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啤酒酵母生长测定方法

2012-08-29 4页 pdf 115KB 27阅读

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啤酒酵母生长测定方法 啤 酒 酵 母 生 长 测 定 方 法 石 家庄市啤 酒厂 姚洪文 对啤酒酵母生长测定,至今没有被公认的唯一方法 现在的情况是人们廷用下来的经 典的方珐。到[979年,人们首次提出生物电技术测定啤酒酵母生长方法。这是 目前啤酒酵 母 生长方法的一个新的发展。 现将啤酒酵母生长方法综述介绍t (一)细胞数涮定法 (1)显微镜计数法t这是测定啤酒酵母总细胞数最直接的方法.是直接由显微镜计 数的方法。在实验室中,这种方法是由载玻片或者是血板计数器来进行的。不管前者还是 后者,都有已知深度的凹精载玻板,或称...
啤酒酵母生长测定方法
啤 酒 酵 母 生 长 测 定 方 法 石 家庄市啤 酒厂 姚洪文 对啤酒酵母生长测定,至今没有被公认的唯一 现在的情况是人们廷用下来的经 典的方珐。到[979年,人们首次提出生物电技术测定啤酒酵母生长方法。这是 目前啤酒酵 母 生长方法的一个新的发展。 现将啤酒酵母生长方法综述介绍t (一)细胞数涮定法 (1)显微镜计数法t这是测定啤酒酵母总细胞数最直接的方法.是直接由显微镜计 数的方法。在实验室中,这种方法是由载玻片或者是血板计数器来进行的。不管前者还是 后者,都有已知深度的凹精载玻板,或称凹槽载玻片 测定时。将其样品 (啤酒酵母)放 人规定的载玻板或血板计数器上。将校正好的方格片放置显微镜的物镜下方。用显微镜计 数每个方格中细胞数。一般情况是测定2O个方格或更多一些也可,并取其平均数。为了区 别话细胞,还是死细胞经常用活体染色剂染色。例如美兰能使啤酒死细胞染兰。这样。细 胞总数z可测。死细胞S通过染色得出。活细胞H按下式计数: H =Z —S 在啤酒工业上,这种方法是常见的。 (2)话板计数法t是细胞数通常用活细菌平板计数 测定。这种方法通常使用皮氏 培养皿,内装有适宜于啤酒酵母生长的琼脂培养基。将稀释的啤酒酵母微生物样品与琼脂 培养基一起均匀涂布,注意温度控制,以防涂布时将啤酒酵母杀死。然后,将涂布好的培 养皿放置到保温箱中培养24小时,或者更多一些时间,直至生长成离教的菌落,每一个茵 落都由一个酵母细胞生成。如果细胞间有凝聚现象,生长菌落就是链状。这样给计数工作 带来困难,因此工作中的关键在于酵母细胞与琼脂涤布质量。高质量涂布,计数准确。 从上所见,该法实质就是数菌落j。这里啤酒酵母菌总数z;j。在啤酒行业率 方 珐 应 用甚广。 (=)载玻片培养计数法 生产中这种方法是活板计数方法的修改方法。是在19 61年由PostgBte提出。具体方法 是将琼脂凝胶培养基放人固定在显微镜下的载玻片的一个环形槽中。故人啤酒酵母样品。 拿到保温培养箱中,待培养3~ 4小时,用显微镜检查载玻片上微小细胞菌落,计数H。 改变镜头,检查来成细胞菌落,计数细胞数。未长成菌落的小细胞为死细胞s 设细胞总数为Z,则z=H+S。 本方法比活板计数方法烦琐些,但计算速度比话板计数方法可提前 :2 4—4:2n小时 。 急需了懈啤酒酵母生长情况,本珐很适宜。 46 维普资讯 http://www.cqvip.com (呈)浊度计测定方法 把啤酒发酵液或把啤酒酵母细胞稀释于一规定的蒸馏水中。摇匀后,用光源麒射。再 用光电管测散射光值,可以得到各种样品散射光值,用其值与标准值对照,可以计算出各 样品细胞总 数。 此方法在啤酒工种上用得较多。 (四)Coult el"计数罄法 Coult el"计数器法即为了铡定总细胞数,该方法是比较准确的方法。这个方 法 是1965 年Gregg等提出。 本方法是将酵母稀释,摇振均匀后,放入装有电解质的贮液槽中,槽中设 有 真 空 管,内管打有Jb:IL。在内管的槽中装电极,电源为直流电源,开关装在线路中。按开关K, 通电后,括体酵母细胞通过小孔,进到内管。打开关闭形成脉冲。电阻变化大小与酵母细 胞数成正比。再用一种高精度脉冲仪,可以分析出酵母细胞数 目来。若没有高精度脉 冲分析仪,可以靠通电后,活体酵母进入小孔,当时间到一定值时,内管收集全部活体酵 母。内管取出稀释分析读数为H, 由槽液取样,分析读出S值。 如果总细胞数为z,则有Z=S+H 此需注意酵母所带电荷,】979年北京 发酵科技 提出下面发酵酵母啤酒带有负电荷, 至夸一直被人们公认。因此,下列设计的试验测定装置最合理,测定数据准确。 + 2_ 叫 ] l __— — 3 由 nI 4 凄 1' ● , o o 6 图一:Coult el"酵母计数器示意图 l电解质植 2电源 3电解液 4真空管 5活体酵母 6死酵母 7管孔 本方法是生物电技术一部分,被越来越多的人所使用。 (五)细胞重量测定法 细胞千重量罚!f定法:经典的细胞千重测定法,是将酵母发酵液 的一定量进行浓缩 ,离心 用水洗涤。然后在80。C条件下烘干24小时,或 110 。C条件下烘干 8小时,之后用精密天 平称重。 酵母是一种伺体细胞,在洗涤时由于水中的碳酸盐等受热析出,与烘干后酵母混在一 起影响啤酒酵母烘干后称重。 因此,细胞千重法,关键在于排除洗涤剂烘干后的沉淀物,否则将影响到测定的准确 性。 混拙度法:因为啤酒发酵液的光密度,混浊度,与酵母重量成正比。这种方法提供了 简单、-快速和价廉的估算酵母细胞重量的一种经典方法。光强度It通过距离L的变化 维普资讯 http://www.cqvip.com _£ltc ⋯ .① 武中£是克分子吸收系数,C为啤酒发酵液浓度,方程积分得到: ig 一eCL ⋯ ·② 或: :e “ ⋯ ③ 0 式中8 是克分子消光系数,蹦此ln (It,/I o)对浓度C作图,斜率 为 一£L的 一条 直 线。L通常选用1 cm,(It/ 。)×l 0o定义为透光度T的百分数,吸光度等于lg{。所以 由①得吸光度A的值 : A=lg}:£,CL ⋯..④ 因此吸光度对浓度作图是一条直线。 啤酒酵母液通常震用分光光度计,被长在600~7 OOnm之间测定。或者应用比色 计 以 光通过红色滤光片。重要的是不要在直线外分析,大多数分光光度计是线性的,一直到两 个或更多的吸光度单位。一个啦光度单位近似等于细胞半克至一克。这是多次试验得出的 可以拟用的数据。 当应用混浊度测量细胞重量时,很重要一点是选取光的波长范围。同时发酵废物和培 养基组成的不得吸收光,在酵母细胞液 中不得有非细胞固形物,防止影响测定效果。 (六)啤酒酵母细胞生长计算 生物电技术越来越广泛地应用于啤酒行业。自从人们发现啤酒酵母生物电,不仅确定 了电性,也研究了带电的成因。公认的观点是啤酒酵母只有发酵才带电,换句话讲,只有 代谢才带电。生物电是活体生物的共性。 另一方面,就啤酒发酵液来讲,由于酵母消耗了葡萄糖、果糖、麦芽糖等 可 发 酵 性 糖,在有氧情况下,产生了水和二氧化碳等物质。引起人们重视的,在无氧发酵情况下, 除 了产生乙醇和二氧化碳外,有机酸且有增加,使氢离子浓度提高量增大。到发酵终期, 由于氢离子正电荷量等于酵母负电荷量,酵母沉集于罐底。通过大量试验,证明和推算 出 二者关系的数学公式; A : ·M ·T·Y : cp.a. {一 型 一z二 [}i 上.M.T.Y q [H ]=——代发酵终了氢离子浓度 [H ]一 代表发酵初期麦汁氢离子浓度 M ’一 代表汁质量常数,M是麦汁酸度缓冲影响 在 最 ~(-Hp=4.2—4.4酸 度 在 <2.0ml NaoH/lOOml时, M=1 N aoH=0.]N 48 维普资讯 http://www.cqvip.com , . c . 维 酶 素 成 份嚣的 再 一 一 离心逆流分配色谱 (CCPC’)法的应用实例 邬菊潭 中国科学院生物物理研究所 中发生物工程研究所 维酶素为商品名,原名为粗制核黄素。早在五十年代便已广泛 地应用于医疗和营养, 除治疗核黄素缺乏症外,还以添加剂形式用于战士的膳食及婴儿糕干粉中。以后又经过国 内许多单位的研究及应Hj,发现它对萎缩性胃炎和浅表性胃炎有较好的疗效。并对食道上 皮细胞增生有阻抑作用。 维酶素是以新鲜豆渣为原料,经过核黄菌的生物台成而制成 的。所以它除豆渣的原有 的营养成份外,主要有核黄素与黄素辅酶。但对辅酶的含量测定从未见报导,而我们的工 作对辅酶成份进行了分祈,从而解释了服用维酶素 的疗效优于服用纯核黄素药片的原因。 本实验室用离心逆流分配色层层析方法 [ ]对维酶素的提取液进行了定量分析 实验部份 一 . 仪器 。CCPC; Centrifu gaI Co'-'nter-- CUrrent par ti tiea Chroma tegraph, “本课题由中发生物工程研究所提出,两所协作完成。 T一 代表酵母回收温度影响常数,酵母回收通常为 5 。C,因 此T= ,Tx=实际 回 收温度。 Y一 酵母在发酵液中游移和凝聚特征常数。 阿伏加德罗常数 其值6.02 X10 。 d一 一氢离子所带电量,数值上与电子e电量相等 ,符号相反。 其值d=4.8603 x 1 0 ” 系静电堆位电荷。 q——啤酒酵母所带电荷,单位为静电系单位电荷。q由测算得出: : ~ q Q 一 一~ 变化酵母数 酒液 中层最大饱和酵母数一酒液中层最低饱和酵母数 此法 差值在于M、_r、Y值的准确性,置个常数是描写酵母代谢环境和本身特性的 。 不同环境和不同酵母特性,M FY Jbl都是有一定差异。反过来,对环境相同,酵母品种 固 庄,M、T、 值一定,陵公式计算结果是准确的。 参考文献 (略) d0 分 维普资讯 http://www.cqvip.com
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