淫羊藿成分含量测定

中心以化工行业技术需求和科技进步为导向，以资源整合、技术共享为基础，分析测试、技术咨询为载 体，致力于搭建产研结合的桥梁。以“专心、专业、专注“为宗旨，致力于实现研究和应用的对接，从而推 动化工行业的发展。 科标化工分析检测中心致力于推动化工产业发展，欢迎各行同仁前来洽谈、合作。 淫羊藿成分含量测定（淫羊藿苷） 淫羊藿为小檗科植物淫羊藿 Epimedium brevicornum Maxim、箭叶淫羊藿 Epimedium sagittatum(Sieb. Et Zucc.) Maxim、柔毛淫羊藿 Epimedium pubescens Maxim、巫山淫羊藿 Epimedium wushanense T.S.Ying或朝鲜淫羊藿Epimedium koreanum Nakai的干燥地上部分。2005 版《中国药典》一部收载的含量测定方法，一要是采用紫外分光度法测定总黄酮的含量，二是 采用高效液相色谱法测定其淫羊藿苷的含量。有关淫羊藿及其制剂中淫羊藿苷的含量测定方法 主要有高效液相色谱法、薄层扫描法等。 一、高效液相色谱法 2005版《中国药典》淫羊藿含量测定项下： 色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水（30：70）为 流动相；检测波长为 207nm。理论板数按淫羊藿苷峰计算应不得低于 1500。 供试品溶液的制备：取本品叶片粉末约 0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙 醇 20m，称定重量，超声处理 1小时，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀， 滤过，取续滤液，即得。 文献报道的 HPLC法主要的流动相系统有： A：乙腈-水 ① Waters 515 高效液相色谱仪(Waters 公司)；Metachem Kromasil C18色谱柱(4.6mm× 250mm,5μm)；流动相为乙腈-水(26：74)；检测波长 270nm；柱温 35℃。 ②Angilen 1100 液相色谱仪；色谱柱 Nova-pak250mm×4.6mm, 10μm)C18柱；乙腈-水(26： 74)为流动相；检测波长为 270nm。 ③HP1100型高效液相色谱仪(美国)；色谱柱为 C18柱(4.6mm×250mm),大连依利特科学仪 器有限公司提供；流动相：乙腈-水(30：70)；检测波长 270nm；柱温室温。 ④岛津 LC-2010高效液相色谱仪；C18反相柱(150mm×4.6mm,岛津公司)；柱温 40℃；流 动相：乙腈-水(25：75)；检测波长 270nm。 ⑤Agilent 1100 series 高效液相色谱仪；ApolloC18 ( 250×4.6mm,5μm)；流动相：乙腈-水 (26：74)；柱温室温；检测波长 270nm。 中心以化工行业技术需求和科技进步为导向，以资源整合、技术共享为基础，分析测试、技术咨询为载 体，致力于搭建产研结合的桥梁。以“专心、专业、专注“为宗旨，致力于实现研究和应用的对接，从而推 动化工行业的发展。 科标化工分析检测中心致力于推动化工产业发展，欢迎各行同仁前来洽谈、合作。 B：乙腈-磷酸溶液： ①Waters 高效液相色谱仪；YWG-C18柱(4.6mm×150mm,10μm ,北京分析仪器厂)；流动 相乙腈-0.05%磷酸溶液(33：67)；检测波长 270nm；柱温室温。 ②美国 SSI PC2002 高效液相色谱仪；色谱柱 Diamonsil C18 (4.6×250mm,5μm)；流动相 为乙腈-水(用磷酸调 pH值至 3.0)(30：70)；柱温 35℃；检测波长 270nm。 ③SP-1000高效液相色谱仪；色谱柱 ODS-C18 (4.6mm×200mm, 5μm)；流动相 0.075mol/L 磷酸溶液-乙腈(用三乙醇胺调节 pH值为 6.6)(74：26)；检测波长 270nm；柱温 37℃。 C：甲醇-醋酸溶液： ①日本岛津 SPD210A 高效液相色谱仪；ODS柱,10μm,250mm×4mm。流动相：甲醇-水- 冰乙酸(60：40：0.5)；柱温 30℃；检测波长 270nm。 ②P200 Ⅱ型高效液相色谱仪；色谱柱为 Hypersil ODS2 (250mm×4.6mm,5μm,大连依利特 科学仪器有限公司)；流动相为乙腈-0.4%醋酸水溶液(25：75)；检测波长为 270nm；柱温为室温。 样品溶液一般以甲醇、稀乙醇为提取溶剂，净化处理一般用聚酰胺柱或 C18小柱处理；也 有用正丁醇-碳酸氢钠、乙醚-醋酸乙酯等试剂萃取。 另外，韩海建立复方骨宝片中有效成分淫羊藿苷含量的高效液相色谱测定法。采用 Shimazdu 高效液相色谱仪；色谱柱 Shimpack ODS (4.6mm×250mm, 5Lm)；流动相为乙腈-0.02 mol/L磷酸二氢钠溶液(32：68)；检测波长为 254nm；柱温 30℃。 二、薄层扫描法 以薄层扫描法测定淫羊藿苷含量时，常用的薄层展开剂为醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水系统。如： 胡润淮等建立薄层扫描法测定复方仙灵脾注射液中淫羊藿苷含量的方法。采用 CS-9301 型双波 长薄层扫描仪(岛津)。薄层层析条件：硅胶 GF254板；展开剂：醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10∶1∶ 1∶1)。薄层扫描条件：采用反射法单波长锯齿扫描法，狭缝为 1.2mm×1.2mm，线性参数 SX =7， 扫描宽度为 14mm，测定波长为λs=272nm。供试品溶液的制备：用移液管吸取复方仙灵脾注射 液 5ml，置分液漏斗中，先用 0.1mol/LNaOH饱和过的正丁醇萃取 3次(10,15,20ml)，弃去碱液， 合并正丁醇层，再用正丁醇饱和过的 0.1mol/LNaOH溶液洗涤 3 次(15,20,20ml)，弃去碱液，合 并正丁醇层,置水浴上蒸干，残渣以水 7ml 溶解，置于已处理好的大孔吸附树脂层析柱(1cm × 10cm) 上，依次用蒸馏水、20%乙醇、70%乙醇进行洗脱 ,洗脱液体积均为 100ml ，流速为 5ml/min。收集 70%乙醇洗脱液，回收乙醇后，置于浴上蒸干，残渣用少量甲醇溶解，移至 5ml 中心以化工行业技术需求和科技进步为导向，以资源整合、技术共享为基础，分析测试、技术咨询为载 体，致力于搭建产研结合的桥梁。以“专心、专业、专注“为宗旨，致力于实现研究和应用的对接，从而推 动化工行业的发展。 科标化工分析检测中心致力于推动化工产业发展，欢迎各行同仁前来洽谈、合作。 容量瓶中，用甲醇定容至刻度。 三、其它 杨广德等建立了薄层色谱-荧光分光光度法测定淫羊藿药材中淫羊藿苷的含量。采用 RF-540 型荧光分光光度计(日本岛津)；硅胶 G硅胶 G加 0.1mol/L Na2HPO4的羧甲基纤维素钠溶液自 制板；以醋酸丁酯-甲酸-水(1.3：1：1)在 10℃以下放置后的上层溶液作为展开剂；显色剂：10% AlCl3甲醇溶液；在 Ex=430nm，Em =480nm条件下测定荧光强度。药材用 70%乙醇水浴回流 提取。 张明昶等采用一阶导数光谱法测定骨松宝颗粒中淫藿苷类化合物的含量。采用 UV-250IPC 紫外可见分光光度计(日本岛津)。样品供试液制备方法：骨松宝颗粒→除去包装→加入 70%乙 醇，60℃水浴中加热提取→用 60℃水超声振荡提取→静置过夜→用 70%乙醇补足重量→上取聚 酰胺柱→先用 30ml蒸馏水洗脱,弃去洗脱液→再用 70%乙醇洗脱，收集乙醇液，定容于 50ml 的 容量瓶中，即为样品供试液。在 200～400nm范围内自动扫描(△λ= 2nm)，以一阶导数峰～谷 法(262～276nm) 的振幅值(D)为定量依据测定含量。