hplc法测定北苍术中苍术素的含量1[最新]

hplc法测定北苍术中苍术素的含量1[最新] HPLC法测定北苍术中苍术素的含量 摘要:苍术具有燥湿健脾,祛风湿的功效。主治湿阻中焦,风寒湿痹,脚膝肿痛,痿软无力,雀目夜盲。采用高效液相色谱法测定了北苍术挥发油中苍术素含量。该实验采用岛津LC-8A高岛效色谱仪,以甲醇-水溶液为流动相进行梯度洗脱,其中甲醇的流速为0.8mL/m in,水的流速为0.2mL/m in。实验结果如下,北苍术挥发油中苍术素的含量为6.28%。该操作简单,结果准确,重现性好,无需再作处理,无环境污染,可用于北苍术挥发油中苍术素含量的测定,具有很高的实用价值。 关键词: 高效液相色谱法 含量测定 北苍术 苍术素 挥发油 目录 引言 ...................................... 错误～未定义签。 1.实验内容 ................................ 错误～未定义书签。 1.1仪器及试剂 ........................... 错误～未定义书签。 1.2色谱条件的选择 ....................... 错误～未定义书签。 1.3高效液相色谱法(HPLC)的原理 .......................... 2 1.4北苍术中挥发油的提取 .................................. 2 1.5曲线的绘制 ........................................ 2 1.6苍术素的含量测定 ...................................... 3 2.结果 ................................................... 3 2.1标准曲线 .............................................. 3 2.2高效液相色谱图 ........................................ 4 2.3苍术术的含量 .......................................... 5 3.讨论 ..................................................... 5 4.结论 ..................................................... 5 参考文献 ................................................... 6 致 谢 ...................................................... 7 引言:中药苍术为菊科植物茅苍术Atractylodes lan-cea(Thunb. ) DC.或北苍术Atractylodes chinen-sis(DC. ) Koidz.的干燥根茎,始载于《神农本草经》,具有燥湿健脾、祛风湿、明目之功效,临床仍用于湿滞中焦证、风湿痹证及外感风寒挟湿之表证，为中医常用药材之一。 与苍术燥湿健脾功效相关的药理作用为调整胃肠运动功能，抗溃疡(苍术有较强的抗溃疡作用。实验发现，北苍术对幽门结扎型溃疡、幽门结扎-阿司匹林溃疡、应激性溃疡有较强的抑制作用，能显著抑制溃疡、动物的胃液量、总酸度、总消化能力及胃黏膜损害。研究认为，苍术抗溃疡作用机理主要有两个方面:?抑制胃酸分泌:北苍术挥发油中的苍术醇能抑制甾体激素的释放，减轻甾体激素对胃酸分泌的刺激。?增强胃黏膜保护作用:北苍术可使胃黏膜组织血流量增加，从苍术中提取的氨基己糖具有促进胃黏膜修复作用。)，保肝，抑菌等作用。而降血糖，抗缺氧，中枢抑制，抗肿瘤，促进骨骼钙化及对心血管系统的影响等作用，则是其药理作用的现代研究进展。 苍术的主要化学成分如下: 苍术根茎含挥发油，挥发油中主含苍术素(atractylodin)、β-桉油醇(β-eudesmol)、茅术醇(hinesol)、羟基苍术酮(hydroxy-atractylon)等。其余主含β-桉叶醇和苍术呋喃烃，还含β-芹子烯，左旋的α甜没药萜醇(α-bisabolol)，茅术醇，榄香醇，苍术酮，芹子二烯酮等。又含聚乙炔化合物:苍术呋喃烃醇(atractyoldinol)，乙酰基苍术呋喃烃醇(acetylα-tractylodinol)。 苍术素的结构式 : 苍术素的性状为brown powder，分子式为 CHO，分子量为182.2179。 1310 其药理作用为保肝，抗缺氧，降血糖，抗炎抗肿瘤，抗菌抗病毒，抗心律失常，对消化道的作用及对神经系统的作用等。 《中国药典》至今仅有其对照药材(苍术素)的鉴别,尚无其含量测定标准。苍术的主要有效成分为聚乙炔类成分,即主要为苍术素。本文以苍术素为指标,采用高效液相色谱法(HPLC)建立了北苍术中挥发油的有效成分苍术素的含量测定方法,为苍术的质量标准研究提供了依据与方法。 1.实验内容 1.1仪器及试剂 仪器:DW-2型调温电热器(规格5000ml，功率1000w)，回流冷凝管(直型)，挥发油提取器，5000ml圆底烧瓶，变压器，15ml容量瓶，胶头滴管，2ml移液管，试剂瓶，超声波清洗器，一次性针管，微孔滤膜，电子天平，Shimadzu LC-8A 制备型高效液相色谱仪。 试剂: 北苍术，甲醇(CHOH)，乙酸乙酯(Et0Ach)，水，苍术素对照品。3 1.2色谱条件的选择 色谱条件的选择:选择了甲醇-水常见的流动相系统,结果表明在这个系统中色谱峰的峰形较好,基线平稳,故选择甲醇-水系统为流动相。当采用体积分数为50%的甲醇-水溶液等度洗脱时,苍术素出峰太慢，时间太长;当采用体积分数为80%的甲醇-水溶液等度洗脱时,苍术素出峰时间为10min左右，时间较合理，此时色谱峰的峰形较好,基线平稳，因此最终优化的色谱条件如下:进样体积:20μL;流动相:水(A)-甲醇(B)溶液,其中泵A(水)的流速为0.2ml/min、泵B(甲醇)的流速为0.8ml/min。 1.3高效液相色谱法(HPLC)的原理 高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相) 内, 由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时, 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程, 各组分在移动速度上产生较大的差别, 被分离成单个组分依次从柱内流出, 通过检测器时, 样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。 1.4北苍术中挥发油的提取 称取500.8g北苍术，将其放入5000ml圆底烧瓶内，并加水至圆底烧瓶1/2处，然后将其放置于DW-2型调温电热器内，在圆底烧瓶口装上挥发油提取器，接着在提取器口上套上回流冷凝管，接上水，打开电源，开始加热。加热两个小时左右开始沸腾，等待提取器中挥发油的出现，并提取1ml左右的挥发油。 1.5标准曲线的绘制 首先称取苍术素纯品5.0mg，放入1号15ml容量瓶中，接着取10ml乙酸乙酯放入1号瓶内，然后用超声波加速溶解10min，取出待冷却后，加甲醇至刻度线，摇匀。接着用移液管从1号容量瓶中移取12.5ml的溶液置于2号容量瓶 中，再向2号中加甲醇至刻度线，依次类推，完成3号、4号、5号、6号容量瓶溶液的配制，则六瓶溶液浓度依次递减。然后按浓度由小到大的顺序依次进样，即分别精密吸取0.0000172mol/L，0.0000343mol/L，0.0000687mol/L，0.000137mol/L，0.000275mol/L，0.000549mol/L各20μL，每个浓度进样两次，测两次峰面积，最后平均同一浓度下的两次峰面积，结果见表一。接着以平均后的峰面积为纵坐标，苍术素的浓度为横坐标，绘制标准曲线，见图(1)，得方程2方程y=6397683284.6435x+78880.1304，相关系数R=0.9942，R=0.9971。 1.6苍术素的含量测定 将溶于甲醇的挥发油(挥发油为0.0497g)转移至15ml的容量瓶中，加甲醇至刻度线，可再加2ml乙酸乙酯助溶。摇匀，然后用移液管从中取出1ml，移至小试剂瓶中，再加1ml甲醇稀释，摇匀，用微型滤膜过滤。接着取20μL该溶液，注入高效液相色谱仪中，在10min处开始出峰，见图(2)。重复操作一次，最后平均两个峰面积。将该峰面积代入标准曲线方程，最后计算挥发油中苍术素的含量，即北苍术挥发油中苍术素的含量为6.28%。 2.结果 2.1标准曲线 表2-1 序号 1 2 3 4 5 6 坐标 浓度0.000549 0.000275 0.000137 0.0000687 0.0000343 0.0000172 (mol/L) 平均峰面积 3607625.7 1722134.8 1113581.15 579613.1 245391.7 122109.5 (mAU) 苍术素标准曲线 4000000 y = 6397683284.6435 x + 78880.130435000002R = 0.99423000000 2500000 2000000 峰面积1500000 1000000 500000 0 00.00010.00020.00030.00040.00050.0006 浓度 图(1)苍术素标准曲线 2.2 高效液相色谱图 图(2)苍术素样品溶液高效液相色谱图 图(3)苍术素标准品溶液高效液相色谱图 2.3苍术素的含量 北苍术挥发油中苍术素的平均峰面积为2111301.2，将该数据代入方程 -4 ，y=6397683284.6435x+78880.1304，得其中苍术素浓度为3.17710mol/L，再经进一步计算，最终得北苍术挥发油中苍术素的含量为6.28%。 2.讨论 采用本文建立的苍术素含量的测定方法,即运用高效液相色谱法(HPLC)，此方法简单、可靠、易于操作、重现性好、无需再作处理、无环境污染，对于北苍术挥发油中苍术素含量的测定,具有很高的实用价值。实验结果:北苍术挥发油中苍术素的含量为6.28%。 高效液相色谱以经典的液相色谱为基础，是以高压下的液体为流动相的色谱过程。通常所说的柱层析、薄层层析或纸层析就是经典的液相色谱。所用的固定相为大于100um 的吸附剂( 硅胶、氧化铝等)。这种传统的液相色谱所用的固定相粒度大，传质扩散慢，因而柱效低，分离能力差，只能进行简单混合物的分离。而高效液相所用的固定相粒度小(5um-10um)、传质快、柱效高。当然我们在操作高效液相色谱仪时，失误也是有的，例如进样是对的，却不出峰、或者出 峰有偏差。但经过讨论和总结，明白了要确保高效液相色谱仪出峰，就要在注射样品溶液后快速、平稳地从LOAD 状态转换到INJECT 状态,以保证进样量的准确。 苍术素在消化道系统、抗炎、利胆及黄嘌呤氧化酶(XO)阻碍等方面均显示良好的活性,其活性与苍术药材本身的功效接近;另外,该类成分主要存在于苍术中,且含量较高。因此以苍术素为指标,建立其含量测定方法更为合理。 3.结论 本文建立的苍术素含量的测定方法,即运用高效液相色谱法(HPLC)，此方法简单、可靠、易于操作、重现性好、无需再作处理、无环境污染，对于北苍术挥发油中苍术素含量的测定,具有很高的实用价值。建议有关部门将本方法作为苍术质量标准中含量测定的检测方法。 参 考 文 献 [1] 陈炎明, 侴桂新, 王峥涛，等. 反相高效液相色谱法同时测定苍术中的两种聚乙炔类化合物[J] . 色谱 , 2007，1:84-87. 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