蜂王浆制品中10-HDA的高效液相色谱法测定

摘 要 将蜂王浆经简单处理后进行高效液相分析，以外标法测得最小检出量 为 0．4ng，添加 回收率为 98．6 ，相对偏差 为 2．4 。分析简便 、快速 、 灵敏 。 关键词 蜂王浆 高效液相色谱法 10一HDA (10一羟基癸烯一2一酸) 1 前言 蜂王浆含大量对人体有益的营养成分 ，对人体有非常神奇的药用价值和保 健作用，市场上蜂王浆制品很受人们欢迎。而判定蜂王浆质量优劣甚至真假的特 征指标便是癸烯酸，测定蜂王浆制品中癸烯酸的含量具有非常重要的意义。本文 将蜂王浆以甲醇溶解后离心去蛋白，进行高效液相色谱分析 ，得出较好的结果， 并考察了不同厂家生产的甲醇对实验的影响。 2 实验部分 2．1 仪器与试剂 LC一6A高效液相色谱仪 (日本岛津公司)，UV一2100紫外分光光度仪，超 速离心机。 10一HDA标准品 (日本商事株式会社)，甲醇 (色谱纯)：天津西华特种试 剂厂，甲醇 (AR)：上海试剂四厂，盐酸 (AR)：济南试剂总厂。 2．2 色谱条件 HYPER ODS2 C18色谱柱 (5．0 m，200mm×5mm，日本岛津公司) 流动相：甲醇：水 ：0．01N盐酸一55：35；10 流速 ：1．5mL／min 柱箱温度：50℃ 检测波长 ：212rim 自动进样量：5 L 2．3 实验步骤 2．3．1 标准贮备液 精确称取 10一HDA标准品 (在硫酸或 P：O 干燥器中减压 干燥 24hr)25mg，放入 25mL容量瓶中，以色谱纯甲醇定容至刻度，制得每毫 升含 】mgl0--HDA标准贮备液。 2．3．2 标准工作液系列 分别准确吸取 0．02，0．1，1．0，4．0，7．0，10．0mL标 准贮备液于 25mL容量瓶中 (每毫升分别含 0．8，4，40，160，280，4OO~glO--HDA)，以流动相定容至刻度。 2．3．3 样品制备 称取蜂王浆 o．1g(准确至 o．OOOlg)，于 lOmL离心管中，加入 5．OmL色谱纯甲醇，超声 波振荡混匀后低温 (4℃)静置 2h，以 3000rpm离心 5min，沉淀蛋白质，取上清液 1mL于 lOmL容量瓶中， 以流动相定容至刻度。0．45 m滤膜过滤 ，自动进样 5 L，于高效液相色谱仪进行分析。 3 结果与讨论 3．1 线性关系和最小检出量 将六种不同质量浓度的标准工作液分别重复 5次进行测定，测得结果以蜂面积平均值 Y与对应的质量 浓度 X (mg／L)进行线性分析，回归方程为 Y===5444X--1325，相关系数 r一0．9998。 按信噪比 (S／N)为 2计算 10一HDA最小检出量为 0．4ng。 结果明，线性关系良好 ，方法灵敏度高。 蜂王浆样品的色谱图见图 1。 标准品线形关系见图 2。 蔓 ■ 维普资讯 http://www.cqvip.com 蒋 恒 近 Fig．1 The chromatogram of royal jelIy sample 3．525 浓度 (ug／m1) 图 2 线性响应关系 Fig．2 Linearity of response 3．2 精密度测试 将 4，40，400~g／mL的标准溶液，分别进样 5 L，重复测定 8次，变异系数 (CV)分别为 1．62 ，1．3O ， 1．87 。 3．3 回收率实验 准确称取一定量 (准确至 0．O01g)蜂王浆于 lOmL离心管中，加入适量 1O—HDA标准液，制备样品。结 果见表 1 表 1 回收率试验结果 Table 1 Results of recovery tests 3．4 讨论 利用紫外检测仪发现 10--HDA标准液在 211．8nm有最大吸收峰，且在 280nm以上基本无吸收。本实验 开始时利用甲醇 (AR)(上海试剂四厂)配制流动相 ，发现 212nm处仪器不能够回零，经紫外检测仪检测， 该试剂在 212nm处有大的吸收峰，掩盖了 10--HDA在该点的吸收峰，改用天津西华特种试剂厂生产的色谱 纯甲醇，该试剂在该点吸收值较低，因此可采用。 田 山东食品科技2003年第8期 维普资讯 http://www.cqvip.com