宽叶缬草治疗局灶性脑缺血的实验研究

宽叶缬草治疗局灶性脑缺血的实验研究 宽叶缬草治疗局灶性脑缺血的实验研究 中国康复?2004年6月?第19卷第3期 宽叶缬草治疗局灶性脑缺血的实验研究* ? l37? 王云甫,严洁,罗国君,孙圣刚,何国厚 (1.郧阳医学院附属太和医院神经科,湖北十堰442000;2.华中科技大学同济医学院附属协 和医院神经科) 【摘要】目的:探讨宽叶缬草对局灶性脑缺血的影响.方法:6O只健康,雄性Wistar大鼠分为正常组,假手术 组,大脑中动脉闭塞组(MCAO组),对照组(NS组),宽叶缬草组(VOL组).制作可复流大脑中动脉闭塞大鼠模型. NS组,VOL组大鼠大脑中动脉闭塞后2h分别以生理盐水及宽叶缬草灌胃.每8h1次;术后第5d进行Nissl, 1]rC染色及脑梗死体积比测定.结果:VOL组的脑梗死体积比显着低于MCAO组;VOL组海马各区及大脑皮层 神经元损伤轻.丢失相对较少.结论:宽叶缬草可以减轻局灶性脑缺血后脑组织病理学损害.具有脑保护作用. 【关键词】脑梗死;神经保护剂;宽叶缬草;大鼠 【中图分类号1R743.31【文献标识码】A【文章编号】1001-2001(2o04)O3一Ol37一O2 F_~feasofValeri~a0哺dl碍VatLaUfeUaMjq缸the11*eatm~t0fQbmlInf,~tloa缸Ratsl,YAN』. LLDGuo-jun.eta1.DepartmentofNeurology?TaiheHospitalofYunyangMedicalCollege, Shiyan442000,China. [Abstract】 0bjective:ToevaluatetheeffeCtofValerianaofficinalisvarlatifoliamiq(V0L)onbraininjuryin experimentalreversiblemiddlecerebralarteryocclusion(MCA0).Methods:EightymaleWistarratswererandom- lydividedinto5groups:normalgroup,shamoperationgroup,MCA0group.MCA()+normalsalinegroup(NS group)andMC 【)+VOLgroup(VOLgroup).MCAOratswereinducedbyintraluminalsutureocclusion.The drugs.suchasVOLornormalsaline.wereadministeredthroughgastrogavageatsecondhafterMCAOinNSgroup andVOLgroup,onceevery8h.Theratsweresacrificedon5thdayafterMCAO.ThenNisslstainingandTTC stal'nirigwereperformed.Thenumericaldensity(ND)ofNisslstainingneuronsandthepercentofinfarctionvolume inhemispherevolumeweremeasuredbyCIAMSimageanalysissystem.Results:Thepercentofinfarctionvolume inhemispherevolumewasmarkedlyreducedinV()Lgroup(31.34士 6.55)ascomparedwithMCAOgroup (48.97士 7.21).TheNDofNisslstainingneuronsinhippocampalandcortexweredecreasedsignificantlyafter MCA().andtheneuronlOSSwasgreatlyalleviatedafterthetreatmentwithVOL.Conclusion:VOLcouldattenuate theneurondamageinducedbyMCA0andplayabrainprotectiveroleagainstischemicinjury. [Keywords]cerebralinfarction;neuroprotection;Valerianaofficinalisvarlatifoliamiq;rat 宽叶缬草(Valerianaofficinalisvarlatifolia miq,VoL)为多年生草本植物,具有镇静,止痛等作 用[1].本文选用大鼠大脑中动脉闭塞(middlecere— bralarteryocclusion,MCAO)动物模型,通过采用 VoL治疗后,检测MCAO的梗死体积及神经元数 目的变化,探讨VoL对局灶性脑缺血的治疗作用. 1材料与方法 1.1材料健康,雄性Wistar大鼠6O只,体重 280"~350g,分为正常组6只,假手术组6只, MCAo组16只,MCAO+生理盐水灌胃组(NS组) 16只及MCAo+VoL灌胃组(VOL组)16只. 【基金项目】湖北省教育厅重点资助项目(99A115) 【收稿日期12003—10—23 【作者简介】王云甫(1971一),男,副主任医师,主要从事神经免 疫的临床与基础研究. 1.2方法?模型制作:除正常组外,其余组大鼠 腹腔注射1戊巴比妥钠(40mg/kg)麻醉成功后, 采用Longa【2线栓法成功制作可复流MCA0大鼠 模型,手术在30min内完成.MCAO后2h将丝 线小心拔出约10mm.假手术组插线时不将尼龙 单丝线送入大脑中动脉开口处,而只到达颅底.? 治疗:MCAO后2h,VOL组以VOL酊剂(1ml酊 剂相当于生药500rag)lml/kg及生理盐水稀释至 3ml灌胃,NS组仅以生理盐水3ml灌胃,均每8h 1次,治疗5d;正常组,假手术组及MCAO组大鼠 均不作任何治疗.?标本采集:氯化三苯四氮唑 (2,3,5triphenyhetrazoliumchloride,TTC)染色 及脑组织取材【3],MCA0后第5d,每组各10只大 鼠以l戊巴比妥钠腹腔麻醉后,迅速断头取脑,均 匀切成2mm厚的脑片(发生蛛网膜下腔出血及成 ? l38? 活时间<3d除外)放人37?的TTC染液中染色 30rain,待用;Nissl染色,各组余下大鼠以4多聚 甲醛灌注固定取脑,石蜡包埋.将已脱蜡入水的石 蜡切片置CVTMT混合Nissl染液中,室温下12h 后,脱水,透明,中性树胶封片,待用. 1.3检测指标OTTC染色及梗死体积比测定: 应用CIAMS图像分析系统对TTC染色进行定量 分析,结合脑组织片的厚度,计算梗死灶占半球体积 的百分比.?Nissl染色结果分析:应用CIAMS图 像处理系统进行图像分析,测出每个视野神经元的 数密度值. 1.4统计学处理数据应用SPSSi0.0软件处理, F及q检验. 2结果 2.1TTC染色及脑梗死体积比本文成功制作 48只可复流MCAO大鼠模型,术后2h进行神经 功能缺损评分,均提示有不同程度的神经功能缺损. 术后第5d,MCAO组,NS组及VOL组各1O只进 行TTC染色,均有大小不同的梗死区呈苍白色;梗 死体积V0L组显着低于MCA0组,而MCAO组 与NS组之间差异无显着性,见表1. 2.2Nissl染色结果比较正常组海马各区神经元 分排列规则,形态完整,经Nissl染色后,尼氏体清 晰可见;MCAO组海马各区(尤其是CA.区)神经 细胞肿胀,排列散乱,尼氏体消失,数密度下降; VOL组神经元肿胀减轻,细胞轮廓相对清晰,海马 各区及大脑皮层神经元的数密度值较MCAO组均 有不同程度的增高,但仍低于正常组;而NS组海马 各区及大脑皮层的数密度值与MCAO组比较差异 无显着性,见表2. 表1各组脑梗死体积的比较?5 与MCAO组比较0P<O.05 表2各组海马区及大脑皮层神经元的数密度比较 ?5.×10,"m 组别nCAlCA3CA4DGCor 正常组1211.2士2.519.3~5.9II.5?120.5?7.612.7?3 假手术组1210.7士3.518.6?5.812.2?3.621.7?7.612.3?毛0 MC)组126.2士Zo~1o.1~5.9cD&2?3.o~13.4?5.7(D6.4?& 组126.7士2.310,6?3.5&2?2.214.4?6.16.7?&5 ?]L组l29.6士Z4&6~5.卿n9?Z7a1&1?&310.9?&30 表示所观察的视野数}与正常组及假手术组比较 0P<O.05;与MCAO组比较0P<O.O1.0P<O.05 ChineseJournalofRehabnitation.June2004.Vo1.19No.3 3讨论 中医认为急性缺血性脑血管病发生为"痰 瘀阻络",对各型脑梗死均强调早期化痰通络的治疗 原则.本文VOL组的脑梗死体积比显着低于 MCAO组,海马各区及大脑皮层神经元的数密度值 较MCAO组均有不同程度的增高;而NS组的脑梗 死体积比,海马各区及大脑皮层神经元的数密度值 均与MCAO组差异无显着性.表明VOL可以减 轻局灶性脑缺血后脑组织病理学损害,减少神经元 的丢失,具有脑保护作用. VOL属败酱科草植物,含有多种有效成分,如 缬草醇,缬草酮,缬草二醇乙酸酯,根及根状茎制成 药片或挥发油有行气,活血,解痉等作用Ll"].近年 来的研究表明VOL具有清除氧自由基,保护血管 内皮细胞,抑制平滑肌细胞增殖等作用[5].薛存宽 等[6在鼠脑微循环衰竭的模型上发现VOL能降低 血管的通透性,抑制红细胞聚集,改善微循环.急性 脑梗死治疗的焦点就是挽救缺血半暗带,半暗带神 经元损伤涉及到兴奋毒性,梗死周围去极化,炎症, 程序性死亡等机制.现在认为参与脑缺血损伤的分 子机制有兴奋性氨基酸的释放,钙离子稳态失衡,自 由基的形成,蛋白酶的激活,基因表达的改变 等[7].VOL对局灶性脑缺血后的神经保护作用可 能与清除氧自由基,保护血管内皮细胞,改善微循环 等有关,其确切的作用机制尚待进一步的研究. 【参考文献】 [1]陈训.宽叶缬草研究[M].贵州:贵州科技出版社. 1997.77—77. E2]LongaEZ,WeinsteinPR.CarlsonS,eta1.Reversible middlecerebralarteryocclusionwithoutcraniectomyin rats[J].Stroke,1989.20(1):84—91. [3]RedersonJB.PittsLH,GermanoSM.eta1.Evaluation of2.3,5-triphenyl—tertrazoliumchlorideasastainforde— tectionandquantificationofexperimentalcerebralirdarc— tioninratsEJ].Stroke,1986,17(6):13O4—1308. [4]郄建坤,屈会化,栾新慧.缬草属植物化学成分及药理 研究概况IJ].中国药学杂志,2002.37(10):729—733. [5]任世兰,于龙顺,裴宁.宽叶缬草对平滑肌和心血管的 药理研究[J].中草药.1982,13(3):23—24. [63薛存宽,蒋彦章.胡富河,等.神农缬草挥发油改善微循 环防治急性肺水肿,抗心肌缺血及减少心肌梗塞范围 的实验研究[J].医学研究通讯,1988,17(2):43—46. [7]廖维靖.脑缺血损伤的病理生理机制——损伤级联反 应[J].国外医学?脑血管疾病分册.1998.6(4);197— 202. [83颜建云.吴伟康.脑缺血损伤的分子机制研究进展 [J].中国病理生理杂志.2003,19(3):423--426.