氟对家蚕胚胎培养细胞蛋白质种类的影响（简报）

氟对家蚕胚胎培养细胞蛋白质种类的影响（简报） 氟对家蚕胚胎培养细胞蛋白质种类的影响 (简报) .级,豁 .浙江农业大学g1(2) 看胁 氟对家蚕胚胎培养细胞蛋白质种类的影响(简报)? .竺里苎 (浙江农业大学蚕学系,杭州310029) EffectofFluoridePoisoningonProtein SilkwormembryoCells l1/《酱 KindYnCuIt,ured LShunlinGuGuoda (DepartmemofSerlculture,ZhejiangAgriculturalUniversity,Hangzhou31 0029) 由于乡镇工业的发展,蚕区大气氟污染 越来越严重,家蚕的氟中毒已经成为养蚕生 产的重大问题,目前的研究明,家蚕氟中毒 的病理学内容相当复杂,笔者仅以家蚕胚胎 培养细胞为材料.用SDS.聚丙稀酰胺凝胶电 泳方法对氟中毒的家蚕胚胎培养细胞进行了 蛋白质种类分析,现将结果简报如下. 1材料与方法 1.1试验材料材料为日本京都工艺纤 维大学应用生物学科病理微生物研究室长期 保存的家蚕胚胎培养细胞(N细胞株),培 养液为含有10胎牛血清的BML.T/1O培 养液].培养温度为27c,每隔5—6天以1 :1的分离继代. 1.2氟中毒处理在BN细胞继代24 小时后,向培养液注入无菌的氯化钠溶液,使 培养液内氟化钠的浓度为48,ugtmL口].对照 样品中注入等量不含氯化钠的无菌水.静止 培养72小时后,将细胞用作SDS一聚丙稀酰 胺凝胶电泳的材料. 1.3显微镜观察在倒置显微镜下直接 观察氟中毒BmN细胞和对照细胞,并进行 显徽镜摄影. 1.4凝胶电泳将氟中毒的BmN细胞 收穑日期{1999-O1-l6 ?国束自然科学基金资助项目 和对照细胞分别从培养瓶中冲洗下来,移入 离5-管,4000r/min离心5分钟,再用生理 盐水洗涤和离心2-3次,然后移入玻璃匀浆 器内研磨匀浆,将匀浆液作为电泳的材料. SDS?聚丙稀酰胺凝胶电泳的方法按郭郛等 方法进行0]. 上述试验在日本京都工艺纤维大学应用 生物学科病理微生物研究室内进行. 2试验结果 2.1显微匏观察结果对照细胞为不规 则的四形和椭圆形,细胞表面光滑(圈1).氟 中毒细胞开始时细胞表面出现许多囊粒状突 起(或是凹陷,见图2).培养一周后氟中毒细 胞萎缩,细胞膜破裂,内容物析出,细胞死亡 (图3) 2.2中毒细胞的电泳图谱中毒细胞匀 浆的SDS.聚丙稀酰胺凝胶电泳重复进行12 次.其电泳图谱见图4.比较氟中毒细胞的电 泳图谱(F)和对照细胞的电泳图谱(cK),发 现氟中毒细胞没有产生新的谱带.也没有缺 少任何原有的谱带. 3讨论 虽然BN细胞中毒后细胞表面结构和 形态发生了很大的变化,但它的电泳图谱与 正常细胞相比较却完全相同.说明BmN细 胞氟中毒后不合成新的蛋白质,也不缺少原 l L , 睡 磊 琴? 220新江农业大学21卷 圈1正常的BN细胞(×1200) F1NormalBlN’cells(×12b0) 圈3氟中毒的BN细胞(×I200) F.3B-N.ec[IsofFluoridepoisoning(×1200) (Cells?restaticallycultedforsixdays.cell rupturesandibcontentsfl0w0ut) 有的任何一种蛋白质,即B.N细胞氟中毒 后细胞内的蛋白质种类没有变化. 参考文献 1GardinerGR.StockIlaleH.T肿tissuecuhure mediaforproductionoflepop瑚ncdlsandn 图2氟中毒的N细胞(×1200) F.2BmlbofFluoridepoLconi~(X1200) (CellsarestaticallycLlltfortwodays,Alotof g『anukapt?thesurfaceofcdls) 戆慧 图4氟中毒细胞和对照细胞电泳图 F.4矾ce?op}哪g?ofBmN|ceUs0ffluoridepo soDJ~gandelectrophez~gramofnormalB-N| cells dearpolyhedroslsviruses.Jour~lofinve~rtebrate pathology,197525}363—37O 2吕顺霖,顾国选.氟对索蚕胚胎培养细胞毒性的髟 响.蚕业辩学.1993.10(4)E217—221 3郭郛,忻舟六.昆虫学实验技术.北京:科学出版杜. 1988.168—1B1 蓄薹纛瓣蘩苎 鎏量重冀孽 盛羹薹露熬