双歧杆菌发酵中国黑米口服液的研制

77l7 《食品工业科技 叩6 7 scie ce aⅡd Tec 。J。gy。f F。0d lndustry v。J．20，N。．4，l999 双歧杆菌发酵中国黑米口服液的研制 目黑来 瞅暾 口限激 中国 周马林 黄立武 (广西医科大学 至 藉 妄，南宁53。021) (广西甲隹孕1皖—啸舾 摘 要 以中国黑米为主要原料．制怍发酵培养基，采用耐氧两歧双歧杆菌进行发酵扩大培养，以职歧杆菌发酵 tivat[on of oxygen—to[erant B．bifidum using chinese black rice fermentab[e media．We observed diarrheic and dyspeptic childen who recieved the oral liquid and found a good curative effect． Key words Biridobacterium ichinese black rice fermentable med ia ● ● ⋯ ● ● 一 ⋯ ● ● 一 一 ⋯ 一 ． ～ 一 ～ ● ． 1● _． ⋯ ● ⋯ ● ～ ● ● 。一 ⋯ ● ● 。一 _● ● ● 一 双歧杆菌是一无毒、无害的细菌。自Tissier报道 从健康母乳哺育的婴儿粪便中分离到双歧杆菌后，国 内外的研究表明，该菌是人体肠道内正常菌群之一． 是肠道微生物区系中典型的对机体百利无一弊的有 益菌u]。用该菌制成的双歧杆菌制剂，对人体有多种 保健和治疗作用 ‘。据国内学者研究表明，黑米非常 适合做为乳酸杆菌发酵的原 。其淀粉部份经酶解 转化为双歧因子低聚糖后，能够促进体内外双歧杆菌 的生长。本研究采用黑米为主要原料，经过实验，确定 了产菌量高的发酵培养基配方和发酵工艺，研制成了 活菌数 lO。个／ml以上的双歧杆菌发酵中国黑米口 服液，并经临床验证其疗效。 1 材料与方法 1．1 实验材料与设备 菌种 北京东直门外乳品厂， 黑米、大豆 广西农业科学院； a一淀粉酶 无锡酶制剂厂， 大豆蛋白胨、酵母膏、肝浸膏粉 北京海淀区微 生物培养基制品厂； 超净工作台，恒温培养箱，高压消毒锅，PHs一 2c型酸度计(上海雷磁电器厂)，压盖机，不锈钢板框 过滤机。 1．2 菌种鉴定 1．2．1 据中科院微生物所试验．双歧杆菌(两歧双歧 杆菌、婴儿双歧、青春双歧、短双歧等)对人和动物无 任何毒性。 1．2．2 据大连医科大学康白教授，双歧杆菌小 鼠1：3服 LD50>5000mg／kg，小鼠静注 6亿个／只，腹 腔注射 1 5亿个／只均未见有任何不良反应。 1．3 工艺流程 黑米 jk唐浆 生 焉 竖 液化一过滤 ·46· 生长促进荆 ^ 滤液—． 料 分装250ml盐水柏 墼上 热l_l亘 i 亚菌一 豆汁、无机盐等 串却i 37～40 C盥 h一 起歧杆菌一垃种一 二垃种J 发酵一检测一压铅盖一成品 1．4 培养基配制 1．4．1 发酵培养基 黑米汁4O ，豆汁 3O ，葡萄糖 0．3 ，酵母膏 O．1 ，肝浸膏粉 0．1 ，生长促进剂 A 0．25 ．生长促进剂 B 1O ，磷酸二氢钾 O．1 ，调 pH6．5～7．0，0．1MPa灭菌20rain。冷却后，用于双歧 杆菌二级种子培养及口服液成品的发酵。 1．4．2 一级种子培养基 lO ～l2 脱脂牛乳中加 入 0．25 生长促进剂 A，2 葡萄糖，分装大号试管， 0．1MPa灭菌 20rain，冷却待用。 1．4．3 牛奶琼脂平板 参见文献 2方法。 1．4．4 磷酸盐缓冲液 参见文献 3方法。 1．5 研制过程 1．5．1 一级菌种培养 取冰箱保存双歧杆菌脱脂牛 奶纯培养物，按 5 量接种一级菌种培养基，置 37℃ 恒温培养箱中非厌氧培养至培养基凝固，有乳清析出 后，又取出培养物．按以上比例．接种一级菌种培养 基，如此，反复数次直至凝乳时间为8h．pH3．5～4． 活菌数 lO。个／ml以上即可做为生产用的一级苗种。 1．5．2 I作发酵剂(二级菌种)的培养 取一级菌 种，按 5 的量接种发酵培养基，置 37 c恒温培养 14 ～ 16h．发酵物 pH4．0后，又取出培养物，按以上比例 接种发酵培养基．如此，反复数次，直至发酵物酸度 (。T)为75~85，pH4．0，活菌数，10。个／rot以上， 1．5．3 成品制造 按生产量把发酵培养基配好，分 装医用盐水瓶，塞好耐高温橡皮塞(瓶塞和瓶口之间 维普资讯 http://www.cqvip.com 《食品工业科技》 Science and Technology of Food Industry Vol一20，No一4·1999 夹 有 2～3cm 长棉绳，以便通 气)，0．1MPa灭 菌 20min．拨掉棉绳．塞紧橡胶塞．自来水冲洗冷却至 37 ～ C．无菌操作，按 5 比例接种工作发酵剂，置 37C恒温培养 16～18h，活菌数测定，10 个／ml以 上，酸度 85叮 左右，pH4．0，未染杂菌，压好铝盖，即 为成品，置4 C或阴凉处保存。 2 临床效果观察 2．1 病例选择 观察对象全部选择广西中医学院一附院儿科门 诊、病房的腹泻患儿，男 4o名，女 26名，年龄最小 4 个月，最大 5岁，随机对照．分为治疗组36例，对照组 30例。病例一般情况：大便次数增加3次／d以上．伴 粪质改变，呈水样，蛋花汤样或稀粘便，大便常规可见 脂肪球及少量WBC，病程最短 1d，最长 30d。 2．2 治疗方法 分为治疗组和对照组．疗程 3～5d。治疗组：双歧 杆菌制剂组，剂量 100mlBid；对照组：抗生素治疗组． 剂量氟哌酸 1 5～20mg／kg／d，庆大，氨苄常规治疗。 2．3 临床疗效 36例病例中，3d内康复者 28例，占77．8 ，5～ 7d恢复者4倒，占 11．1 ，总有效率 88．9 ，无效者 4例占 11．4 。见表 1．表 2。 枉 1 临康疗效比较 经 x 检验：x 11．4761 P标准

excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载