茶多酚酒石酸亚铁比色法

茶多酚酒石酸亚铁比色法 多酚类物质的提取与含量测定 一、实验原理 酒石酸亚铁分光光度比色法的原理:过量的酒石酸亚铁与提取液中多酚反应生成稳定的紫褐色络合物，溶液颜色的深浅与溶液中多酚含量成正比。测定总多酚时所用的物则需根据样品中所含多酚的种类而定，比如测定茶叶中茶多酚含量时，儿茶酚能较好地代茶多酚，则以儿茶酚作标准物;而测定藤茶多酚时，则以没食子酸作标准物较合适。 二、实验材料、试剂与仪器 材料:茶叶; 仪器:水浴锅，分光光度计，三角瓶，容量瓶，吸管等; 试剂:(1)酒石酸亚铁溶液:称取1.00g硫酸亚铁(FeSO4?7H2O)和5.00g酒石酸钾钠(C4H4O6NaK?4H2O),混合后加蒸馏水溶解,定容到1000mL; (2)pH 7.5磷酸盐缓冲液:称取60.20g Na2HPO4?12H2O和5.00g NaH2PO4?12H2O， 混合后加蒸馏水溶解,定容到1000mL。 三、操作步骤 (一)标准曲线的制作或茶多酚含量经验值的应用 # 标准曲线的制作参照GB-8313-87《茶—茶多酚测定》。 为简化操作，可用在一定操作条件下“吸光度值为1.00时，供试液中茶多酚的浓度为7.826 mg/mL”这一经验值，直接由待测液的吸光度值计算样品中茶多酚的含量。 (二)样品总多酚的提取 准确称取1.0g磨碎并混匀的茶叶样品于200mL三角瓶中，加入80mL沸水，并在沸水浴中保温浸提30min，然后过滤、洗涤滤渣，将滤液合并、冷却、加蒸馏水定容至100mL。 (二)样品多酚提取液的多酚总量测定 吸取1mL样品多酚提取液于25mL容量瓶中，加入4mL蒸馏水和5mL酒石酸亚铁溶液，摇匀，再用pH 7.5磷酸盐缓冲液稀释至刻度，混匀。同是以蒸馏水代替样品提取液，加入与样品测定同样的试剂作空白，用0.5cm比色皿在540nm波长处测定吸光度。 4.3 测定步骤 4.3.1 试液的制备 按GB 8305-87《茶 水浸出物测定》中3.4.1的规定,制备试液。 4.3.2 测定 准确吸取上述(4.3.1)试液1mL,注入25mL的容量瓶中,加水4mL和酒石酸亚铁溶液 (3.1)5mL,充分混合,再加pH7.5的缓冲液(3.2)至刻度,用10mm比色杯,在波长540nm处,以试剂空白溶液作参比,测定吸光度(A)。 四、计算 7.826—吸光度为1.00时,茶多酚含量的经验值 (mg/mL)。 # 如果制作标准曲线，则样品提取液的测定与标准曲线制作步骤相同，并根据标准曲线和相应，求得样品中茶多酚的含量。 计算方法和公式 茶叶中茶多酚的含量,以干态质量百分率表示,按下式计算: A×1.957×2 L1 茶多酚(,),——————×—————×100 100 L2×M×m 式中: L1--试液的总量,mL; L2--测定时的用液量,mL; M--试样的质量,g; m--试样干物质含量百分率,,; A--试样的吸光度; 1.957--用10mm比色杯,当吸光度等于0.50时,每毫升茶汤中含茶多酚相当于1.957mg。如果符合重复性(5.2)的要求,则取两次测定的算术平均值作为结果。 5.2 重复性 同一样品的两次测定值之差,每100g试样不得超过0.5g。