果糖二磷酸钠中6_磷酸果糖及果糖检测方法的研究

果糖二磷酸钠中6_磷酸果糖及果糖检测方法的研究 Assay of Aceta minophen in Oral Liquid of Tylenol by Double Wavelength - Differential Spectrophotometry Wang Chunying , Li Guoyi , Zhang Lantong , Wang Qiao , Zhang Aihua and Zhou Yuemian ( )Department of Pharmaceutical Analysis , Hebei Medical University , S hijiazhuang , 050017 Abstract : Assay of acetaminophen in oral liquid of Tylenol was reported by double wavelength - dif2 ferential spectrophotometry in this paper . The wavelengths were adopted 232 nm and 268 nm to provide quantititative information and to eliminate the interference of red colour and excipients. The average recov2 ery and relative standard deviation were satisfactory. The results showed no significant difference in compar2 ison with diazotization titration method. Key words : double wavelength - differential spectrophotometry , acetaminophen , assay 果糖二磷酸钠中 62磷酸果糖及果糖检测方法的研究 Ξ3 李平潮芮祖根 刘深广 () 安徽省药品检验所 合肥 230061 62磷酸果糖及果糖 , 分离效果好 , 方法 用纸电泳法分离检测果糖二磷酸钠中有关物质 摘要 () 简便快速 , 检出灵敏度高 。以枸橼酸盐缓冲液 p H 310为电泳缓冲液 , 采用中速薄型定量层析滤 纸作电泳滤纸 , 电压梯度 18 V/ cm , 电泳 80min , 用盐酸间苯二胺乙醇液显色 。以果糖二磷酸钠泳 ( ) 动距离为 1100 , 62磷酸果糖和果糖的相对迁移率 n = 12 分别为 0174 ?0106 、0112 ?0103 。最低 检 μμμ出量分别为果糖二磷酸钠 2g , 62磷酸果糖 5g , 果糖 0125g 。 62磷酸果糖 果糖 关键词 : 纸电泳 电泳滤纸 果糖二磷酸钠 果糖二磷酸钠具有调节糖代谢中若干酶 敏度高 , 可用于果糖二磷酸钠及其制剂的定 活性之功效 , 适 用 于 心 肌 缺 血 的 辅 助 治 疗 。 性与有关物质的限量检查 。 国内目前采用酶技术生产原料 , 制剂有 1 仪器与试药粉针及注射液 。按其工艺 , 成品中可能含有 ( JMDY —W型精 密 稳 流 稳 压 电 泳 仪 江 1 果糖及 62磷 酸 果 糖 等 杂 质 , 在 贮 存 过 程 中 , ) 苏省 无 锡 县 电 化 教 具 厂 ; DC ?型 电 泳 槽 1 也可能分解出这类杂质 。部颁以薄层 () 北京试验设备厂; 402 型中速薄型定量层 2 色谱法控制其限度 , 据文献报道, 薄层色 () 析滤纸 杭州新华造纸厂, 301 型快速薄型 谱法能分离其中的游离磷酸盐 , 据试验 , 不 定性层析滤纸 、312 型中速厚型定性层析滤 能将 62磷酸果糖和果糖等有关物质进行分离 () 纸 杭州新华纸业有限公司, 定量色层分析 和测定 。本文采用纸电泳法 , 能直观地反应 # () () 滤纸 1 薄型杭州双圈滤纸有限公司;上述有关物质的存在 , 分离效果好 , 检出灵 (μ) 微量点样器 5L。 Ξ 安徽中医学院九七届实习生 ( 1100 , 62磷酸果糖相对 二磷酸钠泳动距离为 果糖二磷酸钠原料及粉针 由淮南六药 ( ) ( ) 厂提供; 果糖二磷酸钠对照品 Sigma 公司 ,迁移 率 n = 12 为 0174 ?0106 , 果 糖 为 ) 0112 ?0103 , 图 1 中 “1”直观地显示出果糖 批号 095 H78431 , 含 量 99 %; 62磷 酸 果 糖 (生化试剂 , 上海生化所 , 批号 951120 , 含量二 磷 酸 钠 、62磷 酸 果 糖 及 果 糖 的 存 在 ; 而 ( ) 75 %; 果糖 生 化 试 剂 , 进 口 分 装 , 上 海“2”中 果 糖 量 很 低 , 62磷 酸 果 糖 为 痕 迹 量 ; % “5”中各组分分离良好 , 且与各对照品主斑 伯奥生物科技公司 , 批号 950207 , 含量 99 ) 以上。点比较 , 泳动距离一致 。 枸橼酸 、枸橼酸钠 、盐酸间苯二胺 、乙 醇均为分析纯试剂 。 2 试液的配制 211 供试液 精密称取果糖二磷酸钠及对照 品 各 1100 g , 分别置 10 mL 量瓶中 , 加水适 量 使溶解 , 并稀释至刻度 , 摇匀得供试液 1 、 2 。 精密称取 62磷酸果糖 100 mg , 置 25 mL 图 1 电泳图谱容量瓶中 , 同上法制得供试液 3 。 精密称 取 1,5 . 分别为供试液 1,5 果 糖 25 mg , 置 50 mL 容 量 瓶 312 最低检出量试验 分别配制 62磷酸果糖中 , 同法制得供试液 4 。 精密称取果糖二磷 溶液 系 列 浓 度 : 215 、2 、115 、1 、015 mg/ 酸钠对照品 215 g , 62 mL , 果糖溶液系列浓度 : 0108 、0107 、0106 、 磷酸果糖 100 mg , 果糖 1215 mg , 置 25 mL 容0105 、0104 mg/ mL , 果糖二磷酸钠对照品 溶 量瓶中 , 同 法 制 成 每 1 mL 含 果 糖 二 磷 酸 钠液系 列 浓 度 : 018 、016 、014 、012 mg/ mL , 100 mg , 62磷酸果糖 4 mg , 果糖 015 mg 的混 照 “311”项 操 作 , 显 色 后 自 然 光 下 梯 度 明 合供试液 5 。 ( ) 显 , 置紫 外 灯 365 nm下 检 视 , 更 清 晰 , ( 212 电 泳 缓 冲 液枸 橼 酸 盐 缓 冲 液 p H() 并得各物质最低检出量 1。 ( ) ) 310: 取枸橼酸 CHOH?O39104 g 与枸 6 87 2μ 表 1 不同观察方式 3 种物质最低检出量 (g) ( ) 橼 酸 钠 CHNaO2? HO 4112 g , 加 水6 537 2() 紫外光 365 nm自然光 供试品 4000 mL 使溶解 , 调节 p H 至 310 。最低检出量 痕量 最低检出量痕量 213 显色剂 取盐酸间苯二胺 3162 g , 加 76215 715 62磷酸果糖 5 — %乙醇溶解成 100 mL 即得 。0125 0120 0140 0125 果糖 3 实验方法 2 1 2 3果糖二磷酸钠— 311 电泳分离试验 照纸电泳法试验 , 吸 μ分别点于313 影响最低检出量因素试验 取供试液 1 、2 、3 、4 、5 各 5 L , ( 31311 滤纸的影响 以 4 种型号滤纸进行实 402 型中速薄型定量层析滤纸上 26同一张 ) 验后比较 , 各型号滤纸所显斑点相同 , 其中 cm ×16 cm, 经电泳缓冲液预先润湿并置电 以 402 型中速薄型定量层析滤纸最好 , 所显 泳槽架上 , 调节电压梯度约为 18 V/ cm , 电 斑点清晰 、集中 , 背景无干扰 , 易观察 ; 定 泳 80 min , 取出立即吹干 , 均匀喷以显色剂 , # ) ( 于 105 ?加热 15 min , 果糖二磷酸钠 、62磷酸 量色层分析滤纸 1 薄型所显斑点梯度明 ( ) 显 , 尚可使用 。另 301 型快速薄型定性层析 果糖 、果糖均显黄色斑点 图 1。置紫外灯 () 滤纸和 312 型中速厚型定性层析滤纸显色效 365 nm下检视 , 杂质斑点更清晰 , 以果糖 ( ) 果不好 , 不宜采用 。表 2, 方法灵敏 、准酸钠的含量密切相关 31312 显色条件的影响 经多次实验 , 喷显 确 。 () 表 2 样品中有关物质含量 按干燥品计算考察色剂后 105 ?加热 15 min 即可良好显色 。温 度过 低 或 时 间 过 短 , 斑 点 太 浅 , 不 易 观 察 ; 含量/ % 杂质 品名 厂名批号 62磷酸 果糖二果 温度过高或时间过长 , 斑点颜色无变化但背 斑点数 糖 磷酸钠 果糖 景加深干扰观察 。 9604161 2 2 9417 11 0果糖二磷 A 厂31313 观察方式的影响 经表 1 显示 , 杂质 酸钠粉针 9606231 2 2 9413 011 ( ) 斑点显色后在紫外灯 365 nm下检视较自 9415 011 9610051 2 2 然光下目视灵敏度高 。 960416 9113 2 012 2 果糖二磷 31314 显色剂的影响 显色剂宜新鲜配制 , 酸钠 9015 013 960623 3 3 放置久后显色效果不理想 。喷显色剂应均匀 , 喷雾不匀 , 背景深浅不一致干扰观察 。2 2 9219 12 961005 0 314 样品考察试验 配制 62磷酸果糖系列浓 96100822 9010 013 3 3 B 厂 度 : 4 、3 、2 、1 mg/ mL , 果 糖 系 列 浓 度 : 412 样品考察中发现 , 某些含量偏低的产品 015 、014 、013 、012 、011 mg/ mL , 按 “211 ”中 , 采用本法可分离出第三个杂质斑点 , 相 项下供试液 1 的制备方法分别配制 4 批原料 对迁移率约为 0180 , 其位置介于果糖二磷酸 及 3 批 注 射 用 粉 针 的 供 试 液 。按 “311 ”操 钠主斑点与 62磷酸果糖杂质斑点之间 。因缺 作 , 显色后将各批供试液所显杂质斑点数进 少相应的对照品 , 属何种杂质 , 尚待进一步 行统计 , 并将所显杂质斑点与相应位置的系 研究 。 列浓度斑点比较得大约含量 , 结果见表 2 。 4 讨论 参考文献 411 本法检测果糖二磷酸钠中有关物质 62磷 1 ( ) ( 中华人民共和国卫生部部标准 试行. WS —100 X —) 082—95 酸果糖及果糖是可行的 。电泳后 , 果糖二磷 陈心善等. 薄层色谱法检测果糖二磷酸钠和游离磷酸盐 2 酸钠 、62磷 酸 果 糖 、果 糖 相 互 能 完 全 分 开 , () 的研究. 药物分析杂志 , 1996 , 16 5: 303 ( ) 且斑 点 迁 移 率 相 差 甚 远 > 1 cm, 互 不 干 3 中国药典.1995 . 二部 : 附录 28扰 , 可直观地反映出果糖二磷酸钠中有关物 ( )本文于 1997 年 6 月 5 日收到 质 62磷酸果糖及果糖的存在 , 且和果糖二磷 Study on the Determination of Fructose and Fructose262phosphate in Fructose21 , 62diphosphoric Acid Trisodium Li Pingchao , Rui Zugen and Liu Shenguang ( )Anhui Institute f or Drug Control , Hefei , 230061 Abstract : A new and sensitive paper electrophoresis method for the analysis of the related substances fructose and fructose262phosphate in fructose21 , 62diphosphoric acid trisodium is described. The voltage was adjusted to about 18 V/ cm of the electrophoresis paper and electrophoresis was carried