阿卡波糖片溶出度研究

阿卡波糖片溶出度研究 实验名称: 阿卡波糖片原研溶出试验 批号: 温度: 湿度: 操作人: 复核人: 实验时间:2012.7.16 1.实验目的 阿卡波糖原研在纯水、PH=4.5的磷酸盐缓冲液、PH=6.8的磷酸盐缓冲液、0.1mol/L 盐酸水溶液中的溶出试验。 2.仪器与设备 电子天平 型号:XS105DU 梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司 高效液相色谱仪 型号:1260 安捷伦科技有限公司 3.实验操作 试验方法:释放度测定法、高效液相色谱法 试验方法:HPLC法 介质体积:900ml; 转速:75转/分 温度:37? 色谱条件: 色谱柱:C18柱(Venusil;MP-C18 4.6*250mm;5um;100A); 流动相:磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾600mg，无水磷酸氢二钠279mg，加水100ml 溶解并稀释至1000ml)-乙腈(92:8); 流速:1.5ml/min; 检测波长:210nm; 柱温:40?; 进样量:50μl。 4.实验过程 4.1纯水试验 4.1.1实验过程 供试品溶液:取供试品(批号:BJ05546)6片，待仪器温度达到37?后，将供试 品投入溶出仪并开始计时，分别在3min、6min、9 min、12 min、15 min、30 min时取 样5ml并及时补足介质，滤过，即得。另取6片重复上述实验。 对照品溶液:精密称取阿卡波糖对照品10.16mg，置200ml的量瓶中，加水使溶解， 定容，摇匀，即得。 试验方法:分别精密量取对照品溶液和供试品溶液50μl，注入液相色谱仪，峰 面积，外标法计算，即得。 4.1.2.实验结果统计 (2012.7.17) 对照品面积 6812865 6885189 平均6849027 3min 样品峰面积 溶出度 2151077 28.63% 2220322 29.55% 2186470 29.10% 2590660 34.48% 1688507 22.48% 2789622 37.13% 2168997 28.87% 2099977 27.95% 2151916 28.64% 2190360 29.16% 1627610 21.66% 2751625 36.63% 平均29.5% 6min 4155271 55.31% 3916767 52.14% 3858294 51.36% 4312641 57.40% 2889472 38.46% 4815407 64.10% 3974173 52.90% 4051126 53.92% 3921574 52.20% 3721750 49.54% 3601937 47.94% 4554386 60.62% 53.0% 9min 5856041 77.95% 5678446 75.58% 5606645 74.63% 4176376 55.59% 6522993 86.83% 5851568 77.89% 5787809 77.04% 5768570 76.78% 5368868 71.46% 5779986 76.94% 4977295 66.25% 6058902 80.65% 74.8% 12min 6997703 93.14% 6806144 90.59% 6453122 85.90% 7075873 94.19% 6205954 82.61% 6042923 80.44% 6990662 93.05% 6806804 90.60% 6607363 87.95% 7032335 93.61% 5385952 71.69% 7122070 94.80% 88.2% 15min 7153947 95.22% 7094305 94.43% 7005764 93.25% 7248675 96.49% 6608918 87.97% 7140069 95.04% 7109651 94.63% 7153908 95.22% 7093854 94.42% 7149465 95.16% 6935841 92.32% 6812305 90.68% 93.7% 30min 7289161 97.02% 7093652 94.42% 7178114 95.55% 7232293 96.27% 7164902 95.37% 7153262 95.22% 7108249 94.62% 7096662 94.46% 7121119 94.79% 7224637 96.17% 7230448 96.24% 7254978 96.57% 95.6% 实验名称: 阿卡波糖片原研溶出试验 批号: 温度: 湿度: 操作人: 复核人: 实验时间:2012.7.17 4.2 PH=4.5的磷酸盐缓冲液试验 4.2.1实验过程 PH=4.5的磷酸盐缓冲液:取27.22g磷酸二氢钾，用水溶解并稀释至1000ml，即得。 供试品溶液:取供试品(批号:BJ05546)6片，待仪器温度达到37?后，将供试 品投入溶出仪并开始计时，分别在3min、6min、9 min、12 min、15 min、30 min时取 样5ml并及时补足介质，滤过，即得。另取6片重复上述实验。 对照品溶液:精密称取阿卡波糖对照品10.05mg，置200ml的量瓶中，加PH=4.5 的磷酸盐缓冲液使溶解，定容，摇匀，即得。 试验方法:分别精密量取对照品溶液和供试品溶液50μl，注入液相色谱仪，记录峰 面积，外标法计算，即得。 4.2.2试验结果统计 6340287 6328935 6334611 3min 样品峰面积 溶出度 2442879 34.78% 2069767 29.46% 1824931 25.98% 2134657 30.39% 2147766 30.58% 2085792 29.69% 2322682 33.07% 2189657 31.17% 1809832 25.76% 2106090 29.98% 2139512 30.46% 2093732 29.81% 30.1% 6min 4590275 65.35% 4031355 57.39% 3555465 50.62% 4046996 57.61% 3908109 55.64% 4112927 58.55% 4353157 61.97% 4306131 61.30% 3669753 52.24% 4038697 57.49% 4046206 57.60% 3973371 56.56% 57.7% 9min 6141754 87.43% 5417324 77.12% 4899351 69.75% 5327752 75.85% 5563552 79.20% 5790538 82.43% 5874874 83.63% 5680121 80.86% 4904155 69.81% 5347247 76.12% 5666120 80.66% 5652768 80.47% 78.6% 12min 6614791 94.17% 6451261 91.84% 5962568 84.88% 6602089 93.99% 6583605 93.72% 6534750 93.03% 6679122 95.08% 5980214 85.13% 6621677 94.27% 6541422 93.12% 6607481 94.06% 6702970 95.42% 92.4% 15min 6707492 95.49% 6794908 96.73% 6782850 96.56% 6773549 96.43% 6722637 95.70% 6557862 93.36% 6954721 99.01% 6640348 94.53% 6680641 95.10% 6594879 93.88% 6835586 97.31% 6849173 97.50% 96.0% 30min 6743920 96.01% 6736883 95.91% 6791955 96.69% 6783527 96.57% 7054042 100.42% 6880095 97.94% 6763884 96.29% 6641217 94.54% 7030873 100.09% 6827400 97.19% 6719740 95.66% 6641391 94.55% 96.8% 实验名称: 阿卡波糖片原研溶出试验 批号: 温度: 湿度: 操作人: 复核人: 实验时间:2012.7.18 4.3 PH=6.8的磷酸盐缓冲液试验 4.3.1实验过程 PH=6.8的磷酸盐缓冲液:取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液250ml，加0.2mol/L氢氧化 钠溶液112ml，再加水稀释至1000ml，即得。 供试品溶液:取供试品(批号:BJ05546)6片，待仪器温度达到37?后，将供试 品投入溶出仪并开始计时，分别在3min、6min、9 min、12 min、15 min、30 min时取 样5ml并及时补足介质，滤过，即得。另取6片重复上述实验。 对照品溶液:精密称取阿卡波糖对照品10.06mg，置200ml的量瓶中，加PH=6.8 的磷酸盐缓冲液使溶解，定容，摇匀，即得。 试验方法:分别精密量取对照品溶液和供试品溶液50μl，注入液相色谱仪，记录峰 面积，外标法计算，即得。 4.3.2试验结果统计 6361046 6320497 6340772 3min 样品峰面积 溶出度 2184355 31.10% 1781956 25.37% 1776694 25.30% 2321431 33.05% 2098010 29.87% 2260665 32.19% 1759925 25.06% 1747915 24.89% 1751611 24.94% 2440623 34.75% 2120604 30.20% 2192469 31.22% 29.0% 6min 3969393 56.52% 3572870 50.87% 3532172 50.29% 4085197 58.17% 4039933 57.52% 4176960 59.48% 3838397 54.65% 3752628 53.43% 3505971 49.92% 4040684 57.54% 4059760 57.81% 4052884 57.71% 55.3% 9min 5318037 75.72% 5209434 74.18% 5115389 72.84% 5478138 78.00% 5451059 77.62% 5492805 78.21% 5350777 76.19% 5244214 74.67% 5109215 72.75% 5521967 78.63% 5462747 77.78% 5453796 77.66% 76.2% 12min 6509579 92.69% 6357539 90.53% 6368349 90.68% 6726296 95.78% 6359952 90.56% 6546398 93.21% 6454674 91.91% 6448323 91.82% 6406190 91.22% 6633095 94.45% 6466018 92.07% 6441350 91.72% 92.2% 15min 6619602 94.26% 6730857 95.84% 6725073 95.76% 6629635 94.40% 6860297 97.68% 6739840 95.97% 6623517 94.31% 6615057 94.19% 6693473 95.31% 6581324 93.71% 6716937 95.64% 6725018 95.76% 95.2% 30min 6737706 95.94% 6609732 94.12% 6715803 95.63% 6586009 93.78% 6739128 95.96% 6616180 94.21% 6559723 93.40% 6649117 94.68% 6811219 96.99% 6590444 93.84% 6643022 94.59% 6661296 94.85% 94.8% 4.4 0.1mol/L盐酸水溶液试验 4.4.1实验过程 0.1mol/L盐酸水溶液:取盐酸9ml，加水稀释至1000ml即得。 供试品溶液:取供试品(批号:BJ05546)6片，待仪器温度达到37?后，将供试 9 min、12 min、15 min、30 min时取品投入溶出仪并开始计时，分别在3min、6min、 样5ml并及时补足介质，滤过，即得。另取6片重复上述实验。 对照品溶液:精密称取阿卡波糖对照品10.05mg，置200ml的量瓶中，加0.1mol/L 盐酸水溶液使溶解，定容，摇匀，即得。 试验方法:分别精密量取对照品溶液和供试品溶液50μl，注入液相色谱仪，记录峰 面积，外标法计算，即得。 4.4.2试验结果统计 5320035 5344001 5332018 3min 样品峰面积 溶出度 1857244 31.42% 1791377 30.31% 1735122 29.36% 2112305 35.74% 1973372 33.39% 1986432 33.61% 1804567 30.53% 1788383 30.26% 1733924 29.34% 1936949 32.77% 1955966 33.09% 1943579 32.88% 31.9% 6min 3350214 56.68% 3236064 54.75% 3444632 58.28% 3613821 61.14% 3646739 61.70% 3810001 64.46% 3365342 56.94% 3284542 55.57% 3326011 56.27% 3648406 61.73% 3685795 62.36% 3756873 63.56% 59.5% 9min 4758434 80.51% 4674639 79.09% 4736076 80.13% 4865583 82.32% 4924233 83.32% 5153657 87.20% 4724529 79.94% 4651780 78.71% 4752510 80.41% 4834196 81.79% 4919681 83.24% 5080529 85.96% 81.9% 12min 5531813 93.59% 5448839 92.19% 5697356 96.40% 5611215 94.94% 5632768 95.30% 5888503 99.63% 5507197 93.18% 5473763 92.61% 5655991 95.70% 5631002 95.27% 5625884 95.19% 5842752 98.86% 95.2% 15min 5776153 97.73% 5487418 92.84% 5675786 96.03% 5838770 98.79% 5773158 97.68% 5776154 97.73% 5782858 97.84% 5485595 92.81% 5666969 95.88% 5841067 98.83% 5772459 97.67% 5756760 97.40% 96.8% 30min 5774284 97.70% 5465417 92.47% 5688505 96.25% 5794118 98.03% 5711400 96.63% 5768862 97.61% 5691239 96.29% 5452790 92.26% 5675073 96.02% 5817476 98.43% 5711028 96.63% 5755667 97.38% 96.3% 实验名称: 阿卡波糖片溶出度方法学 批号: 温度: 湿度: 操作人: 复核人: 实验时间:2012.09.17 1.实验目的 验证该方法是否适用于本品溶出度的测定。 2.仪器与设备 电子天平 型号:XS105DU 梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司 高效液相色谱仪 型号:1260 安捷伦科技有限公司 3.实验操作 试验方法:释放度测定法、高效液相色谱法 试验方法:HPLC法 释放介质:纯水; 介质体积:900ml; 取样时间:30分钟。 色谱条件: 色谱柱:C18柱(Venusil;MP-C18 4.6*250mm;5um;100A); 流动相:磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾600mg，无水磷酸氢二钠279mg，加水100ml 溶剂并稀释至1000ml)-乙腈(92:8); 流速:1.5,1.8ml/min; 检测波长:210nm; 柱温:40?; 进样量:50μl。 4.测定法 取本品，照溶出度测定法(中国药典2010年版二部附录? C第二法)，以水为溶剂， 转速为每分钟75转，依法操作，经30分钟时，取溶液适量，滤过，取续滤液作为供试 品溶液，另取阿卡波糖对照品适量，加水溶液并稀释成每1ml含50μg的溶液，作为对 照品溶液，依法测定。按外标法以峰面积计算每片的溶出量，限度为标示量的80%。5.实验过程 5.1专属性 分别取溶出介质(水)、空白辅料溶液、对照品溶液和供试品溶液，分别按照上述色谱条件和测定法进样测定。 空白辅料的配制:精密称取淀粉59.12mg、微晶纤维素29.49mg、硬脂酸镁0.71mg、二氧化硅0.68mg混合均匀，加水900ml，稀释，即得。 对照品溶液的配制:精密称取阿卡波糖对照品5.53mg，置100ml量瓶中，加水溶解，定容至刻度，摇匀，即得。 供试品溶液的配制:取本品1片，加水900ml溶解，摇匀，过滤，取续滤液，即得。 结果:溶出介质和空白辅料溶液在阿卡波糖对照品溶液对应的位置上均没有峰出现。 5.2线性 精密称取阿卡波糖对照品52.15mg，置于100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液;精密量取上述溶液1ml、2ml、2ml、2ml、1ml、12ml分别置于100ml、100ml、50ml、10ml、100ml量瓶中，分别加水至刻度，摇匀，作为供试品溶液，分别照上述色谱条件进样测定，记录峰面积。 溶出度线性试验结果 浓度(μg/ml) 峰面积 5.08 599374 10.16 1240928 20.32 2662029 40.64 5253449 50.79 6576833 60.95 7821190 2线性方程:y = 129704x - 37094 R = 0.9998 以上实验结果明:供试品溶液浓度在5.08μg/ml,60.95μg/ml的范围内，浓度与峰面积的线性关系良好。 5.3回收率 精密称取阿卡波糖原料药24.95mg、40.37mg、50.09mg各三份，分别置1000ml量瓶中，分别依次加入阿卡波糖空白辅料90.01mg、90.13mg、89.98mg，各准确加水900ml，超声15分钟，使充分溶解，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液，照上述色谱条件测定，记录色谱图。外标法计算含量。 对照品溶液的配制:精密称取阿卡波糖对照品13.18mg，置250ml量瓶中，加水溶解，定容至刻度，摇匀，即得。 溶出度回收率实验结果 序号 对照峰面积 样品峰面积 加入量 测得量 回收率 均值 RSD(%) 33001711 24.95 24.94 99.95 3290031 2 25.11 24.86 99.01 3295287 3 24.79 24.90 100.45 5240686 4 39.76 39.60 99.6 6118243 5254345 5 39.83 39.70 99.68 99.61 0.47 5244003 6 39.67 39.63 99.89 6554988 7 50.08 49.53 98.91 6533717 8 49.64 49.37 99.46 6568780 9 49.87 49.64 99.53 以上实验结果表明:在各浓度下的回收率均在98%,102%之间，说明本法准确度高。 5.4溶液稳定性 取上述专属性试验中供试品溶液1份，分别在制备后3小时内进样5次，记录峰面积。 溶出度溶液稳定性试验结果 时间(h) 0 1 2 2.5 3 RSD(%) 峰面积 6083912 6054047 6049277 6053600 6044086 0.26 以上实验结果表明，供试品溶液在3小时内稳定。 5.5滤膜吸附试验 取上述专属性试验中阿卡波糖对照品溶液1份，分别取过滤前后的溶液，照上述色 谱条件进样测定，记录峰面积。 对照品溶液滤膜吸附试验 过滤前 过滤后 6097103 6098130 分别取上述专属性试验中供试品溶液10ml两份，一份置离心管中4500转/min离心10分钟，取上清液作为供试品溶液，另一份过滤后取续滤液作为供试品溶液，分别照上 述色谱条件测定，记录峰面积。 供试品溶液滤膜吸附试验 离心 过滤 6021957 6039899 以上实验结果表明，过滤对供试品溶液的峰面积几乎没有影响。 实验名称: 阿卡波糖片自制溶出试验 批号: 温度: 湿度: 操作人: 复核人: 实验时间:2012.9.27 1.实验目的 阿卡波糖自制在纯水、PH=4.5的磷酸盐缓冲液、PH=6.8的磷酸盐缓冲液、0.1mol/L 盐酸水溶液中的溶出试验 2.仪器与设备 电子天平 型号:XS105DU 梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司 高效液相色谱仪 型号:1260 安捷伦科技有限公司 3.实验操作 试验方法:释放度测定法、高效液相色谱法 试验方法:HPLC法 介质体积:900ml; 转速:75转/分 温度:37? 色谱条件: 色谱柱:C18柱(Venusil;MP-C18 4.6*250mm;5um;100A); 流动相:磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾600mg，无水磷酸氢二钠279mg，加水100ml 溶解并稀释至1000ml)-乙腈(92:8); 流速:1.5ml/min; 检测波长:210nm; 柱温:40?; 进样量:50μl。 4.实验过程 4.1纯水试验 4.1.1实验过程 供试品溶液:取20120921供试品6片，待仪器温度达到37?后，将供试品投入溶 出仪并开始计时，分别在3min、6min、9 min、12 min、15 min、30 min时取样5ml并 及时补足介质，滤过，即得。另取6片重复上述实验。 对照品溶液:精密称取阿卡波糖对照品11.30mg，置200ml的量瓶中，加水使溶解， 定容，摇匀，即得。 试验方法:分别精密量取对照品溶液和供试品溶液50μl，注入液相色谱仪，记录峰 面积，外标法计算，即得。 4.1.2.实验结果统计 (2012.9.28) 7117995 7109434 7113715 3min 样品峰面积 溶出度 1827174 25.97% 1833623 26.06% 1807607 25.69% 1826859 25.97% 1732054 24.62% 1982554 28.18% 1804123 25.64% 1827087 25.97% 1830799 26.02% 1799536 25.58% 1820027 25.87% 1870609 26.59% 26.01% 6min 3435891 48.83% 3488768 49.59% 3519245 50.02% 3548765 50.44% 3489646 49.60% 3708859 52.71% 3473871 49.37% 3488436 49.58% 3501497 49.77% 3490161 49.61% 3619375 51.44% 3604008 51.22% 50.18% 9min 4611024 65.54% 4640962 65.96% 4763371 67.70% 4759475 67.65% 4825595 68.59% 5082031 72.23% 4631173 65.82% 4629691 65.80% 4727324 67.19% 4743456 67.42% 4976252 70.73% 4957462 70.46% 67.92% 12min 5685004 80.80% 5668887 80.57% 5746876 81.68% 5682375 80.76% 6010584 85.43% 5767915 81.98% 5673142 80.63% 5801012 82.45% 5726846 81.40% 6102816 86.74% 6102597 86.74% 6088815 86.54% 82.98% 15min 6345253 90.19% 6719906 95.51% 6336482 90.06% 6395984 90.91% 6321275 89.84% 6369809 90.53% 6347773 90.22% 6267709 89.08% 6518097 92.64% 6426886 91.35% 6534486 92.88% 6395897 90.91% 91.18% 30min 6383600 90.73% 6772652 96.26% 6845919 97.30% 6559439 93.23% 6825552 97.01% 6711707 95.39% 6746581 95.89% 6454979 91.75% 6481086 92.12% 6333251 90.01% 6801297 96.67% 6442502 91.57% 93.99% 取第一次六片溶出数据作为溶出均一性试验，结果统计如下: 溶出均一性试验结果 时间 3 min 6 min 9 min 12 min 15 min 30 min 对照品峰面积 7113715 —— 1827174 3435891 4611024 5685004 6345253 6383600 峰面积 1 溶出度26.0 48.8 65.5 80.8 90.2 90.7 (%) 1833623 3488768 4640962 5668887 6719906 6772652 峰面积 2 溶出度26.1 49.6 66.0 80.6 95.5 96.3 (%) 1807607 3519245 4763371 5746876 6336482 6845919 峰面积 3 溶出度50.0 67.7 81.7 90.1 97.3 25.7 (%) 3548765 4759475 5682375 6395984 6559439 1826859峰面积 4 26.0 50.4 67.6 80.8 90.9 93.2 溶出度 (%) 1732054 3489646 4825595 6010584 6321275 6825552 峰面积 5 溶出度24.6 49.6 68.6 85.4 89.8 97.0 (%) 1982554 3708859 5082031 5767915 6369809 6711707 峰面积 6 溶出度28.2 52.7 72.2 82.0 90.5 95.4 (%) 溶出度均值 26.1 50.2 67.9 81.9 91.2 95.0 RSD(%) 4.4 2.7 3.5 2.2 2.4 2.7 以上试验结果表明，在各时间点的溶出度变异系数均小于5，说明本品工艺稳定，产品均一性好。 实验名称: 阿卡波糖片自制溶出试验 批号: 温度: 湿度: 操作人: 复核人: 实验时间:2012.9.28 4.2 PH=4.5的磷酸盐缓冲液试验 4.2.1实验过程 PH=4.5的磷酸盐缓冲液:取27.22g磷酸二氢钾，用水溶解并稀释至1000ml，即得。 供试品溶液:取20120921供试品6片，待仪器温度达到37?后，将供试品投入溶出仪并开始计时，分别在3min、6min、9 min、12 min、15 min、30 min时取样5ml并及时补足介质，滤过，即得。另取6片重复上述实验。 对照品溶液:精密称取阿卡波糖对照品10.79mg，置200ml的量瓶中，加PH=4.5的磷酸盐缓冲液使溶解，定容，摇匀，即得。 试验方法:分别精密量取对照品溶液和供试品溶液50μl，注入液相色谱仪，记录峰面积，外标法计算，即得。 4.2.2试验结果统计 6407229 6415955 6411592 3min 样品峰面积 溶出度 2340379 35.45% 2215963 33.57% 2433414 36.86% 2032321 30.79% 2262281 34.27% 2200330 33.33% 2357017 35.70% 2261019 34.25% 1989942 30.14% 2323165 35.19% 2176054 32.96% 2246440 34.03% 33.88% 6min 4035211 61.13% 4001655 60.62% 3737032 56.61% 4038597 61.18% 4010234 60.75% 4302641 65.18% 4182117 63.35% 4136815 62.67% 4254984 64.46% 4163040 63.06% 4097020 62.06% 3966641 60.09% 61.76% 9min 5220971 79.09% 5162630 78.20% 4764042 72.17% 5039406 76.34% 5275002 79.91% 5214941 79.00% 5281694 80.01% 5554156 84.14% 4756715 72.06% 5231538 79.25% 5566406 84.32% 5313628 80.49% 78.75% 12min 6166605 93.41% 5842808 88.51% 5989101 90.72% 6041447 91.52% 5717849 86.61% 5985733 90.67% 6080719 92.11% 6021864 91.22% 5997802 90.86% 6124751 92.78% 5861847 88.80% 89.81% 15min 6424843 97.32% 6464219 97.92% 6387980 96.77% 6291385 95.30% 6351864 96.22% 6368364 96.47% 6484526 98.23% 6364669 96.41% 6394204 96.86% 6317488 95.70% 6446067 97.65% 6342750 96.08% 96.74% 30min 6363819 96.40% 6297286 95.39% 6254321 94.74% 6349339 96.18% 6338477 96.02% 6362408 96.38% 6340387 96.05% 6315710 95.67% 6333235 95.94% 6331382 95.91% 6346848 96.14% 6263375 94.88% 95.81% 实验名称: 阿卡波糖片自制溶出试验 批号: 温度: 湿度: 操作人: 复核人: 实验时间:2012.9.29 4.3 PH=6.8的磷酸盐缓冲液试验 4.3.1实验过程 PH=6.8的磷酸盐缓冲液:取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液250ml，加0.2mol/L氢氧化 钠溶液112ml，再加水稀释至1000ml，即得。 供试品溶液:取20120921供试品6片，待仪器温度达到37?后，将供试品投入溶 出仪并开始计时，分别在3min、6min、9 min、12 min、15 min、30 min时取样5ml并 及时补足介质，滤过，即得。另取6片重复上述实验。 对照品溶液:精密称取阿卡波糖对照品10.39mg，置200ml的量瓶中，加PH=6.8 的磷酸盐缓冲液使溶解，定容，摇匀，即得。 试验方法:分别精密量取对照品溶液和供试品溶液50μl，注入液相色谱仪，记录峰 面积，外标法计算，即得。 4.3.2试验结果统计 6579898 6576531 6578215 3min 样品峰面积 溶出度 1784998 25.38% 1831554 26.04% 1858100 26.41% 1880451 26.73% 1898135 26.98% 1829269 26.01% 2154022 30.62% 1866364 26.53% 1974423 28.07% 1886886 26.82% 1910629 27.16% 1870914 26.60% 26.95% 6min 3933354 55.92% 3947348 56.12% 3933239 55.92% 3908386 55.56% 3960261 56.30% 3934995 55.94% 3959968 56.30% 3924076 55.79% 3983321 56.63% 3940794 56.02% 3904802 55.51% 3926275 55.82% 55.98% 9min 5115443 72.72% 4997843 71.05% 5070441 72.08% 5166065 73.44% 5001710 71.10% 4892568 69.55% 5096827 72.46% 4987380 70.90% 5070834 72.09% 4898584 69.64% 5173605 73.55% 5011439 71.24% 71.65% 12min 6391996 90.87% 6337584 90.10% 6304213 89.62% 6271373 89.15% 6227231 88.53% 6442433 91.59% 6399499 90.98% 6335948 90.07% 6312718 89.74% 6311532 89.73% 6247936 88.82% 6471433 92.00% 90.10% 15min 6606204 93.91% 6635632 94.33% 6631573 94.28% 6569332 93.39% 6583775 93.60% 6523099 92.73% 6600985 93.84% 6661661 94.70% 6723108 95.58% 6573923 93.46% 6744578 95.88% 6578381 93.52% 94.10% 30min 6564744 93.33% 6614183 94.03% 6638239 94.37% 6663050 94.72% 6786993 96.48% 6665116 94.75% 6603229 93.87% 6642239 94.43% 6678923 94.95% 6729919 95.67% 6748583 95.94% 6734739 95.74% 94.86% 实验名称: 阿卡波糖片自制溶出试验 批号: 温度: 湿度: 操作人: 复核人: 实验时间:2012.9.30 4.4 0.1mol/L盐酸水溶液试验 4.4.1实验过程 0.1mol/L盐酸水溶液:取盐酸9ml，加水稀释至1000ml即得。 供试品溶液:取20120921供试品6片，待仪器温度达到37?后，将供试品投入溶 出仪并开始计时，分别在3min、6min、9 min、12 min、15 min、30 min时取样5ml并 及时补足介质，滤过，即得。另取6片重复上述实验。 对照品溶液:精密称取阿卡波糖对照品10.23mg，置200ml的量瓶中，加0.1mol/L 盐酸水溶液使溶解，定容，摇匀，即得。 试验方法:分别精密量取对照品溶液和供试品溶液50μl，注入液相色谱仪，记录峰 面积，外标法计算，即得。 4.4.2试验结果统计 4667124 4618176 4642650 3min 样品峰面积 溶出度 1825704 36.20% 1692110 33.55% 1700200 33.71% 1668414 33.08% 1674031 33.19% 1799591 35.68% 1636440 32.44% 1643107 32.58% 1627351 32.26% 1650653 32.73% 1677462 33.26% 1789406 35.48% 33.68% 6min 2727684 54.08% 2867417 56.85% 2895264 57.40% 2944704 58.38% 3095366 61.37% 2977610 59.03% 2729135 54.11% 2856997 56.64% 2875737 57.01% 2939219 58.27% 3092935 61.32% 2987192 59.22% 57.81% 9min 4127563 81.83% 4304061 85.33% 4047952 80.25% 4140644 82.09% 3995675 79.22% 4230536 83.87% 4111090 81.51% 4298674 85.23% 4141799 82.12% 4217785 83.62% 4190748 83.09% 4043611 80.17% 82.36% 12min 4938153 97.90% 4714733 93.47% 4811821 95.40% 4740740 93.99% 4875213 96.66% 4745553 94.09% 4769026 94.55% 5062008 100.36% 4835982 95.88% 4892059 96.99% 4710456 93.39% 4820345 95.57% 95.69% 15min 4901819 97.18% 5095054 101.01% 5025723 99.64% 5059720 100.31% 4999237 99.11% 5039745 99.92% 4960689 98.35% 5081866 100.75% 5108863 101.29% 5261148 104.31% 5018743 99.50% 5051897 100.16% 100.13% 30min 4993149 98.99% 5030806 99.74% 5048858 100.10% 4829012 95.74% 5020615 99.54% 5054563 100.21% 5205091 103.20% 4820702 95.58% 4903157 97.21% 5145462 102.01% 4670066 92.59% 98.76% 实验名称: 阿卡波糖片溶出度方法学 批号: 温度: 湿度: 操作人: 复核人: 实验时间:2012.10.01 1.实验目的 验证阿卡波糖溶出耐用性。 电子天平 型号:XS105DU 梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司 高效液相色谱仪 型号:1260 安捷伦科技有限公司 3.实验操作 试验方法:释放度测定法、高效液相色谱法 试验方法:HPLC法 释放介质:纯水; 介质体积:900ml; 取样时间:30分钟。 色谱条件: 色谱柱:C18柱(Venusil;MP-C18 4.6*250mm;5um;100A); 流动相:磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾600mg，无水磷酸氢二钠279mg，加水100ml 溶剂并稀释至1000ml)-乙腈(92:8); 流速:1.5,1.8ml/min; 检测波长:210nm; 柱温:40?; 进样量:50μl。 4.测定法 取本品，照溶出度测定法(中国药典2010年版二部附录? C第二法)，以水为溶剂，转速为每分钟75转，依法操作，经30分钟时，取溶液适量，滤过，取续滤液作为供试品溶液，另取阿卡波糖对照品适量，加水溶液并稀释成每1ml含50μg的溶液，作为对照品溶液，依法测定。按外标法以峰面积计算每片的溶出量，限度为标示量的80%。 5.耐用性 分别取20120921、20120922、20120923三批供试品，待溶出仪温度达到37?后，将供试品同时投入溶出仪并开始计时，分别在3min、6min、9 min、12 min、15 min、30 min时取样5ml并及时补足介质，滤过，取续滤液作为供试品溶液。照上述色谱条件依法测定，记录色谱图。(20120921溶出数据见“9月27日溶出均一性试验” ) 对照品溶液的配制:精密称取13.27mg阿卡波糖对照品，置250ml量瓶中，加水溶解，定容至刻度，摇匀，即得。 20120922溶出数据 时间 3 min 6 min 9 min 12 min 15 min 30 min 6279138 对照品峰面积 ———— 1782844 3248450 4557582 5376391 5830774 6677762 峰面积 1 溶出度26.4 48.1 67.5 79.7 86.4 98.9 (%) 1958531 3388387 4392679 5373257 5553706 6409948 峰面积 2 溶出度29.0 79.6 50.2 65.1 82.3 95.0 (%) 3409086 4377794 5124578 5773922 6590937 1951184峰面积 3 溶出度28.9 50.5 64.9 75.9 85.5 97.6 (%) 1994724 3291663 4496933 5390103 5554754 6412914 峰面积 4 48.8 66.6 79.9 82.3 95.0 29.6 溶出度 (%) 2051517 3411857 4475164 5155610 5486688 6376567 峰面积 5 溶出度30.4 81.3 94.5 50.5 66.3 76.4 (%) 1942108 3308757 4290710 5139577 5790565 6368771 峰面积 6 63.6 76.1 85.8 28.8 49.0 94.4 溶出度 28.8 49.5 65.7 77.9 83.9 95.9 溶出度均值 20120923 溶出数据 时间 3 min 6 min 9 min 12 min 15 min 30 min 6326545 对照品峰面积 ———— 1746050 2949206 3919088 5175006 5929479 6376415 峰面积 1 溶出度25.7 43.457.676.187.293.8 (%) 1742348 3059169 4144154 5412117 6113661 6357628 峰面积 2 溶出度25.6 45.060.979.689.993.5 (%) 1650334 3114727 4194079 5320982 5979374 6372875 峰面积 3 溶出度24.3 45.8 61.7 78.2 87.9 93.7 (%) 2890262 3991148 5355645 6077580 4623200 1654254峰面积 4 溶出度24.3 42.558.778.789.468.0 (%) 1756684 3048440 4202547 5426930 6102319 4319730 5 峰面积 溶出度25.8 44.861.879.889.763.5 (%) 1724821 3032336 4256421 5121744 6103359 6036127 峰面积 6 溶出度25.4 44.662.675.389.788.8 (%) 25.2 44.3 60.5 78.0 89.0 92.4 溶出度均值 溶出度耐用性试验结果 时间 3 min 6 min 9 min 12 min 15 min 30 min 20120921 26.1 50.2 67.9 81.9 91.2 95.0 20120922 28.8 49.5 65.7 77.9 83.9 95.9 20120923 25.2 44.3 60.5 78 89 92.4 以上实验结果表明，三批供试品溶出曲线重现性好。