轮叶党参提取物对酒精性肝损伤的保护作用

轮叶党参提取物对酒精性肝损伤的保护作用 轮叶党参提取物对酒精性肝损伤的保护作 用 基础医学 中国组织工程研究与临床康复舅11卷舅29朋2007—07—22出版 JournalofClinicalRehabilitativeTissueEngineering.Research}y22,2007Vo1.11.No.29 一 轮叶党参提取物对酒精性肝损伤的保护作用? 张亮,韩春姬,李莲姬,陶蕾,朴金梅 Departmentof Prevention.MedicaI College,Yanbian Univers.Yanji 133000.Jilin Province,China ZhangLiang?. Master.Departmentof Prevention.MedicaI College,Yanbian Unwemity,Yanji 133000.Jilin Province.China Co~espondenceto: HanChun~i, Professor, Departmentof Prevention.MedicaI College,YanbJan Univers时.Yanji 133O00.Jilin Province,China hanchunhee@ tomco131 Received:2006-10-21 Accepted:2007-O1-O5 延边大学基础医学 院预防医学教研部. 吉林省延吉市 133000 张亮?,1980年 生,内蒙古兴安盟乌 兰浩特市人,汉族. 2004年毕业于延边 大学医学院,硕士, 主要从事食品毒理 学方面的研究. 通讯作者:韩春姬, 1960年生,吉林省 延吉市人,朝鲜族. 教授.延边大学基础 医学院预防医学教 研部.吉林省延吉市 133000 hanchunh~ t0m.corn 中圈分类号:R575 文献标识码:B 文章编号:1673_8225 (2007)29-05742-03 收稿日期:2006-10-21 修曰日期:2007-01-05 (06-50-10-7620'SHM-Y) 5742 ProtectiveeffectofCodonopsislanceolataextractonalcoholichepaticinjury Abstract Alia:ToinvestigatetheprotectiveeffectandpossiblemechanismsoftheCodonopsisIanceolataonalcoh'olichepaffc injury. ME33-10]I)S:TheexperimentwascarriedoutintheDepartmentofHygiene.MedicalCollegeofYanbianUniversityfr0m MarchtoDecemberin2006.Totally40Kunmingmalemice(providedbyDepartmentofExperimentalAnimal,Yanbian University)wererandomlydividedintofourgroupswith10miceineachgroup:normalgroup,alcoholicgroup, low-dosagegroupandhigh-dosagegroup.Inthemorning,miceinthenormalgroupandalcoholicgroupweretreated withintragastricadministrationofdistilledwater,theseoflow-dosageandhigh-dosagegroupsweregivenintragastric administrationof1and2g/kgCodonopsislanceolataextractrespectively.0.1mL/10kg.Intheafternoon.onlymicein thenormalgroupweretreatedwithintragastricadministrationofdistilledwater,thoseinother3groupsweregiven intragastricadministrationofediblealcohol(450mUL),eachgroupwasgivenintragastricadministrationfor8weeks. AftertheIastadministration.alIthemicefastingfor12hourswerekilledduetocervicaIvertebraIdislocationand10% liverhomogenatewaspreparedusingcoldhomogenatemedium.After8weeks,thecontentso ftriacylglycerol(TG), ma10ndiaIdehyde(MDA)andselenium(Se),theactivityofsuperoxidedismutase(SOD)andglutathioneperoxidase (GSH-Px)weredetected. RESULTS:A?the40micewereinvolvedintheresultanalysis.? ComparedwithnormaIgroup,thecontentofhepaticTG andMDAwassignificantlyincreasedinalcoholicgroup,low-dosagegroupandhigh-dosagegroup(P<0.05).Therewas nosignificantdifferencebetweendosagegroupsandnormalcontrolgroup(P>0.05).? ThehepaticSOD,GSH-Px activityandthecontentofhepaticSewereallobviouslyelevatedinlow-dosagegroupandhigh-dosagegroupcompared withalcoholicgroupfP<0.05). coNcLusIoN:Codonopsislanceolataextractcanprotectalcoholichepaticinjury.andthemechanismmayberelated toanti-oxidativeability,reducingIiverlipidperoxidation.eliminatingfreeradicaIanditsproducts. ZhangL.HanCJ.LiLJ.TaoL.PiaoJM.ProtectiveeffectofCodonopsislanceolataextractonalcoholichepaticinjury.ZhongguoZuzhi GongchengYanjiuyuLinchuangKangfu2007;11(29):5742— 5744(China)(www.zglckfcomlzglckflejournallupfiles/07—29/29k一5742(ps).pdf] 摘要 目的:探讨轮叶党参提取物保护酒精性肝损伤的作用及其机制. 方法:实验于2006—03/12在延边大学基础医学部卫生学教研室完成.选用雄性昆 明种小鼠40只,普通级,由延边大学医学部 实验动物科提供.按体质量随机分为4组,分别为正常对照组,乙醇组,轮叶党参提 取物低剂量组及高剂量组,每组10只.各组 小鼠均以每次0.1mU10g体质量灌胃,正常对照组和乙醇组上午灌胃蒸馏水,轮叶 党参提取物低剂量组和高剂量组分别 灌胃轮叶党参提取物1g,kg和2g/kg,下午除正常对照组蒸馏水灌胃外,其他各组以食用乙醇灌胃,浓度为450mUL,连 续8周.末次灌胃后禁食12h,颈椎脱臼处死小鼠后迅速取出肝脏,用冷匀浆介质制成10%肝匀浆.检测肝组织中三酰甘油,丙 二醛,硒含量及超氧化物歧化酶,谷胱甘肽过氧化物酶活性. 结果:实验共纳入昆明中小鼠40只,全部进入结果分析.?轮叶党参提取物对肝脏三酰甘油,丙二醛含量的影响:乙醇组三 酰甘油,丙二醛含量明显高于正常对照组(P<0.05),轮叶党参提取物低剂量组和高剂量组三酰甘油,丙二醛含量也明显低 于乙醇组(P<0.05),与正常对照组比较,差异不明显(P>0.05).?轮叶党参提取物对肝脏超氧化物歧化酶,谷胱甘肽过 氧化物酶活性及硒含量的影响:低剂量组和高剂量组的超氧化物歧化酶,谷胱甘肽过氧化物酶活性及硒含量均明显高于乙 醇组(P<0.05). 结论:轮叶党参提取物可能通过抗氧化,增强自由基及其代谢产物的清除能力,抑制脂质过氧化反应,从而起到对酒精性肝损 伤的保护作用. 关键词:轮叶党参;肝炎,酒精性;三酰甘油;丙二醛;超氧化物歧化酶 张亮,韩春姬,李莲姬,陶蕾,朴金梅.轮叶党参提取物对酒精性肝损伤的保护作用【J】.中国组织工程研究与临床康复,2007,11(29):5742—5744 [www.zglckf.comlzglckflejoumallupflles/07—29/29k-5742(ps).pdf] 0引言 伤保护作用的机制尚不清楚.本文通过动物实 验探讨轮叶党参对酒精性肝损伤的保护作用 及其机制. 轮叶党参[CodonopsisLanceolata(Sieb.—— etZucc)B.enht.etHook.f】又名羊乳,山胡1和方法 萝I-,是长白山地区珍贵的中药材,含有丰富—— 的多糖,皂苷及多种维生素,微量元素,具有降:随机对照的动物实验. 血脂,抗癌,抗氧化,抗突变及对酒精性肝损伤单位:吉林省延吉市延边大学基础医 学部 的保护作用【1..但轮叶党参对于酒精性肝损卫生学教研室. P.o.Box1200,Shenyang110004kf23385083@sina.cornwww.zglckf.corn 曹kfc23N38?508弱3@sRina.com张亮,等轮叶党参提取物对酒精性肝损伤的保 护作用H删.彻张亮,等轮叶党参提取物埘酒精性肿顶仂刚{果作用 材料:实验于2006—03/12在吉林省延吉 市延边大学基础医学部卫生学教研室完成.选 用昆明种雄性小鼠40只,体质量20~22g,由 延边大学医学院实验动物科提供(许可证号: SCXK(吉)2002—0005).按体质量随机分为4 组:正常对照组,乙醇对照组,轮叶党参提取物低 剂量组和高剂量组,每组10只.每天上午,正常 对照组和乙醇组灌胃蒸馏水,每次0.1mU10g; 轮叶党参提取物低剂量组和高剂量组分别灌 胃轮叶党参提取物1g/kg和2g/kg.下午,正 常对照组灌胃蒸馏水,每次0.1mU10g;其 他各组以食用乙醇灌胃,浓度为450mUL, 连续8周. 设计,实施,评估者:本实验是由韩春姬教 授设计,张亮等全体作者共同实施,对结果的 评估主要由张亮和韩春姬进行. 方法:试剂:轮叶党参提取物.所用轮叶党 参产于长白山地区,洗去新鲜轮叶党参的浮 土,根切成2mm薄片,自然阴干;500mL/L 乙醇提取2次,每次1h,趁热过滤,合并2 次滤液,回收乙醇,浓缩至浓度为1g/mL备 用. 所有小鼠末次灌胃后禁食12h,颈椎脱臼 处死小鼠后迅速取出肝脏,用冷匀浆介质制成 10%肝匀浆.用诊断试剂盒测定肝匀浆中的三 酰甘油,丙二醛含量,谷胱甘肽过氧化物酶,超 氧化物岐化酶活性及肝脏硒含量.丙二醛,超 氧化物岐化酶,谷胱甘肽过氧化物酶试剂盒由 南京建成生物工程研究所提供,三酰甘油试剂 盒购自北京生化生物研究所,蛋白含量采用考 马斯亮兰法,硒含量测定采用2,3一二氨基萘 荧光法. 主要观察指标:肝匀浆三酰甘油,丙二醛 含量,谷胱甘肽过氧化物酶,超氧化物岐化酶 活性及肝脏硒含量. 统计学分析:统计学分析由第一作者采用 SPSS11.5软件完成.计量资料差异比较进行 方差分析,两两比较用LSD方法. 2结果 2.1实验动物数量分析实验共纳入昆明 种小鼠40只,全部进入结果分析,无脱失 值. 2_2轮叶党参提取物对肝脏三酰甘油,丙二 醛含量的影响见1. 沈阳1200邮政信箱110004kf23385083@sinacon1www.zglckfcon1 组别三酰甘油(no)丙二醛(no) 正常对照组0.11?0.04" 乙醇组0.22?0.07 轮叶党参提取物低;}唾量组0.16士0. 轮叶党参提取物高;}唾量组0.14,~-0.05" 1.72?0,54" 2.62?0.67 1.91?0.6 1.8&由.45" - b乙醇组比较P<0.01;.尸'0.05 从表1可以看出乙醇组三酰甘油,丙二醛 含量明显高于正常对照组(P<0.05),轮叶党 参提取物低剂量组和高剂量组三酰甘油,丙二 醛含量也明显低于乙醇组(P<0.05),但与正 常对照组比较,差异不明显(P>0.05). 2_2轮叶党参提取物对肝脏谷胱甘肽过氧化 物酶,超氧化物岐化酶活性及硒含量的影响 见表2 谷脆甘肢过氧硒超氧化韵岐 化物酶(mkat/g)(~g/g)化酶(mkat/g) 正常对照组2.43?1.08" 乙醇组1.06~0.39 轮叶党参提取翻低;}唾量组2.16?1.O 轮叶党参提取物高;}唾量组2.26-~0.95" 1.3&由.1 1.O3士0.19 1.24~-0.1伊 1.2B?0_14l 3.01?0.85- 1.82?059 2.5钠由.76b 2.81?0.69= 与乙醇组比较.P<0.01:P<0.05 从表2可以看出轮叶党参提取物低剂量 组和高剂量组的超氧化物岐化酶,谷胱甘肽过 氧化物酶活性及硒含量均明显高于乙醇组(尸< O.05),提示其抗肝损伤作用可能与增强超氧化 物岐化酶活性,减少硒排泄,进而提高谷胱甘 肽过氧化物酶活性有关. 3讨论 在西方国家,慢性肝病死亡人数占总死亡 人数的五分之一,而酒精性肝病是慢性肝脏疾 病最主要的病因,酗酒是其致病的第一危险因 素【8,.我国近年来酒精性肝病的发病率亦呈 上升趋势,因此,研究酒精性肝病的发病机制, 可以为预防和治疗酒精性肝病提供理论依据 和治疗方向.但目前为止,酒精性肝病的确切 发病机制仍不清楚,氧化损伤可能是酒精性肝 损伤中起重要作用的因素之一【10】. 乙醇进入肝脏后,肝内微粒体中细胞色素 P4502E1(CYP4502E1)被激活,在铁离子的 参与下发生氧化作用.可产生大量活性氧自由 基[11-13],如OH一,02-,H2o2等.氧自由基极易攻 击含不饱和双健的生物膜,发生脂质过氧化反 课题背景:拄西 方国家,慢性肝 病死亡人数占总 死亡人数的五分 之一.而酒精性 肝病是慢性肝脏 疾病最主要的病 因.近年来,我国 患酒精性肝病的 人数也不断上 升.对酒精性肝 病发病机制的研 究.可以为预防 和治疗酒精性肝 病提供理论依 据.但目前,酒精 性肝病的确切发 病机制尚不清 楚,氧化损伤可 能是酒精性肝损 伤中起重要作用 的因素之一.天 然药物在抗酒精 性肝损伤作用方 面有其独特的优 势,因此,国内外 研究者正在寻找 天然药物中的有 效成分. 5743 应甩要点:叉章姥 果提示轮叶党参 提取物能明显降 低乙醇所致的肝 脏三酰甘油聚集 和脂质过氧化物 的堆积,提高抗氧 化酶的活性,具有 预防酒精性肝病 的作用.这一结果 为开发轮叶党参 抗酒精性肝损伤 保健食品提供理 论依据.长白山地 区蕴藏着丰富的 轮叶党参资源,人 工种植面积达到 107平方米.文章 结果对长白山的 轮叶党参资源开 发利用提供了科 学的依据,可利用 于今后的保健食 品开发. 同行评价:文章 通过动物实验说 明轮叶党参提取 物可能通过抗氧 化,增强自由基 及其代谢产物的 清除能力,抑制 脂质过氧化反 应.起到对酒精 性肝损伤的保护 作用.从而探明 了轮叶党参对酒 精性肝损伤的保 护作用机制.在 学术方面有一定 的创新,内容新 颖 5744 ISSN1673.8225CN21-1539/R 张亮,等轮叶党参提取物对酒精性肝损伤的保护作用?m2? mkf23385083@sina,com 应,使膜结构遭到破坏,影响膜的通透性.使离 子转运,生物能的产生和细胞器的功能发生一 系列病理生理改变【?l.氧自由基除直接损伤肝 细胞外,还可以通过增加肝细胞对脂质过氧化 的敏感性,引起肝细胞损伤.氧自由基可以在 肝细胞膜上与CYP2E1结合引起抗体依赖的 细胞毒作用,导致微粒体和肝损伤【佰l.肝脏 CYP4502E1在中央静脉周围肝细胞内呈高 表达,此处氧化应激最活跃和组织氧供不足, 因此是酒精性肝损伤的好发部位. 丙二醛作为氧自由基与生物膜不饱和脂 肪酸发生脂质过氧化反应的代谢产物之一,其 含量变化间接反映了机体的脂质过氧化水平, 测定丙二醛的量可反映细胞损伤的程度【侣l.本 实验中,药物组的丙二醛含量明显低于酒精 组,说明药物可以减少自由基的产生,减轻脂 质过氧化反应.体内细胞正常代谢时也会产生 氧自由基,但并未对身体造成严重后果,原因 是体内同时存在清除氧自由基的酶系统,二者 保持相对平衡.T-AOC,即机体抗氧化防御体 系的整体状态,包括酶促和非酶促两个部分,前 者主要包括超氧化物岐化酶,谷胱甘肽过氧化 物酶,过氧化氢酶,谷胱甘肽转移酶等,后者如 维生素E,维生素C,胡萝卜素仃一.本实验 中药物组小鼠肝匀浆超氧化物岐化酶,谷胱甘 肽过氧化物酶活性明显高于酒精损伤组,说明 轮叶党参乙醇提取液可以通过增强超氧化物 岐化酶,谷胱甘肽过氧化物酶活性,减轻氧自 由基的损伤,减弱脂质过氧化反应. 硒是机体的必需微量元素,它是谷胱甘肽 过氧化物酶的活性成分,其能通过调节谷胱甘 肽过氧化物酶的活性,分解过氧化物和利用 GSH的还原作用,发挥抗氧化作用从而保护 细胞膜的完整性,稳定性及细胞的正常生理功 能【2讲.本实验中小鼠肝脏硒含量测定结果与谷 胱甘肽过氧化物酶活性变化有明显的依从关 系,这与Stephensen等【'的报道一致,并且 药物组间呈现剂量一效应关系,可以推测谷胱 甘肽过氧化物酶活性的增强与轮叶党参乙醇 提取液减少动物体内微量元素硒的丢失有密 切关系. 综上所述,轮叶党参对酒精性肝损伤的 保护作用机制可能为抗氧化,增强自由基及 其代谢产物的清除能力,从而抑制脂质过氧 化反应,减轻自由基的损伤,起保护肝细胞的 作用. 4参考文献 1韩春姬.王东明.俞星,等轮叶党参乙醇提取液预防大鼠脂质代 谢紊乱的机制【J】.吉林大学:医学版,2005,31(4):564-566 2HanC,LiL,PiaoK.Experimentalstudyonanti-oxygenand promotingintelligencedevelopmentofCodonopsis lanceolatainoldmice.ZhongYaoCai1999;22(3):136-138 3韩春姬.李莲姬,朴奎善,等.轮叶党参水提液抗突变作用及其机 理研究【J].预防医学文献信息,1998,4(3):204—205 4刘智.韩春姬,韩颖.等,轮叶党参水提醇沉物对小鼠酒精性肝损 伤的保护作用【J】.环境与职业医学,2O04,21(5):401-402 5LeeKw.JungHJ,ParkHJ.Beta—D—xylopyranosyl一(1一>3)-be- ta—D-glucuronopyranosylechinocysticacidisolatedfromthe rootsofCodonopsislanceolatainducescaspase-dependent apoptosisinhumanacutepromyelocyticleukemiaHL—60 cells,BiolPham1Bull2005;28(5):85859 6张兆强.韩春姬.轮叶党参醇提水溶部分抗自由基作用研究【J】. 济宁医学院.2006.29(2):7—9 7张兆强.韩春姬,朴奎善,等.轮叶党参醇提取物水溶部分对环磷 酰胺诱发微核的拮抗作用【J】环境与职业医学,2005.22(5): 424-425.445 8Mendez-SanchezN.ViliaAR,Chavez-TapiaNC.eta1. 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