应用荧光原位杂交技术检测停育胚胎或绒毛染色体数目异常

应用荧光原位杂交技术检测停育胚胎或绒毛染色体数目异常 应用荧光原位杂交技术检测停育胚胎或绒毛染色体数 目异常 沈阳医学院学报 . 第 卷 第 期年 月 应用荧光原位杂交技术检测停育胚胎或绒毛染色体数目异常 张宁,闰素文,郝冬梅 ,徐斌 解放军沈阳医院全军计划生育优生优育技术研究所,辽宁沈阳 【摘要 目的:使用荧光原位杂交技术 , 对停育胚胎染色体数目异常进行快速检测 并评估其临床应用价值。方法:使用第 、 、 、 和 条染色体特异性的 探针对 例停育胚胎绒毛进行分 析。结果: 、 、 、 和 数目异常 例,占 . %,正常例数 例,问异例数 例。在所有异常胚胎中性染色 体异常占 %,其中所占比例最高与其他任何一种异常的发生率相比差异显著.。结论:检测停育胚胎第 、 、 、 和 数目异常是简单、快速和准确的诊断方法。 关键词 荧光原位杂交技术;产前诊断;染色体数目异常 中图分类号 . 文献标识码 文章编号?? ,, , ,, ,:, . : , , , . : , , , . . %,. . %, ... :. ; ;诊就诊的 例胚胎停育患者,患者年龄 ? 岁, 近年来胚胎停育的发生率日益增高,成为临 床的常见病和多发病。胚胎停育是指妊娠早期因 孕周 ~ 周,符合胚胎停育诊断指征:当孕周? 某种原因所致胚胎发育停止,胚胎停育不同于孕 周无妊娠囊,妊娠囊已? 超声看不到胎芽,胎 中期和孕晚期的流产和过期流产,也有别于早期 芽的头臂长度?. 无胎心搏动。 流产,它是在胎儿尚未形成的时候就停止了发育。 . 试剂 产前染色体数目检测试剂盒为北京金 主要通过 超监测妊娠囊、胎心和血 ?进行 菩嘉医疗科技有限公司出品,国食药监械 准 诊断。遗传因素是导致胚胎停育的重要原因,而 字 第号。试剂盒包含两组探 指导临床查找遗传因素最常见的方法是绒毛培养 针,一组探针为 /染色体分析?. 。停育胚胎绒毛大多已坏死无法达 ,另一组为探针为/ / 。 到新鲜、无菌要求,培养的失败率较高。本文应 . 绒毛标本处理及玻片制备 取绒毛约, 用荧光原位杂交技术 ? 用生理盐水将样本洗净,无菌剪刀或镊子去掉蜕 ,对停育胚胎绒毛染色体数目异常进 膜组织选取绒毛,尽可能剪碎并注意避免母体细 行快速检测并评估其临床应用价值,对研究胚胎 胞的污染,将不能剪碎的标本去除,该操作可在 停育提供一个新的检测手段。 显微镜下进行。加入 预热至 ?的 . 溶液,【 低渗 ,期间轻轻吹打悬浮 资料与方法 细胞 ? 次,弃上清。缓慢加入 固定液 甲 . 资料 选取 年 月至 年 月到解放 醇:冰乙酸: : 进行预固定,轻轻吹打混匀后 军第 医院全军计划生育优生优育技术研究所门 ,离心 。去上清,加入固定沈 医 学 院 学 报 第 卷 液,混匀固定,静置 ,期间吹打 次, 示三个信号点 ,低于判断非嵌合体状态的异常标 。离心 ,反复固定 次。去上清, 准 % ,出现这种异常的原因可能有胎儿染色 加冰醋酸消化约,加 甲醇终止消 体异常嵌合体,胎盘特异性染色体异常嵌合体, 化。离心,去上清,根据细胞量加适量固定液混 母体细胞污染等,建议遗传咨询。 匀后滴片.室温下过夜或 烤片至少 使玻 . 统计学方法 应用卡方检验。 片老化。室温干燥保存。 结果 . 杂交 室温下于 . 溶 液中漂洗玻片。 下终浓度 . /. 停育胚胎绒毛染色体核型分类 在 例绒 胃蛋白酶工作液中消化 ,可根据实际情况进 毛样本中, 、 、 、 和 数目异常 例,占 行调整,室温下于. 溶液中漂洗. %。正常例数 例,其中男性 例,女性 例。间异例数 例,即 % 异常率%者。正 。将玻片依次置于%乙醇、 %乙醇、%乙雕中各脱水,自然干燥。 常率 . %,异常率 . %,间异率 . %。 例 甲酰胺变性杂交:将探针混合物置于 水 异常分析结果中异常类型所占百分比列于 。 表 例异常绒毛染色体分析 浴锅中变性 后迅速置于 ~水浴锅中, 杂交前取出。将玻片在 ? 的变性液中浸 泡,依次置于预冷的 %乙醇、 %乙醇和%乙醇中各进行梯度脱水。玻片自然干 燥后,置于 ~烤片机上预热 ~后 与探针杂交。若以下探针混合物尚未完成变性, 玻片可置于 ~ 烤片机上较长时间预热。将 注: 与 三体、 三体、、和四倍体发生率相 变性后的探针混合物滴于玻片杂交区域,立 比. 即加盖盖玻片,用橡皮胶封边。将玻片置于预热 . 停育胚胎绒毛染色体图 图 ~ 的湿盒中,?保温箱中过夜杂交。 移除盖玻片,立即放人 ?水浴锅 × 溶液中,漂洗 ,振荡 ~ ;将玻片置于?水浴锅 . % . / ×溶液中,漂洗, 振荡 ~ ;然后将玻片室温浸泡在 %乙 醇中,漂洗,自然干燥。将玻片室温浸泡在%乙醇中,漂洗,暗处自然干燥玻片。 将复染剂加至目标区域,立即盖上盖玻 图片。暗处放置 ~ 后观察。 注:正常女性, 青为 个 号染色体, 绿为 条 染色体 ./ / / / 染色体异常 结果判读 探针组 / / :探针在正常男性细 胞核中显示 个红色信号, 个绿色信号和 个蓝 色信号,在正常女性细胞核中显示 个绿色信号 和 个蓝色信号;探针组 / :在正常 细胞核中显示 个红色信号、 个绿色信号; 每组探针计数至少 个细胞;单独判断每 种指标,正常细胞比例大于 %,提示该指标无 异常;某指标异常细胞比例大于 %,提示该指 标异常;单个指标异常细胞比例均小于 %,提 示为正常结果;某种指标异常比例介于 % ~ 图 %之间,加大观测样本细胞数目,如实异 注: , 青为 个 号染色体, 绿为 常细胞比例 如: %细胞结果显 条 染色体