间充质祖细胞源性神经元样细胞肌内移植延缓骨骼肌萎缩.doc

间充质祖细胞源性神经元样细胞肌内移植延缓骨骼肌萎缩.doc 间充质祖细胞源性神经元样细胞肌内移植延缓骨骼肌萎缩 王丽娟1 赵文勇2(1.西南药业股份有限公司，中国 重庆 400038;2.重庆市公安局九龙坡区分局，中国 重庆 400039)【摘 要】目的:探讨间充质祖细胞(Mesenchymal progenitor cell，MPC)源性神经元样细胞移植于靶肌肉内延缓失神经性骨骼肌萎缩。:取GFP转基因C57小鼠后肢长骨进行MPC培养、诱导及鉴定。选取C57小鼠36只，随机分为MPC移植组、神经断离组及对照组，MPC移植组腓肠肌内散点注入5μL MPC悬液，神经断离组腓肠肌对应部位散点注入等量PBS，对照组不作处理。观察小鼠后肢活动能力，术后2和4周测量腓肠肌湿重、肌纤维横截面积维持率及观察超微结构，用HC及RT-PCRMyogenin 。MyoD 的达。结果:术后2和4周，MPC移植组腓肠肌湿重及肌纤维横截面积维持率显著高于神经断离组(P<0.01);术后4周，MPC移植组肌细胞核、线粒体、内质的退变及肌肉纤维化程度明显低于神经断离组，α-actin、MHC、 Myogenin 、MyoD表达强度显著高于神经断离组(P<0.01)。结论:异体间充质祖细胞靶肌肉内移植可有效延缓失神经肌肉萎缩，为临床上周围神经损伤后肌肉萎缩的防治提供了新的思路和方法。教育期刊 关键词 间充质祖细胞;肌肉萎缩;失神经支配※基金项目:国家重点基础研究发展规划项目(“973”项目)(2012CB518100)。作者简介:王丽娟(1978—)，女，汉族，大学学历，西南药业股份有限公司，工程师，主要从事药品检验鉴定及新药开发的研究。通讯作者:赵文勇，博士，重庆市公安局九龙坡区分局，副主任法医师。骨骼肌的失神经性萎缩，是周围神经治疗领域至今尚未解决的难题。既往研究表明:神经干细胞直接注射于肌肉内，移植细胞可长期存活，且部分分化为神经元及神经胶质细胞,并有效延缓了失神经性肌肉的萎缩[1-2]，然而足量的神经干细胞获得途径有限且扩增困难，寻找新的移植细胞至关重要[3-4]。新近研究发现，间充质祖细胞具有易获取、易生长、增殖能力强等特点，其体外诱导分化来源的神经元样细胞肌内移植能够原位定植存活及很好地维持移植前神经元及神经胶质样细胞的特性 [5-7]。那么将这些神经元样细胞直接移植于靶肌肉内能否达到延缓失神经性骨骼肌萎缩的作用呢,目前国内外文献少见报道。基于此本研究进行了相关探讨。1 材料与方法1.1 实验动物GFP 转基因C57小鼠6只，雌性，清洁级，3 周龄，质量(10?1)g; C57小鼠36只，雄性，清洁级，12周龄，质量(20?1)g;由中国人民解放军第三军医大学动物中心提供。动物使用许可证: SCXK(渝)2007-0004;环境许可证:XYXK(渝)2007-0004。1.2 主要试剂兔抗鼠α-actin、MHC、GAPDH抗体及羊抗兔IgG/TRITC二抗(Sigma公司);兔抗鼠NSE(neurone specific enolase)、GFAP(glial fibrillary acidic protein)抗体及羊抗兔荧光二抗均购自北京博奥森生物技术有限公司;蛋白提取液(Pierce公司);RNAiso Reagent、RNA PCR Kit(AMV) ver.3.0(TaKaRa公司);肌细胞生成素扩增引物为5’-TGGAGCTGTATGAGACATCCC-3’，5’-TGGACAATGCTCAGGGGTCCC-3’， 磷酸甘油醛脱氢酶扩增引物为5’-ACCACAGTCCATGCCATCAC-3’， 5’-TCCACCACCCTGTTGCTGTA-3’， MyoD扩增引物为:5’-GCCCGCGCTCCAACTGCTCTGAT-3’，5’-TCTTTTGGGCGTGAAGAACCAG -3’，引物由上海生工生物工程有限公司合成。1.3 GFP-MPC的分离、培养及鉴定取GFP 转基因C57小鼠后肢长骨，MPC的分离、培养、体外诱导及鉴定方法教育期刊