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【doc】伯氏螺旋体杀菌抗体及其检测方法

2017-10-26 6页 doc 21KB 23阅读

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【doc】伯氏螺旋体杀菌抗体及其检测方法【doc】伯氏螺旋体杀菌抗体及其检测方法 伯氏螺旋体杀菌抗体及其检测方法 1] lb蜷i砗悻,啼受竹1 伯氏螺旋体杀菌抗体及其检测方法 河北省卫生防疫站兰多综述田万春审校 A摘要末文墒述7近几年伯氏螺旋体(Bb)杀菌抗体及其检测方法的研究进展情况. 莱姆 病人血清杀菌抗体测定试验是一有发展前途的.b-清学诊断试验. 莱姆病是由Bb引起的一种经蜱传播的 多系统性螺旋体病,其主要表现有游走性红 斑(EM),关节炎,神经系统及心血管系统症 状等.该病最早的报告是l975年美国康涅狄 格州莱姆镇的莱姆关节炎暴发,此后许多国...
【doc】伯氏螺旋体杀菌抗体及其检测方法
【doc】伯氏螺旋体杀菌抗体及其检测方法 伯氏螺旋体杀菌抗体及其检测方法 1] lb蜷i砗悻,啼受竹1 伯氏螺旋体杀菌抗体及其检测方法 河北省卫生防疫站兰多综述田万春审校 A摘要末文墒述7近几年伯氏螺旋体(Bb)杀菌抗体及其检测方法的研究进展情况. 莱姆 病人血清杀菌抗体测定试验是一有发展前途的.b-清学诊断试验. 莱姆病是由Bb引起的一种经蜱传播的 多系统性螺旋体病,其主要表现有游走性红 斑(EM),关节炎,神经系统及心血管系统症 状等.该病最早的报告是l975年美国康涅狄 格州莱姆镇的莱姆关节炎暴发,此后许多国 家和地区相继发现了此病.目前已有20多个 国家发现有此病,报病数最多的是美国,白 l991年将该病列为法定报告的疾病之后0], 每年报病人数近万倒.目前该病的实验室诊 断主要是检测血清中的抗体.最常用的为间 接免疫荧光试验(IFA)及酶联免疫吸附试验 (ELISA).但是.目前这些方法尚未标准化, 不同实验室,甚至同一实验室的结果相差很 大【31.此外.由于交叉抗体的存在.这些试验 均存在假阳性结果.因此血清学试验结果不 能作为莱姆病的唯一诊断标准.随着Bb抗 原,抗体成分及其作用研究的不断深入.本文 就近年来Bb杀菌抗体的杀菌作用及其检测 方法的研究情况综述如下. 一 ,Bb的杀菌抗体及其杀菌作用 1988年Kochi及Jo[mson首次研究了 莱姆病人抗一BbIgG对Bb的杀伤作用].他 们发现,正常人血清对Bb无杀伤作用(无论 有无补体参与),当加入5抗一BbIgG后,在 补体参与下.则有明显的杀菌作用,但是,如 ? 将加入抗一BbIgG的正常人血清预先5660min灭活后,则失去杀菌作用.此外他们还 发现,IgG对Bb的杀伤作用,虽是必需的,但 需有补体的参与,且是通过激活补体的经典 222 途径来完成. Pavia等通过动物实验发现,Bb免疫鼠 血清对Bb有杀菌作用(1t200稀释时杀菌 率为47,lt10时为99).且高浓度的免 疫血清.即使是灭活后仍有杀菌作用,推测可 能与试验作用时问长(48h)有关.人血清补 体在2h内对Bb有活性.加入补体可缩短免 疫血清的作用时间.其他热稳定中和因子可 以破坏Bb口】.Lovrich等的动物实验表明,Bb 免疫正常鼠后l周即可检测到杀菌抗体,3 周时达高峰.然后逐渐下降.免疫3周时杀菌 抗体效价达ll280,1t20稀释后.在补体 参与下与Bb作用2h,可杀死80Bb,作用4 , 6h可杀死97的Bb.用抗一鼠IgG抗体预 处理免疫血清后.可消除其杀菌作用.Bb鼠 免疫血清对Bb为特异性杀伤作用,对金黄 色葡萄球菌及大肠杆菌无杀伤作用['】 CaIlister等研究了各期各类莱姆病人 血清对Bb的杀茁作用,总杀菌率在36, 99.早期EM病人杀菌率低,约为36, 42,晚期莱姆病关节炎病人的杀菌率为 97.用抗一人IgG处理莱姆病人血清,可消 除其杀菌作用.此外他们还发现,10个血清 抗体阳性而症状不典型的病人血清,仅有l 份有杀菌抗体,而有典型症状的血清抗体阴 性者却检谩{到高水平的杀菌抗体,提示杀茁 抗体测定可能比现行的血清学试验特异性 强.在此研究中他们还检测了洛矾山斑疹热, 回归热,单核细胞增多症及梅毒病人血清以 及类风湿因子,抗棱抗体对Bb的杀伤作用, 墨 结果均阴性.说明莱姆病人血清中的杀螺旋 体抗体为特异杀伤作用.l993年,作者进一 步研究了各期各类莱姆病人血清中的杀菌抗 体及其杀菌作用[I】,结果表明.单个EM莱姆 病患者血清平均杀菌率为23}多个EM患 者血清杀菌率为42}复发性关节肿胀患 者,病程<60天者杀菌率为58%,6O天至效 年者为83.他们还发现莱姆关节炎患者血 清中杀菌抗体最高.即使没有补体参与也具 有相似的杀菌作用(平均83).用抗一人 IgM及IgG处理莱姆病人血清,分别可消除 早期及晚期莱姆病人血清的杀菌作用.用抗 - 人IgG1,IgG2,IgG3,IgG4处理晚期莱姆病 人血清,仅有抗-人IgG1可消除其杀菌作用. 而抗-人IgG4处理后.明显提高了莱姆病人 血清的杀菌活性.当去除莱姆关节炎病人血 清中抗一OspA抗体后.其杀菌抗体效价明显 降低,但在血清稀释度<320倍时仍有杀茁 活性.因此作者指出,早期莱姆病人血清中的 杀菌抗体为IgM,晚期为IgGl亚种,其他抗 体及其亚种亦可能有杀菌活性,这种杀菌抗 体为特异性杀伤作用.晚期莱姆病人虽有高 教价的杀菌抗体,但其杀菌率并非l.0,遗 可能是存在抑耕抗体的缘故.当IgG4抗体 亚种去除后,莱姆病人血清的杀菌活性明显 提高.说明IgG4可能起抑制抗体的作用. 二,杀菌抗体的检测方法 1.杀菌试验(Borrel[ac[da[assay)"】; Bb杀菌试验最初是根据钩端螺旋体的杀茁 试验修改而来n】,主要原理是杀菌抗体(莱姆 病人血清或动物免疫血清)在补体的参与下, 与Bb一起孵育一定时问后将Bb杀死.下面 以Lovrich及Callister介绍的方法简述如 下:取对数生长期的Bb培养液,用新鲜BSK 培养液将其浓度调整至约10/mlBb悬液, 取lOIBb悬液加入螺口试管中,取病人血 清(或灭活动物免疫血清)lO0,ul及无菌豚鼠 补体10加入试管中,于31~33?孵育一定 时问(2,13h),然后于暗视野显微镜下计数 括与死的Bb效.对于晴视野显微镜下不动 的Bb是否死亡,检查方法有两种t一是,取 上述混合液加入新鲜BSK培养基中32?孵 育3天.每24h于暗视野显微镜下计数活Bb 数量{其=是H腺嘌呤掺合率法:100~1待 检血清(10倍稀释),50,~1Bb悬液(浓度为 lo5/m1)及5OI补体加入1.Sml螺rl试管. 31?孵育6h.然后加入5.H腺嘌呤及 600~1BSK培养基3l?孵育96h.之后培养 液15850Xg离心7rain.去上清液.沉淀悬 ,离心去上清液, 浮于?50mlPBS(pH7.0)中 如此洗涤3次,洗完后检查Bb对.H的摄取 情况.以判断括Bb数量. 2.微量比色法(Colorimetricborreliaci— daIassay)[:杀菌试验需在试管中进行.此 外,由于Bb不能于固体琼脂培养基上生长, 因此需在暗视野显微镜下观察死,滔Bb的 数量,因此该试验费对,可靠性差,且不适于 大量标本的检测Jianneng及Coughlin新近 报道了一种微量比色法测定杀菌抗体.其主 要原理是新陈代谢话跃的螺旋体产生的非挥 发性酸与酚红指示剂发生颜色反应,根据颜 色变化来判断螺旋体的生长与否及其生长数 量.具体实验于96孔微量反应板中进行, 56?45rain灭活的混合鼠抗-Bb血清.用 mBSK培养基(酚红含量l20~g/m1)连续倍 比稀释.每孔加lOO,~i稀释好的抗血清,再加 51豚鼠补体及g5I对数生长期的Bb培养 液(浓度约为4Xl06/m1),于32?培养2,5 天.结果判定,一是通过肉眼定性判定,48, 721,孵育后反应渡呈黄色.说明有Bb生长, 呈红色说明没有Bb,生长或Bb死亡}也可通 过测量吸光度来定量判定.于培养前及培养 后每隔24h,在562/650nm波长下测量各孔 液体的吸光度,以判断Bb生长情况.作者指 出比色法与3H腺嘌呤掺合法吻合性良好(r 一 0.977),在吸光度0.4,1.3内呈线性相 关.该法的优点是安全可靠.简便易行,且可 同时检测大量标本. 223 3.生长抑制试验:生长抑制试验与 杀菌试验基本相同,不同的只是生长抑制试 验可不加补体. 4.杀菌力中和试验(Neutralizationof borrellacidalactivity)"】:主要步骤如下: 75td抗一人IgG加5#1莱姆病人血清,37?作 用2h.2200Xg离心10mln,取上清液用 BSK培养基1-2O稀释,取lO0~I加入含有 100plBb悬液(约6Xl05/m1)及10#1补体的 试管中,32?作甩6h,然后检查活的Bb数 量.实验时,以75IPBS代替抗一人IgG作对 照. 5.凝集试验(Agglutinationassay)Ll;于 96孔圆底搬量反应板各孔中加入PBS倍比 稀释的莱姆病人血清各100#1,再加入Bb悬 10'/m1)100~1,22?静止作用2h后, 液(2× 用肉眼观察结果,液体清亮,孔底形成凝集团 者为阳性,液体混浊者为阴性. 参考文献 [1']SchmidGPeta1.JInfectDis.1985; 151l144,149123MMWR.1991;4D(25)I 417~42113]Hedbergcweta1.JInfectDis. 1987;155(6)l1325,1327[4]Koch;SK and.TohnsonRC.InfectImmun.1988;56(2) t314~321[5]PaviaCSeta1.JInfectDis, 659E6]LovrichSDet 1991;163(3)i656, aI.In{ectImmun,1991;59(8)l2522, 2528[7]caIlisterSMeta1.JClinMicrobl— ol,1991;29(9)ll773,l776[8]Callister SMetaI.JInfectDis,l993;167(1)1158, 164E9]JiannengMA&CoughlinRT.JMi- crobioIMethods,l993;17(2)l145,153 [1O3AriadnaSadzieneeta1.JInfectDjs. 1993|167(1)I165,l72 (1993年8月19日收茁, (上接第216页) [3]SandersCC.AnnuRevMierobiol,1987l 41l573,593I-4]JuliaMLeta1.JAntimi— erobChemother.1991;28(1)il6l,16zEs] GrundstramTetaI.ProcNatlAcadSci USA,1982,79(4)}I111,1II5[6] SandersCC.JInfeetDis,1985{l5(2)l399 ,4o6[7]LindbergFeta1.ProcNatlAcad SaiUSA,1985;82(14)l462O,4624[8] MinamiSetaI.AntimicrobAgents Chemother,I980l18(2)I382,385[93 SandersCCeta1.JInfectDis.1986;l54(3) I792~8001"10]OkonogiKeta1.JAntimi? erobChemother,1985;16(1)I31,42[u] HonoreNeta1.EMBOJ.1986;5(12)' 3709~3714[12]KorfmanGeta1.RevIn. fectDis,1988|10(4)I793~799[13]Lind. bergFeta1.JBacterioI,l987}169(5)I l923~1928[14]NicolasMHeta1.Antimi— crobAgentsChemother,l987:3l(2)I295 ,299[15]KorfmanGeta1.AntimicrobA. gentsChemot~er,1989;33(9)l1946, l951E16]OiivaBeta1.AntimicrobAgents Chemother,1989;33(5)lln6,1117[173 LivermoreDMetaI.Chemotherapy,1985}4 (1)l28,35E18]GutmannLeta1.JInfect Dis,1984;148(2)l316,32l (1994年1_日5日收穑, /?1:.????
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