中性粒细胞碱性磷酸酶染色液(NAP)

中性粒细胞碱性磷酸酶染色液(NAP) 北京雷根生物技术有限公司 www.leagene.com 中性粒细胞碱性磷酸酶染色液(NAP) 简介: 碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,简称ALP或AKP)为一类磷酸酯酶,广泛分布于哺乳动物组织内,其活性所需最适pH 9.2~9.8。Leagene中性粒细胞碱性磷酸酶染色液(NAP)不是采用金属沉淀法来显示碱性磷酸酶活性,而是采用偶氮偶联法(又称同时偶联法),其原理是在pH9.2～9.8的碱性条件下,细胞内碱性磷酸酶可使AB-BI磷酸盐水解,释放出磷酸与萘酚,后者与偶联重氮盐生成有色产物,定位于细胞质中。该染液丏门用于血液或骨髓细胞涂片的中性粒细胞的碱性磷酸酶染色, 碱性磷酸酶活性部位呈蓝色,位于胞桨,结果较金属盐沉淀法可靠。 组成: 编号 DE0003 DE0003 Storage 名称 4×2ml 4×10ml 试剂(A): NAP固定液 2ml 10ml RT 避光 试剂(B): B1: AS-BI染色液 1ml 5ml -20? 避光 NAP孵育液 B2: FBB染色液 1ml 5ml 4? 避光 临用前,按B1:B2=1:1比例混合,即为NAP孵育液,即配即用。 试剂(C): 核固红染色液 2ml 10ml RT 避光 试剂(D): 甲基绿染色液 2ml 10ml RT 避光 使用说明书 1份 操作步骤(仅供参考): (一)、涂片 1、制备新鲜血液或骨髓细胞涂片,NAP固定液固定,充分水洗。 2、滴加配制好的NAP孵育液孵育,水洗。 3、滴加核固红染色液或甲基绿染色液复染。水洗、晾干、镜检。 (二) 贴壁培养细胞 1、 取6孔板或其他容器培养的细胞,弃液,PBS清洗干净。 2、 加入NAP固定液固定30～60s或4%多聚甲醛固定,PBS清洗。 3、滴加配制好的NAP孵育液,放入湿盒中,避光孵育,PBS清洗。 4、入核固红染色液或甲基绿染色液复染。PBS清洗、镜检。 北京雷根生物技术有限公司 www.leagene.com 染色结果: NAP阳性颗粒 蓝色 细胞核 红色(核固红)或绿色(甲基绿) 结果判断:一般以积分结果,根据100个中性粒细胞阳性颗粒进行0～4+计分。 细胞分值 染色特点 0 无颗粒 1 稍有颗粒 2 中等程度颗粒 3 多数颗粒 4 充满颗粒 临床意义: 1、 类白血病反应积分明显增高,未经治疗的慢性粒细胞白血病积分明显减低。 2、 急性细菌性感染积分明显增高,病毒性感染积分多正常或减低。 3、 再生障碍性贫血积分常增高,PNH、MDS积分常减低。 注意事项: 1、 血液或骨髓细胞涂片应新鲜,薄厚适宜,及时固定,否则会影响酶的活性。 2、 培养细胞染色操作过程中,清洗、染色等步骤都应轻微,以免损伤或丢失细胞。 3、 NAP孵育液易失效或降低阳性强度,即配即用,不宜久置。 4、 复染时,核固红染色液或甲基绿染色液二者取其一。 5、 每次染色时,应有阳性对照片。 6、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。