标记,在每贴一种纸片后,应在平板底上用笔写上其药名或贴上标签。 (3)37?培养24小时后,观察结果。 结果 根据药物纸片周围抑菌圈直径的大小来判断该菌对各种药物的敏感程度。判断标准见下 表 附: 1. 试管法 本法较纸片法复杂,但结果较准确、可靠。此法不仅能用于各种抗菌药物对细菌的敏感性测定,也可用于定量检查。 (1)试验方法 取试管10支,排放在试管架上,于第一管中加入肉汤1.9毫升,其余各管均各加1毫升。吸取配好的抗菌药物0.1毫升,加入第一管,混合后吸取1毫升放入第二管,混合后再由第二管移1毫升到第三管,如此倍比稀释到第九管,从中吸取1毫升弃掉,第十管不加药物作为对照。然后各管加入幼龄试验菌0.05毫升(培养18小时的菌液,Ig 1000稀释)。置37?温箱内培养18~24小时观察结果。必要时也可对每管取0.2毫升分别接种于培养基上,经12小时培养后计数菌落。 (2)结果判定 培养18个小时后,凡无菌生长的药物最高稀释管,即为该菌对药物的敏感度。若药物本身浑浊而肉眼不易观察的,可将各稀释度的细菌涂片镜检,或计数培养皿上的菌落。 2. 琼脂扩散法 利用药物可以在琼脂培养基中扩散的原理,进行抗菌试验,其目的是测定药物的质量,初步判断药物抗菌作用的强弱,用于定性,方法较简便。 (1)试验材料 被测定的抗菌药物(例如青霉素,选择不同厂家生产的几个品种,以作比较),试验用的菌株(例如链球菌),营养肉汤,营养琼脂平皿,棉拭子,微量吸管等。 (2)试验步骤 ?将试验细菌接种到营养肉汤中,置 37?温箱培养12小时,取出备用。?用无菌棉拭子蘸取上述菌液均匀涂于营养琼脂平皿上。?用各种方法将等量的被测药液(如同样的稀释度和数量),置于含菌的平板上,培养后, 根据抑菌圈的大小,初步判定该药物抑菌作用的强弱。?药物放置的方法有多种:第一,直接将药液滴在平板上;第二,用滤纸片蘸药液置于含菌的平板上;第三,在平板上打孔(用琼脂沉淀试验的打孔器),然后将药液滴入孔内;第四,先在无菌平板上划出一道沟,在沟内加入被检的药液,沟上方划线接种试验菌株。以上药物放置方法可根据具体条件选择使用。
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