荧光分光光度法测定黄芪口服液中黄芪甲甙的研究

荧光分光光度法测定黄芪口服液中黄芪甲甙的研究 荧光分光光度法测定黄芪口服液中黄芪甲 甙的研究 第17卷,第5期 2000年9月 光谱实验室 ChineseJournalofSpectroscopyLaboratory V01.17,NO.5 September,2000 一 荧光分光光度法测定黄芪口服液中 黄芪甲甙的研究? 盘坚 (山东师范大学测试中心济南市 摘要 利用在硫酸条件下香草醛与黄芪甲甙的荧光反应测定黄芪口服液中的黄芪甲甙.黄芪甲甙与香草醛 反应产物的最大激发波长为上.:388nm,最大发射渡长:435nm.黄芪甲甙在0.0—300mg/L范围呈 的线性关系.最低检出限为0.3~g/mL,测定样品的回收率为9672~--103.3o%. 坚 章: 足 10040657A10048138(2000)05058603中圈分类号:.3?文献标识码:文章编号:一 1引言 黄芪甲甙(AstragalosideIV)具有抗炎,降压,镇痛,镇静,升高血浆中CAMP含量和促进小鼠 再生肝DNA的含量],以及促进小鼠淋巴器官反应的免疫功能等一系列生理活性. 目前黄芪甲甙 测定的方法有:比色法;薄层扫描法【;HPLC法.比色法用香草醛显色,空白值较高;薄层 扫描法操作繁琐,准确度较差;但黄芪甲甙只有末段吸收(205nm),灵敏度较低.荧光分析珐常用在 生物分析中,是一种具有灵敏度高,选择性好的方法.但黄芪甲甙的荧光分析测定尚未见报道本 文利用在浓硫酸条件下黄芪甲甙与香草醛反应的产物具有荧光的特性,建立了荧光分光光度硅删 定黄芪甲甙的方法. 2实验部分 2.1主要仪器与试剂 RF一540荧光分光光度计(日本岛津公司). 香草醛(北京芳草医药化工研制公司):使用时现配制成8(w/v)的无水乙醇溶液;旅硫酸 (72)等,所用试剂均为分析纯.黄芪甲甙对照品(中国药品生物制品检定所提供)配制成10 mg/nd的甲醇溶液. 黄芪口服液:(上海福达制药有限公司生产,批号980502,980512,980534)取口服液1.00m1, 加人2.00mL无水乙醇,离心分离沉淀,上清液待用. ?山东省自然科学基金资助课 @联系^.电话l(0531)g962774(办);(0531)2603436(宅) 作者简介:邴建生(19s8一),男.山东省青岛市人.山东师;色大学捌试中心实验师-主要从事质谱,色谱,光度分析方面的研究 收稿日期:2000-06—29 ,D肛D ? 第5期邴建生t荧光分光光度挂测定黄芪口服棱中黄芪甲甙的研究 2.2分析方法 取适量样品(或标准)溶液,置于5raL容量瓶中,加入 0.05mL香草醛溶液,再加人1.OOmL硫酸,摇匀,75C水浴 中反应lOmin,冷却,然后用无水乙醇稀释至刻度,摇匀,在荧 光分光光度计激发波长(k)368nm,发射波长()435nm下 测定荧光强度值() 3结果与讨论 3.1反应产物的激发光谱,发射光谱 在实验条件下,所测定的黄芪甲甙与香草醛反应产物的 激发光谱,发射光谱见图1.由图1可见,黄芪甲甙反应物的 最大激发,最大发射波长分别为k=368nm,=435nm 3.2硫酸用量的选择 按上述分析方法,改变硫酸加人量,测定荧光强度值如 图2所示,结果明:选1.OOmL硫酸为最佳. 3.3香草醛试剂用星的选择 在实验条件下,对香草醛试剂的用量进行选择(图3),结 果表明:选0.05mL的香草醛试剂较为合适. 3.4反应温度的选择 羽4定温度对反应的影响.结果表明:反应温度 选75?较为合适(图4). 3.5加热时间及反应物稳定性实验 在75?水浴下,经实验表明反应时间为1Omin 较为合适.对荧光产物的稳定性进行考察,结果表 明:反应结束后荧光产物的荧光强度值在60rain以 内稳定不变. 意 试剂用量VIraL 图3香草醛试剂用量的影响 型 意 骥 程 图1黄芪甲甙反应产物的 激发,发射光谱 —— 反应产物}——空白. 醯酸用V/mL 图2硫酸用量的影响 图4温度的影响 5B8光谱实验室第17卷 3.6检出限实验 黄芪甲甙浓度选10b~g/mL,对空白溶液到定15次荧光强度,由法得出检出限为 0.3~g/mL 3.7校准曲线表1黄芪口肛液黄芪甲甙含量及回收翠测定结果一3) 分别取不同置黄芪甲甙,在实验条 件下,测定荧光值,绘制校准曲线,线性 回归后,得到方程为:Y一2.175+ 653.4X,r一0.9993.黄芪甲甙在0.0m 30.0mg/L范围内荧光强度与浓度呈线 性关系. 3.8样品含量及回收率测定 按上述分析方法操作,用标准加人法测定黄芪口服液样品中黄芪甲甙的含量及回 收率,结果见 表1 4参考文献 [1]潘飞.冯毓秀.张颖.黄芪研究的概况,国外医药[J].址特药舟册.1995.10(3)1l0— 112. E23俞家华.曹正中.张勤.膜荚黄芪中黄芪甲甙的含量的制定[j]中药通 报.19B6,11(9):38—39 [3]陆一心黄芪甲甙定量方法的研究[J]中直药,1996.18(2);3899. [|]昊乃居.陈鸿英,董锡山等.黄芪愈伤组织中增强免疫活性成分的台量研究[J].中 成药,1989,17(2):?,10. [5]王智华,陆履曼,王海英.补阳还五汤冲剂的质量标准研究[J].中成 药.1996.18(7)l2一l4. [6]李连达,何夏秋.高效薄层扫描法硼定中风脑脉通口服液中黄芪甲甙的含量[J] 中田中药杂志.1991,16(2)9091 [73杨炳友,于砚青.张秀云等.薄层扫描接制定利肝陆糖表片中黄芪甲甙的含量口]. 中医蔫.1995.(2):44--45. StudyontheDeterminationofAstragalosideinOralLiquid bySpectrophotofluorimetry BINGJian—Sheng (nCentre,$handongNormalUni'otrsity.J删290014,P.R.China) Abstract AstrogalosideinoralliquidwasdeterminedbyvaniUinascoloufdevelopingreagent.Theco mplex formedbyreactionofastragalosldewithvaniUlnhasexcitationandemissionmaximaat368a nd 435nm,respeetivdy.Thelinearrangeofdeterminationisfrom0.0to30.0mg/L.Thedetectionl imit is0.3ttg/mL.Rrecoveriesofsamplesarebetween96.72and103.3. KeywordsAstragaloside,MilkVetchRootOralLiquid,Spectrophotofluorimetry.