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新生儿口腔中白色念珠菌来源的分子遗传学初探

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新生儿口腔中白色念珠菌来源的分子遗传学初探 万方数据 实用u腔医学杂志(JPracrstonlatoI)2()(MIan,20(1 根据扩增产物在琼脂糖凝胶上进行电泳分离和染色后 品示的条带位置和数目的差异町对菌株进行分型。该 法已作为一种念珠菌分型方法被应用于多项研究“。。 本研究应用濠法检测母体及其新生儿体内定植的白色 念珠菌是否为相同的基因副,以确定新牛儿口腔中念 珠薷是否来源于母体,从而为临床新生儿雪L::】病的防 治提供依据和指导。 1材料与方法 1.1研宄对象 在深圳市妇女儿童医院产科病房选取将在48h 内分娩或进行剖腹产的...
新生儿口腔中白色念珠菌来源的分子遗传学初探
万方数据 实用u腔医学杂志(JPracrstonlatoI)2()(MIan,20(1 根据扩增产物在琼脂糖凝胶上进行电泳分离和染色后 品示的条带位置和数目的差异町对菌株进行分型。该 法已作为一种念珠菌分型方法被应用于多项研究“。。 本研究应用濠法检测母体及其新生儿体内定植的白色 念珠菌是否为相同的基因副,以确定新牛儿口腔中念 珠薷是否来源于母体,从而为临床新生儿雪L::】病的防 治提供依据和指导。 1材料与方法 1.1研宄对象 在深圳市妇女儿童医院产科病房选取将在48h 内分娩或进行剖腹产的产妇纳人研究。所有纳入研究 的产妇在最近3月内未血用过口服或局部抗真菌药 物。 1.2 方法 1.z.1标本采集采集208僦产妇产前48h以内的 口腔含漱液标本和阴道拭子标本,并采集其足月新生 儿l、3、5d和j月的f_I腔拭子标本。 1_2.2念珠菌培养及鉴定拭子标本立即置于沙保 肉汤培养基中,37℃孵育48h后接种于沙保葡萄糖 琼脂(购自英目()xold公司)上,再于37c孵育48h。 含漱液标本以4000r/min离心10min后去除上清 液.再川lmlO.1mol/LPBS(pH7.2)重悬。吸取50 ¨l混悬液接种于沙保葡萄糖琼脂上,37℃孵育4811。 对培养得到的菌落分别进行形态学观察、革兰染色、芽 管实验、45c生长实验、API20cAux和APIzYM 实验(购自法国BioMerieuxs.A.公司),将确认的白 色念珠菌菌株保存于 70℃备用。选取母子均分离 山白色念珠菌的标本进行DNA提取和RAPD。 1.2.3白色念珠菌DNA提取 解冻保种的白色念珠菌,接种于SDA上37℃生 长24h,收集菌落置人】mllmol/I,山梨醇中,13000 rjmm离心jmjn,再用1ml1 nlol/I.山梨醇洗1次; 加入15ftI溶细胞酶(购自美国Sigma公司)、1pIp巯 荩乙醇和1mlsE缓冲液(】.2m01/I。山梨醇,o.1 nlol/LEDTA,pH8.o),37℃水浴111;loooor/min 离心lmIn收集去菌壁细胞.用ln·}sE洗1次,加入 O.dml0.15m()l/I.NaCI/O.1m01/LEDTA、10ul蛋 白酶K(20mg/mI)(购自美国l,i【c1'echnologks Inc),o.5ml1 00g,I,十二烷基磺酸钠(SDS)、30口】 RNA酶(10mg/m1).j5℃9晖育2h;酚氯仿法提取 DNA,异阿醇曲‘淀DNA,j5℃T燥jmln,溶解于o.j mlfl、E缓冲液。分光光度计测量A260/280,调整浓 度为20~50ng/“l,4℃保存。 l-2.1RAPD所用引物的核苷序列为:5’(:cA TAT(1AArI'AA(jc(;GAGGAAAAG37(由Interg— ratedDNATechnologiesInc.台成) 根据扩增试剂盒说明,30"lPcR反应体系包括: 20ngDNA,引物o.j扯】(100pmol/I,),supermix 混合液27”l(含】单位Taq酶,220“m。l/I,dNTP.22 mmol/LT“sHCl,55Inmol/I.KCl,2.5mmol/I。 MgCl2)。 扩增循环为:944C1min,3l℃2min,72℃4min, 共5个反应循环,94℃1mh,36℃2mim72℃2mm, 共4j个反应循环,72vc延长10mln。 RAPD扩增产物采用25g/L琼脂糖电泳,以100 bpIadderDNA(购白美国MBI公司)作为分子大小 参照物,loov恒压电泳2h。电泳结束后于o.5“l/ m1溴乙啶液中浸泡染色30min,KodaknDc260数码 相机摄像,分析扩增条带,根据主要扩增条带的数目和 出现的位置的差异对白色念珠茼进行基因喇分型。 2结果 2.1 产妇产前及新生儿产后l、3、5d的白色念珠茵 检出结果 208名产妇中,有47名(22.60%)从其阴逍检出 _r白色念珠菌,50名(24.04%)从其n腔中检出了白 色念珠菌。其中有32名(15.38%)从其阴道和口腔同 时检出了白色念珠菌。208名新生儿中在产后1、3、5 d仅有2名(o.96%)检出白色念珠菌。这2名新生儿 的母亲均同时从其阴道和口腔检出了白色念珠菌。 2.2新生儿出生后1月的白色念珠茵检出结果 产后1月共有201名新生儿复诊接受了u腔拭子 检查,有43名(21.39%)检出了白色念珠菌。其叶1,仅 有5名新生儿的母亲在产前枪出了念珠菌。这5名产 妇中,有3名是从其阴道和口腔均检出了白色念珠菌, 另2名只从口腔检出了白色念珠菌。 2.3基因型分型结果 有7刘均有白色念珠菌检出的母婴被纳入了基因 型分型对比研究。RAPD检测的结果显示,从新生儿 分离得到的白色念珠菌的基因型与从其母亲口腔或阴 道分离得到的白色念珠菌的基因型均不相同(见图 L). 3讨论 本研究发现+产后5d内仅有不到1%的新生儿口 腔中检出了念珠菌(均为白色念珠菌),而Russcl 等一”报道同期新生儿念珠菌检出率为11.9%,这町能 万方数据 实用n腔医学杂志(JPranst(]mat()I)211rⅢI柚,2(1(1 泳道ls:第l埘母婴(1母亲口腔,2一母亲阴道,3新生儿口腔) 泳道46:第2州母罂(卜母亲几腔,5一母亲阴道,6新生儿口腔) 泳道79:第。对母婴(7一母亲口腔。8母亲阴道.9新生儿口腔) 泳道1【)12:第4对母婴(10母亲口腔,11母亲阴道,12新生儿 ¨艄) 泳道1争15:第5对母婴(13母亲口腔,11母亲阴道,15一新牛儿 LJ腔) 泳道J6】7:第6埘母罂(16一母亲口腔,】7新生儿口腔) 泳道l8 19:第7对母婴(18母亲口腔,19新生儿门腔) 第l刘和第2对标奉采自产‘妇产前及新牛儿产后1、3、j 是由于进行本研究的I矧鸵较为注最新生儿的护理质最 所致。但本研究和Russell。‘。的研究均发现,当新生儿 出院后⋯到家斗】.念珠菌的愉出率明显增高。这n,能 足由于新牛儿回家后饮食习惯的改变.女¨丌始用奶瓶 喂奶或添加其他辅食,而食物中糖的岔罱增高有助于 念珠菌的乍长;也有可能源自外界环境如新生儿看护 者的念珠菌进入了新生儿¨腔,从而导致了榆出率增 高。新生儿在医院内白色念珠菌的低检出率和出院后 榆出率明屁增高的现象提示,母婴垂卣传播廿J能并非 新牛儿口腔中的白色念珠荫的主要来源,萁来源可能 系其他如食品、餐具等途径。 本研究应,仃RAPf)法,更发现新生儿白色念珠菌 分离株的基因型与其母体分离株的基因刑即遗传特性 明显不同。这就从DNA水平说明新生儿口腔巾的白 色念珠菌很可能足来源于外界环境,而母婴垂汽传播 很可能并非新生儿口腔中自色念珠菌的主要来源。 参考文献 吐‰Ⅲ 眠 峥旷 ~h一 一=主 柳兰~三一训溉~篇一 ¨ 。 . n H L吾娟h 叫 。 m㈨ 姘警一一篡篇≥黧一揣一~№删篇≯懈~篆蕊薰瑟{|蠢瑟薹誉一 淼一嚣然岫一裂淼兰器薹一器。 笋蠢赫瓣三嬲,一罴 万方数据 新生儿口腔中白色念珠菌来源的分子遗传学初探 作者: 曾昕, 陈谦明, 李晴, 刘植华, 聂敏海, 李秉琦 作者单位: 曾昕,陈谦明,李秉琦(成都四川大学华西口腔医学院,610041), 李晴,刘植华(深圳市妇女儿 童医院), 聂敏海(泸州医学院) 刊名: 实用口腔医学杂志 英文刊名: JOURNAL OF PRACTICAL STOMATOLOGY 年,卷(期): 2004,20(1) 被引用次数: 6次 参考文献(5条) 1.Russell C;Lay KM Natural history of Candida species and yeasts in the oral cavities of infants[外 文期刊] 1973(08) 2.Robert F;Lebreton F;Bougnoux ME Use of random amplified polymorphic DNA as a typing method for Candida albicans in epidemiological surveillance of a burn unit 1995(09) 3.Williams JG;Kubelik AR;Livak KJ DNA polymorphisms implified by arbitrary primers are useful as ge netic markers[外文期刊] 1990(22) 4.Pfaller MA Epidemiological typing metbods for mycoses 1992(Z1) 5.Waggoner-Fountain LA;Walker MW;Hollis RJ Vertical and horizontal transmission of unique Candida species to premature newborns 1996(05) 引证文献(6条) 1.邓旎.张金婷.车团结.康妍丽.范真.何祥一 兰州市母婴间念珠菌传播的流行病学研究[期刊论文]-实用口腔医学 杂志 2009(6) 2.王萍.厉荣玉.董群 白假丝酵母菌DNA提取方法的研究[期刊论文]-热带医学杂志 2008(12) 3.吴非.宫雁冰.张中林.王美惠.姜涌.郑剑玲 龋病与口腔白色念珠菌家族传播的相关性研究[期刊论文]-中国实用 口腔科杂志 2008(6) 4.姜静.王松灵 鹅口疮病因学研究进展[期刊论文]-北京口腔医学 2007(6) 5.周曾同.赵民.张济.唐国瑶.吴岚.石建涛 口腔白色念珠菌的PCR ITS1-ITS2基因分型法的建立及应用[期刊论文]- 实用口腔医学杂志 2006(1) 6.魏昕 老年口腔念珠菌的分布及生物学研究[学位论文]博士 2005 本文链接:http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_sykqyxzz200401030.aspx
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