血红蛋白的提取和分离,一般采用脊椎动物的红细胞作实验材料(共8篇)

血红蛋白的提取和分离,一般采用脊椎动物的红细胞作实验(共8篇) 血红蛋白的提取和分离,一般采用脊椎动 物的红细胞作实验材料(共8篇) 血红蛋白的提取与分离(练习) 2 血红蛋白的提取与分离小练习 命题:田鹏 审题:高二生物组 1、凝胶色谱法是根据( )分离蛋白质的有效。 A(分子的大小 B(相对分子质量的大小C(带电荷的多少D(溶解度 2、用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量大的蛋白质( ) A(路程较长，移动速度较慢B(路程较长，移动速度较快 C(路程较短，移动速度较慢D(路程较短，移动速度较快 3、选用红细胞作为分离蛋白质的实验材料，有何好处( ) A(血红蛋白是有色蛋白 B(红细胞无细胞核 C(红细胞蛋白质含量高 D(红细胞DNA含量高 4. 下列有关提取和分离血红蛋白的程度叙述错误的是( ) A. 样品的处理就是通过一系列操作收集到血红蛋白溶液 B. 通过透析可以去除样品中分子质量较大的杂质，此为样品的粗提取 C. 可通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去，即样品的纯化 D. 可通过SDS,聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血红蛋白的纯度 5、下列是有关血红蛋白提取和分离的相关操作，其中正确的是( ) A(可采集猪血作为实验材料B(用蒸馏水重复洗涤红细胞 C(血红蛋白释放后应低速短时间离心 D(洗脱液接近色谱柱底端时开始收集流出液 6、样品的加入和洗脱的操作不正确的是( ) A(加样前，打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到凝胶面的下面 B(加样后，打开下端出口，使样品渗入凝胶床内 C(等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口 D(用吸管小心的将1ml透析后的样品加到色谱柱的顶端，不要破坏凝胶面 7、在蛋白质的提取和分离中，关于对样品处理过程中，正确的是( ) A(洗涤红细胞的目的是去除血浆中的葡萄糖、无机盐 B(洗涤时离心速度过低，时间过短，白细胞等会沉淀，达不到分离的效果 C(洗涤过程选用0.1,的生理盐水 D(透析的目的是去除样品中相对分子质量较小的杂质 8、以下关于血红蛋白提取和分离的过程及原理叙述，正确 的是( ) A(红细胞洗涤过程中要加入5倍体积的蒸馏水，重复洗涤三次 B(将血红蛋白溶液放在质量分数为0.9,的NaCl溶液透析12小时 C(凝胶装填在色谱柱内要均匀，不能有气泡存在 D(蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较大的移动速度慢 9、已知某样品中存在甲、乙、丙、丁、戊五种蛋白质分子，其分子大小、电荷的性质和数量情况如右图所示，下列有关蛋白质分离的叙述正确的是() A(将样品装入透析袋中透析12h，若分子乙保留在袋内，则分子 丙也保留在袋内 B(若用凝胶色谱柱分离样品中的蛋白质，则分子甲移动速度最快 C(若将样品以2000r/min的速度离心10min，分子戊存在于沉淀 中，则分子甲也存在于沉淀中 D(若用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳分离样品中的蛋白质分子， 则分子甲和分子戊形成的电泳带相距最远 10、下列有关提取和分离血红蛋白的过程的叙述中，不正确的是( ) A(样品的处理就是通过一系列操作收集到血红蛋白溶液 B(通过透析可以去除样品中相对分子质量较大的杂质，此为样品的粗提取 C(可通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去，即样品的纯化 D(可通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血红蛋白的纯度 11、下图表示血红蛋白提取和分离的部分实验装置，请回答下列问题: (1)血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，其在红细胞中的作用体现了蛋白质具有_____ 功能。 (2)甲装置中，B是血红蛋白溶液，则A是_________，乙装置中，C溶液的作用是__ 。 (3)甲装置用于____ ____，目的是____ __ _____。用乙装置分离蛋白质的方法叫________，是根据_____________分离蛋白质的有效方法。 (4)用乙装置分离血红蛋白时，待_______________时，用试管收集流出液，每5mL收集一管，连续收集。先收集到的蛋白质与后收集到的蛋白质的区别是。 (5)还有同学将大肠杆菌破碎并提取得到大肠杆菌蛋白质，一同学利用琼脂糖凝胶电泳技术将得到的蛋白质进行分离，在电泳过程中，影响蛋白质迁移速度的因素包括蛋白质分子的 、 以及分子的形状等。而另一位同学则利用凝胶过滤法分离蛋白质(丙图)，他在操作中加样的正确顺序是 。 篇二:2015-2016学年高中生物 专题5 课题3 血红蛋白的提取 和分离课后习题(含解析)新人教版选修1 2015-2016学年高中生物 专题5 课题3 血红蛋白的提取和分离课后习题 图中( ) 解析:本题考查对凝胶色谱法分离蛋白质原理的理解,相对分子质量较大的蛋白质留在颗粒外面,相对分子质量较小的蛋白质进入颗粒内部;相对分子质量大的蛋白质通过凝胶间隙先被洗脱,相对分子质量小的蛋白质进入凝胶内部而后被洗脱。 答案:B 2.蛋白质提取和分离分为哪几步?( ) A.样品处理、凝胶色谱操作、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 B.样品处理、凝胶色谱操作、纯化 C.样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定 D.样品处理、纯化、粗分离、纯度鉴定 解析:A中凝胶色谱操作及SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳为实验操作过程中的技术。 答案:C 3.在血红蛋白的整个提取过程中,不断用磷酸缓冲液处理的目的是( ) A.防止血红蛋白被氧化 B.血红蛋白是一种两性物质,需要酸中和 C.磷酸缓冲液会加速血红蛋白的提取过程 D.让血红蛋白处在稳定的pH范围内,维持其结构和功能 解析:利用磷酸缓冲液模拟细胞内的pH环境,保证血红蛋白的正常结构和功能,便于分离观察(红色)和研究(活性)。 答案:D +4.将人红细胞置于盛有下列液体的离心管中,10 min后离心,得到沉淀物和上清液,则上清液中K含 量最高的离心管内盛有( ) A.质量分数为10%的氯化钠溶液 B.质量分数为20%的蔗糖溶液 C.质量分数为0.9%的氯化钠溶液 D.蒸馏水 ++解析:红细胞在蒸馏水中渗透吸水涨破,所以细胞中K流出,使上清液中K含量较高。 答案:D 5.凝胶色谱分离法分离蛋白质时,凝胶的种类较多,但其作用都是( ) A.改变蛋白质分子通过凝胶时的路径 B.吸附一部分蛋白质,从而影响蛋白质分子的移动速度 C.将酶或细胞固定在凝胶中 D.与蛋白质分子进行化学反应,从而影响其移动速度 解析:凝胶的种类较多,但每一种凝胶内部都有孔隙。相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时,相对分子质量小的容易进入凝胶内部的通道,路程较长,移动速度较慢;相对分子质量较大的蛋白质无 法进入凝胶内部,只能在凝胶外部移动,路程较短,移动速度较快。相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。 答案:A 6.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法加入SDS的作用是( ) A.增大蛋白质的相对分子质量 B.改变蛋白质的形状 C.掩盖不同种蛋白质间的电荷差别 D.减少蛋白质的相对分子质量 解析:SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳所加的SDS可完全掩盖不同种蛋白质间的电荷差。 答案:C 7.下列关于血红蛋白提取和分离实验中样品处理步骤的描述,正确的是( ) A.红细胞的洗涤:加入蒸馏水,缓慢搅拌,低速短时间离心 B.血红蛋白的释放:加入生理盐水和甲苯,置于磁力搅拌器上充分搅拌 C.分离血红蛋白:将搅拌好的混合液离心、过滤后,用分液漏斗分离 D.透析:将血红蛋白溶液装入透析袋,置于pH为4.0的磷酸缓冲液中透析12 h 解析:对红细胞进行洗涤时,应加入生理盐水,防止细胞破裂;将血红蛋白从红细胞中释放时,需要加入蒸馏水,以便使红细胞破裂释 放出血红蛋白;透析时,应将透析袋置于pH为7.0的磷酸缓冲液中透析12 h。 答案:C 8.在蛋白质的提取和分离中,关于对样品处理过程的分析无误的是( ) A.洗涤红细胞的目的是去除血浆中的葡萄糖、无机盐 B.洗涤时离心速度过小,时间过短,白细胞等会沉淀,达不到分离的效果 C.洗涤过程选用质量分数为0.1%的NaCl溶液 D.透析的目的是去除样品中相对分子质量较小的杂质 解析:洗涤红细胞的目的是去除血浆中杂蛋白;洗涤时离心速度过大,时间过长,白细胞等会沉淀,达不到分离的效果;洗涤过程选用质量分数为0.9%的NaCl溶液。 答案:D 9.下列有关透析的叙述,错误的是( ) A.用于透析的薄膜要具有选择透过性 B.透析膜一般是用硝酸纤维素制成的 C.透析能使小分子自由进出,而将大分子保留在袋内 D.透析可用于更换样品的缓冲液 解析:透析袋一般是用硝酸纤维素(又称玻璃纸)制成的,它没有生物活性,故不具有选择透过性(活的生物膜才具有选择透过性)。透析袋能使小分子自由进出,而将大分子保留在袋内。透析可以去除 样品中相对分子质量较小的杂质,或用于更换样品的缓冲液。 答案:A 10.已知某样品中存在甲、乙、丙、丁、戊五种蛋白质分子,其分子大小、所带电荷的性质和数量情况如下图所示,下列有关该样品中蛋白质的分离的叙述,正确的是( ) A.将样品装入透析袋中透析12 h,若分子乙保留在袋内,则分子丙也保留在袋内 B.若用凝胶色谱柱分离样品中的蛋白质,则分子甲移动速度最快 C.若将样品以2 000 r/min的速度离心10 min,分子戊存在于沉淀中,则分子甲也存在于沉淀中 D.若用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离样品中的蛋白质分子,则分子甲和分子戊形成的电泳带相距最远 解析:分子乙留在透析袋内,说明其相对分子质量比较大,分子丙的相对分子质量比分子乙大,所以分子丙也留在袋内;分子甲的相对分子质量最小,进入凝胶内部通道而移动速度慢;分子戊比分子甲的相对分子质量大,分子甲可能不存在于沉淀中;SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中的样品,其电泳迁移率完全取决于分子的大小,相对分子质量相差越大,形成的电泳带相距越远。 答案:A 11.在血红蛋白分离过程中,如果红色区带歪曲、散乱、变宽,与其有关的是( ) A.血红蛋白释放 B.色谱柱的装填 C.洗脱过程 D.样品的处理 解析:如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话,能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整,随着洗脱液缓慢流出;如果红色区带歪曲、散乱、变宽,说明分离的效果不好,这与凝胶色谱柱的装填有关。 答案:B 12.下列(转载于:www.xiElw.coM 写论文 网:[标签:biaoti])对在凝胶柱上加入样品和洗脱的操作,不正确的是( ) A.加样前要使柱内凝胶面上的缓冲液下降到与凝胶面平齐 B.让吸管管口沿管壁环绕移动,贴壁加样至色谱柱顶端,不要破坏凝胶面 C.打开下端出口,待样品完全进入凝胶层后,直接连接缓冲液洗脱瓶开始洗脱 D.待红色的蛋白质接近色谱柱底端时,每5 mL收集一管,连续收集流出液 解析:打开下端出口,待样品完全进入凝胶层后,关闭下端出口,再小心加入适量的20 mmol/L的磷酸缓冲液,然后连接缓冲液洗脱瓶开始洗脱。 答案:C 13.下图表示血红蛋白提取和分离的部分实验装置,请回答下列问题。 (1)血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分,其在红细胞中的作用体现了蛋白质具有 功能。 (2)甲装置中,B是血红蛋白溶液,则A是 ;乙装置中,C溶液的作用是 。 (3)甲装置用于 ,目的是。用乙装置分离蛋白质的方法叫 ,是根据 分离蛋白质的有效方法。 (4)用乙装置分离血红蛋白时,待 时,用试管收集流出液,每5 mL收集一管,连续收集。 解析:血红蛋白具有运输O2和部分CO2的作用。用缓冲液可以保持与体内的pH一致。甲装置中,B是血红蛋白溶液,则A是磷酸缓冲液;乙装置中,C溶液的作用是洗脱血红蛋白。甲装置用于透析(粗分离),目的是去除样品中相对分子质量较小的杂质。用乙装置分离蛋白质的方法叫凝胶色谱法,是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。 答案:(1)运输 (2)磷酸缓冲液 洗脱血红蛋白 (3)透析(粗分离) 去除样品中相对分子质量较小的杂质 凝胶色谱法 相对分子质量的大小 (4)红色的蛋白质接近色谱柱底端 14.血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分,负责血液中O2或CO2的运输。请根据血红蛋白的提取和分离流程图回答问题。 (1)将实验流程补充完整:A为 ,B为。 (2)洗涤红细胞的目的是去除 ,洗涤次数过少,无法除去 ;离心速 度过高和时间过长会使一同沉淀,达不到分离的效果。洗涤干净的标志 是 。释放血红蛋白的过程中起作用的是 。 (3)在洗脱过程中加入物质的量浓度为20 mmol/L的磷酸缓冲液(pH为7.0)的目的 是。如果红色区带 ,说明色谱柱制作成功。 解析:在蛋白质分离与提取过程中包括样品的处理、粗分离、纯化和纯度鉴定四步,每一步均应用了不同的操作技术。 答案:(1)血红蛋白的释放 样品的加入和洗脱 (2)杂蛋白(血浆蛋白) 血浆蛋白 白细胞和淋巴细胞 离心后的上清液中没有黄色 蒸馏水和甲苯 (3)准确模拟生物体内的生理环境,保持体外的pH和体内一致 均匀一致地移动 15.某生物兴趣小组在“蛋白质的提取和分离”实验中,准备从猪的血液中初步提取血红蛋白, (1)样品处理中红细胞的洗涤要用 反复冲洗、离心。向红细胞悬液中加入一定量的低浓度pH=7.0的缓冲液并充分搅拌,可以破碎红细胞,破碎细胞的原理是。 (2)血红蛋白粗分离阶段,透析的目的是 ,若要尽快达到理想的透析效果,可以 (写出一种方法)。 (3)电泳利用了待分离样品中各种分子的等的差异,而产生不同迁移速度,实现各种分子的分离。 (4)一同学通过血红蛋白醋酸纤维薄膜电泳,观察到正常人和镰刀 型细胞贫血症患者的血红蛋白电泳结果如图所示。由图可知携带者有 种血红蛋白,从分子遗传学的角度作出的解释是。 解析:(1)洗涤红细胞所用的溶液是生理盐水,根据渗透作用原理,将红细胞置于低渗溶液中,红细胞会吸水涨破,释放出血红蛋白。(2)血红蛋白粗分离阶段,透析的目的是除去样品中的小分子杂质。可通过增加缓冲液的量或及时更换缓冲液等方法缩短透析时间,尽快达到理想的透析效果。(3)由于各种分子带电性质以及分子大小、形状等的差异,在电泳过程中会产生不同的迁移速度,从而实现各种分子的分离。(4)根据图示可知,镰刀型细胞贫血症的携带者含有两种血红蛋白,原因是携带者具有(控制血红蛋白的)一对等位基因,可以控制合成两种不同的蛋白质。 答案:(1)生理盐水 渗透原理(当外界溶液浓度低于动物细胞内液浓度时,细胞吸水涨破) (2)除去小分子杂质 增加缓冲液的量或及时更换缓冲液 (3)带电性质以及分子大小、形状 (4)2 携带者具有(控制血红蛋白的)一对等位基因,可以控制合成两种不同的蛋白质 篇三:课题3_血红蛋白的提取和分离导学案及答案 课题3 血红蛋白的提取和分离 【学习目标】1、尝试从血液中提取和分离血红蛋白 2、了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理 【学习重点】凝胶色谱法的原理和方法 【学习难点】样品的预处理;色谱柱填料的处理和色谱柱的装填 1(基础知识 蛋白质的物化理性质:形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等千差万别，由此提取和分离各种蛋白质。 1(1凝胶色谱法(分配色谱法): (1)原理:(图5,13a)分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快;分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢。 (2)凝胶材料:多孔性，多糖类化合物，如葡聚糖、琼脂糖。 (3)分离过程:(图5,13b) 混合物上柱?洗脱?大分子流动快、小分子流动慢?收集大分子?收集小分子 【补充】洗脱:从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。 1(2缓冲溶液 (1)原理:由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成(如H2CO3,NaHCO3，HC,NaC，NaH2PO4/Na2HPO4等)，调节酸和盐的用量，可配制不同pH的缓冲液。 (2)缓冲液作用:抵制外界酸、碱对溶液pH的干扰而保持pH稳定。 1(3凝胶电泳法: (1)原理:不同蛋白质的带电性质、电量、形状和大小不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。 ,思考,阅读教材后，填写下表: (2)分离方法:琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺经胶电泳等。 (3)分离过程:在一定pH下，使蛋白质基团带上正电或负电; 加入带负电荷多的SDS，形成“蛋白质,SDS复合物”，使蛋白质迁移速率仅取决于分子大小。 2(实验设计 2.1蛋白质的提取和分离一般分为哪些基本步骤, 样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定。 【思考】:是否所有种类的蛋白质的提取和分离都是这样的,为什么, 不是。因为蛋白质的来源和性质不同，分离方法差别很大。 2.2选择实验材料 (1)你认为鸟类血液和哺乳动物血液中，最好哪种血液来提取血红蛋白,为什么, 哺乳动物血液。因为该细胞中没有细胞核，血红蛋白含量高。 (2)请阅读教材，认识哺乳动物血液组成及血红蛋白性质。并思考回答下列问题: 血液由 血浆和 各种血细胞 两部分组成。 血细胞中 红细胞细胞数量最多，细胞的含量中，除水以外，最高的化合物是血红蛋白 。 该化合物是由 两条α-肽链 和 两条β-肽链构成的，其中每个亚基中都含有一个能与O2和CO2结合的 亚铁血红素基团。 2.3从红细胞中分离出血红蛋白的过程为:洗涤红细胞、释放血红蛋白、分离血红蛋白、透析。洗涤红细胞的目的是什么, 除去血浆蛋白的杂蛋白，有利于后续步骤的分离纯化。 红细胞的洗涤过程为 血液，柠檬酸钠?低速短时离心?吸出上层血浆?红细胞，5 倍体积生理盐水 ?缓慢搅拌10min?低速短时离心?吸出上清液?反复洗涤直至上清液无黄色 【思考】:加入柠檬酸钠有何目的,为什么要低速、短时离心,为什么要缓慢搅拌, 防止血液凝固;防止白细胞沉淀;防止红细胞破裂释放出血红蛋白。 【思考】:你有什么方法将红细胞中的血红蛋白释放出来, 加入蒸馏水，用玻璃棒快速搅拌一段时间。 【补充】:加入蒸馏水后红细胞液体积与原血液体积要相同。 加入甲苯的目的是溶解细胞膜，有利于血红蛋白的释放和分离。 2.4如何除无机盐离子和小分子有机物质呢, 透析。半透膜的选择透过性，大分子物质不能通过半透膜，离子和小分子能够通过半透膜。 思考:为何使用pH,7的磷酸缓冲液,为什么缓冲液量远多于血红蛋白溶液量, 维持血红蛋白的正常特性。有利于杂质分子充分地向外扩散。 2.5凝胶色谱分离蛋白质包括:制作、装填、和。 (1)根据教材图5,19，说出制作色谱柱需要的材料。 (2)色谱柱的制作过程:准备材料?加工橡皮塞?安装色谱柱 (3)凝胶色谱柱的装填。请阅读教材: 色谱柱的装填过程。 (4调节缓冲液面?加入蛋白质样品?调节缓冲液面?洗脱?收集分装蛋白质 3.操作提示 (1)红细胞的洗涤: 洗涤次数不能过少;低速、短时离心。 (2)凝胶的预处理: 沸水浴法时间短，还能除去微生物和气泡 (3)色谱柱的装填: 装填尽量紧密，降低颗粒间隙;无气泡;洗脱液不能断流。 (4)色谱柱成功标志:红色区带均匀一致地移动。 【实例探究】 例1 利用凝胶色谱法，什么样的蛋白质先洗脱出来() A. 相对分子质量大的 B. 溶解度高的 C. 相对分子量小的 D. 所代电荷多的 例2 蛋白质提取和分离分为哪几步() A. 样品处理、凝胶色谱操作、SDS,聚丙烯酰胺凝胶电泳 B. 样品处理、凝胶色谱操作、纯化 C. 样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定 D. 样品处理、纯化、粗分离、纯度鉴定 例3用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量大的蛋白质() A路程较长，移动速度较慢 B路程较长，移动速度较快 C路程较短，移动速度较慢 D路程较短，移动速度较快 【巩固练习】 1. 凝胶色谱法分离蛋白质的依据是( ) A. 对其他分子的亲和力B. 溶解度 C. 所带电荷多少D. 相对分子质量的大小 2. 选用红细胞作为分离蛋白质的实验材料，有何好处( ) A. 血红蛋白是有色蛋白 B. 红细胞无细胞核 C. 红细胞蛋白质含量高 D. 红细胞DNA含量高 3. 将搅拌好的混合液离心来分离血红蛋白溶液时，第二层是( ) A. 甲苯 B. 血红蛋白水溶液 C. 脂溶性物质的沉淀层 D. 其他杂质的沉淀 4. 下列操作正确的是( ) A. 分离红细胞时采用低速长时间离心 B. 红细胞释放出血红蛋白只需要加入蒸馏水就可 C. 分离血红蛋白溶液是低速短时间离心 D. 透析时要用20mmol/l的磷酸缓冲液，透析12h 5. 下列有关提取和分离血红蛋白的程度叙述错误的是( ) A. 样品的处理就是通过一系列操作收集到血红蛋白溶液 B. 通过透析可以去除样品中分子质量较大的杂质，此为样品的粗提取 C. 可通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去，即样品的纯化 D. 可通过SDS,聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血红蛋白的纯度 6. 凝胶色谱法操作正确的是() A. 将橡皮塞上部用刀切出锅底状的凹穴 B. 将橡皮塞下部切出凹穴 C. 插入的玻璃管的上部要超出橡皮塞的凹穴底面 D. 将尼龙网剪成与橡皮塞下部一样大小的圆片 7.早在上世纪六十年代，在美国的黄石国家森林公园发现了一种嗜热细菌，从这种细菌中分离提取了一种酶，称为TaqDNA聚合酶。实验得知PCR反应变性时温度为950C，经50个循环后TaqDNA聚合酶仍有65%的活性。 (1在此基础上，培养该菌时需先将培养基____。 (2)若将培养细菌的培养基用于植物组织培养，还应加入 ________ 。 (3)TaqDNA聚合酶可用于PCR，原因是该酶有，因此在PCR扩增时可以加入。 (4)请将下列实验流程图补充完整: (5)凝胶色谱法和凝胶电泳法是分离蛋白质的两种常用方法，据此回答问题。 ?凝胶色谱法分离蛋白质的原理是根据不同大小的蛋白质分子在凝胶柱中的 不同而实现分离的: ?使用电泳法分离蛋白质(是利用了待分离样品中各种分子的 差异，以及分子本身的、形状的不同。 答案 (1) 氮源 无机盐pH调至中性或微碱性 (2) 植物激素 (3)热稳定性 一次性 (4) 血红蛋白的释放 凝胶色谱柱的填充 (5)?移动速率?带电性质 大小 篇四:选修1导学提纲(七)课题3 血红蛋白的提取和分离 高二生物选修1导学提纲(七) 专题5 DNA和蛋白质技术 课题3 血红蛋白的提取和分离 执笔人:侍东升 一、课题目标 本课题通过尝试对血液中血红蛋白的提取和分离，使学生能够体验从复杂体系中提取生物大分子的基本过程和方法，并了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理，为今后学习运用这些技术打下基础。 二、课题重点与难点 课题重点:凝胶色谱法的原理和方法。 课题难点:样品的预处理;色谱柱填料的处理和色谱柱的装填。 三、学习过程 (一)基础知识 第一课件网 免费教学资源下载基地 四、课堂练习 1(凝胶色谱法可以有效的分离蛋白质的根据是( ) A(分子的大小B(相对分子质量的大小C(带电荷的多少 D(溶解度 2(利用凝胶色谱法分离蛋白质，最先洗脱的蛋白质特点是( )A(相对分子质量大的 B(溶解度高的C(相对分子质量小的 D(所带电荷多的 3. 凝胶色谱法中所用的凝胶化学本质大多是( ) A. 糖类化合物B. 脂质 C. 蛋白质D. 核酸 4(相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的进行过程可表示为图中哪一个 ( B ) 5(用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量大的蛋白质 ( ) A(路程较长，移动速度较慢B(路程较长，移动速度较快 C(路程较短，移动速度较慢D(路程较短，移动速度较快 6(能进入凝胶内部通道的蛋白质是指 ( ) A(相对分子质量大的 B(吸附性高的C(相对分子质量小的D(溶解度低的 7(凝胶色谱法中移动得快的是 ( ) A(相对分子质量大的 B(溶解度高的 C(相对分子质量小的 D(溶解度低的 8(缓冲液的作用是在一定范围内，抵制外界的影响来维持下列哪一项状态基本不变的 ( ) A(温度B(pH C(渗透 压 D(氧气浓度 9(初步分离血红蛋白的实验中用到的缓冲溶液为 ( ) A(H2 CO3一NaHCO3缓冲液B(NH4OH—NH4Cl缓冲液 C(CH3 COOH—CH3 COONa缓冲液D(H3PO4缓冲液 10(蛋白质提取和分离分为哪几步 ( ) A(样品处理、凝胶色谱操作、SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳 B(样品处理、凝胶色谱操作、纯化C(样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定 D(样品处理、纯化、粗分离、纯度鉴定 11. 血红蛋白因含有什么物质而呈红色 ( ) A. O2 B. CO C. CO2 D.血红素 12. 将搅拌好的混合液离心来分离血红蛋白溶液时，第二层是( ) A. 甲苯 B. 血红蛋白水溶液C. 脂溶性物质的沉淀层 D. 其他杂质的沉淀 13(分离血红蛋白溶液时，离心后试管中的溶液分四层，血红蛋白位于 ( ) A(一B(二 C(三 D(四 14. 下列操作正确的是( ) A. 分离红细胞时采用低速长时间离心 B. 红细胞释放出血红蛋白只需要加入蒸馏水就可 C. 分离血红蛋白溶液是低速短时间离心D. 透析时要用20mmol/l的磷酸缓冲液，透析12h 15(使用十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的迁移速度完全取决于 ( ) A(电荷的多少 B(分子的大小 C(肽链的多少 D(分子形状的差异 16(洗涤红细胞的目的是 ( ) A(去除血清 B(去除杂蛋白 C(除去血小板 D(除去水 17(洗涤红细胞时，分离所用的方法为 ( ) A(低速长时间离心 B(低速短时间离心C(高速长时间离心D(高速短时间离心 18(SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳法中加入SDS的作用是 () A(增大蛋白质的相对分子质量 B(改变蛋白质的形状 C(掩盖不同种蛋白质问的电荷差别D(减少蛋白质的相对分子质量 19(制作凝胶色谱柱时，橡皮塞顶部凹穴内插入的移液管的部位及长度是 () A(移液管头部5 cm B(移液管尾部5 cm C(移液管头部3 cm D(移液管尾部3 cm 20(下列有关凝胶色谱法中样品的加入和洗脱的叙述中，正确的是 ( ) A(先加入1 mL透析后的样品B(加样前要使缓冲液缓慢下降，全部流出 C(如果红色区带均匀一致地移动，说明色谱柱制作成功D(洗脱时可以用缓冲液也可以用清水 21(在下列哪一种条件下生物大分子具有的可解离的基团会带上正电或负电 ( ) A(一定温度 B(一定pHC(一定压强 D(一定容器 22(电泳时带电粒子在电场的作用下，移动所向的电极的方向与其所带电荷是 ( )A(桕同 B(相反 C(相对 D(相向 23(装填凝胶色谱柱时，下端的尼龙管应( ) A(先打开后关闭 B(关闭 C(先关闭后打开 D(打开 24(D 亚铁血红素基团可携带 ( ) A(一分子CO B(一分子NO C(一分子O2或CO2D(一分子NO2 25(人体正常的血红蛋白中应含有Fe2+，若误食亚硝酸盐，则导致血红蛋白中的Fe2+。转化为 Fe3+，产生高价铁血红蛋白而中毒。服用维生素C可解除亚硝酸盐中毒。在维生素C参与的 反应中 ( ) A(亚硝酸盐是还原剂 B(维生素C是氧化剂C(亚硝酸盐被氧化 D(维生素C将Fe3+还原为Fe2+ 26(加有少量柠檬酸钠(防止血液凝固)的猪血分装于标号?、?、?的试管中，随后依次加入 质量分数为0(3,、0(9,和1(5,的氯化钠溶液稀释，30 min后离心。下列叙述中，正 确的是 ( ) A(?和?试管的上清液中有血红蛋白，沉淀中都有红细胞 第一课件网 免费教学资源下载基地 B(?和?试管的上清液呈淡黄色，沉淀中均有皱缩的红细胞 C(?和?试管的沉淀中分别有红细胞的碎片和皱缩的红细胞 D(?和?试管的上清液是血清 27(在血红蛋白的整个提取过程中，不断用磷酸缓冲液处理的目的是 ( ) A(磷酸缓冲液会加速血红蛋白的提取过程 B(血红蛋白是一种两性物质，需要酸中和 C(防止血红蛋白被02氧化 D(让血 红蛋白处在稳定的pH范围内，维持其结构和功能 28(在盛有红褐色的Fe(OH)3，胶体的U形管的两个管口，各插一个电极，通直流电后，发现 阴极附近的颜色逐渐加深，这说明 ( ) A(Fe(OH)3胶体粒子带正电荷，向阴极移动 B(Fe(OH)3胶体粒子带负电荷，向阳极移动 C(Fe(OH)3胶体粒子带正电荷，向阳极移动 D(Fe(OH)3胶体粒子带负电荷，向阴极移动 29(为防止血液凝固，在采血容器中要预先加入抗凝血剂 ( ) A(NaCI B(甲苯 C(蒸馏水 D(柠檬酸钠 30. 下列有关提取和分离血红蛋白的程度叙述错误的是( ) A. 样品的处理就是通过一系列操作收集到血红蛋白溶液 B. 通过透析可以去除样品中分子质量较大的杂质，此为样品的粗提取 C. 可通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去，即样品的纯化 D. 可通过SDS,聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血红蛋白的纯度 31. 凝胶色谱法操作正确的是() A. 将橡皮塞上部用刀切出锅底状的凹穴B. 将橡皮塞下部切出凹穴 C. 插入的玻璃管的上部要超出橡皮塞的凹穴底面D. 将尼龙网剪成与橡皮塞下部一样大小的圆片 32. 样品的加入和洗脱的操作不正确的是( ) A. 加样前，打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到凝胶面的下面 B. 加样后，打开下端出口，使样品渗入凝胶床内 C. 等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口 D. 用吸管小心的将1ml透析后的样品加到色谱柱的顶端，不要破坏凝胶面 33. 下列说法不正确的是() A. 血红蛋白在释放时，加蒸馏水到原血液的体积，再加40,体积的甲苯，充分搅拌 B. 血红蛋白溶液离心后分为4层，第1层为白色薄层固体 C. 血红蛋白溶液离心后分为4层，第4层为暗红色沉淀物 D. 血红蛋白溶液离心后分为4层，第3层为红色透明液体，这是血红蛋白的水溶液 二、多选题 34(选用红细胞作分离蛋白质的实验材料，下列是其优点的是 ( ) A(血红蛋白是有色蛋白B(红细胞无细胞核 C(红细胞蛋白质含量高D(红细胞DNA含量高 35(下面关于对血红蛋白提取和分离的样品的处理措施中，正确的是 ( ) A(采集血样后要高速短时问离心获得血细胞 B(洗涤三次后如上清液仍有黄色，可增加洗涤次数，否则血浆蛋白无法除净。 C(在蒸馏水和甲苯的作用下，细胞破裂，释放出血红蛋白 D(释放血红蛋白后再经过离心，就可以使血红蛋白和其他杂质分离开来 36(凝胶色谱柱取长为40 cm，内径为1(6 cm，有关说法中，正确的是 ( ) ,,, A(一般凝胶色谱柱直径的大小不影响分离的效果 B(凝胶色谱柱过高超过1 m，不影响分离的效果 C(凝胶色谱柱过矮，则影响混合物的分离度 D(凝胶色谱柱直径过大会耗用过多洗脱液，样品的稀释度过大 37(下列有关提取和分离血红蛋白的过程的叙述中，正确的是 ( ) ,,, A(样品的处理就是通过一系列操作收集到血红蛋白溶液 B(通过透析可以去除样品中相对分子质量较大的杂质，此为样品的粗提取 C(可通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去，即样品的纯化 D(可通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定 血红蛋白的纯度 38(雄性激素是小分子脂溶性物质，很容易穿过细胞膜。睾丸每天分泌的雄性激素约7 mg， 其中约2,呈游离状态，其余在血中与血浆蛋白呈可逆性结合。下列有关雄性激素与血 浆蛋白结合后的作用的叙述中，正确的是 ( )ABC A(使其不容易通过肾脏排出B(使其不容易进入细胞 C(使其有效浓度处于特定水平 D(抑制雄性激素发挥作用 39. 分离血红蛋白溶液时，将混合液离心后可看到试管中的液体分为4层:第一层为______，第二层为______固体，是______的沉淀层，第三层是______液体，是______的水溶液，第四层是其他杂质的______沉淀物。 无色透明;甲苯层;白色薄层;脂溶性物质;红色透明;血红蛋白;暗红色 40. 红细胞含有大量的血红蛋白，红细胞的机能主要是由血红蛋白完成，血红蛋白的主要功能是携带氧气或二氧化碳，我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验，来提取和分离 血红蛋白，请回答下列有关问题: (1)血红蛋白提取和分离的程度可分为四步:______、______、______和______。 (2)实验前取新鲜的血液，要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠，取血回来，马上进行离心，收集血红蛋白溶液。 ?加入柠檬酸钠的目的是__________________。 ?以上所述的过程即是样品处理，它包括______、______、收集血红蛋白溶液。 (3)收集的血红蛋白溶液在透析袋中可以经过透析，这就是样品的粗分离。?透析的目的是 __________________。 ?透析的原理是______________________________。 (4)然后通过凝胶色谱法将样品进一步纯化，最后经SDS,聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。?样品纯化的目的是 ______________________________。 ?血红蛋白有什么特点,______________________________。这一特点对进行蛋白质的分离有什么意义, ______________________________________________________。 参考答案:13. (1)样品处理;粗分离;纯化;纯度鉴定 (2)?防止血液凝固?红细胞的洗涤，血红蛋白的释放(3)?去除分子质量较小的杂质 ?透析袋能使小分子自由进出，而大分子则保留在袋内 (4)?通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去 ?血红蛋白呈现红色，在凝胶色谱分离时，可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液; 这使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作。 第一课件网 免费教学资源下载基地 篇五:人教版试题试卷课题3 血红蛋白的提取和分离 课题3 血红蛋白的提取和分离 1.凝胶色谱法中所用的凝胶化学本质大多是 A. 糖类化合物B. 脂质 C. 蛋白质D. 核酸 2(相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的进行过程可表示为图中哪一个 3(能进入凝胶内部通道的蛋白质是指 A(相对分子质量大的 B(吸附性高的C(相对分子质量小的D(溶解度低的 4(凝胶色谱法中移动得快的是 A(相对分子质量大的 B(溶解度高的 C(相对分子质量小的 D(溶解度低的 5(缓冲液的作用是在一定范围内，抵制外界的影响来维持下列哪一项状态基本不变的 A(温度B(pH C(渗透压 D(氧气浓度 6(初步分离血红蛋白的实验中用到的缓冲溶液为 A(H2 CO3一NaHCO3缓冲液B(NH4OH—NH4Cl缓冲液 C(CH3 COOH—CH3 COONa缓冲液D(H3PO4缓冲液 7.血红蛋白因含有什么物质而呈红色 A. O2 B. CO C. CO2 D.血红素 8.下列操作正确的是 A. 分离红细胞时采用低速长时间离心 B. 红细胞释放出血红蛋白只需要加入蒸馏水就可 C. 分离血红蛋白溶液是低速短时间离心D. 透析时要用20mmol/l的磷酸缓冲液，透析12h 9(使用十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的迁移速度完全取决于 A(电荷的多少 B(分子的大小 C(肽链的多少 D(分子形状的差异 10(洗涤红细胞的目的是 A(去除血清 B(去除杂蛋白 C(除去血小板 D(除去水 11(SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳法中加入SDS的作用是 A(增大蛋白质的相对分子质量 B(改变蛋白质的形状 C(掩盖不同种蛋白质问的电荷差别D(减少蛋白质的相对分子质量 12(制作凝胶色谱柱时，橡皮塞顶部凹穴内插入的移液管的部位及长度是 A(移液管头部5 cm B(移液管尾部5 cm C(移液管头部3 cm D(移液管尾部3 cm 13(下列有关凝胶色谱法中样品的加入和洗脱的叙述中，正确 的是 A(先加入1 mL透析后的样品B(加样前要使缓冲液缓慢下降，全部流出 C(如果红色区带均匀一致地移动，说明色谱柱制作成功 D(洗脱时可以用缓冲液也可以用清水 14(在下列哪一种条件下生物大分子具有的可解离的基团会带上正电或负电 A(一定温度 B(一定pHC(一定压强 D(一定容器 15(电泳时带电粒子在电场的作用下，移动所向的电极的方向与其所带电荷是 A(桕同 B(相反 C(相对 D(相向 16(装填凝胶色谱柱时，下端的尼龙管应 A(先打开后关闭 B(关闭 C(先关闭后打开 D(打开 17(亚铁血红素基团可携带 A(一分子CO B(一分子NO C(一分子O2或CO2D(一分子NO2 18(人体正常的血红蛋白中应含有Fe2+，若误食亚硝酸盐，则导致血红蛋白中的Fe2+转化为Fe3+，产生高价铁血红蛋白而中毒。服用维生素C可解除亚硝酸盐中毒。在维生素C参与的反应中 A(亚硝酸盐是还原剂B(维生素C是氧化剂C(亚硝酸盐被氧化 D(维生素C将Fe3+还原为Fe2+ 19(加有少量柠檬酸钠(防止血液凝固)的猪血分装于标号?、?、 ?的试管中，随后依次加入质量分数为0(3,、0(9,和1(5,的氯化钠溶液稀释，30min后离心。下列叙述中，正确的是 A(?和?试管的上清液中有血红蛋白，沉淀中都有红细胞 B(?和?试管的上清液呈淡黄色，沉淀中均有皱缩的红细胞 C(?和?试管的沉淀中分别有红细胞的碎片和皱缩的红细胞 D(?和?试管的上清液是血清 20(在血红蛋白的整个提取过程中，不断用磷酸缓冲液处理的目的是 A(磷酸缓冲液会加速血红蛋白的提取过程 B(血红蛋白是一种两性物质，需要酸中和 C(防止血红蛋白被02氧化 D(让血红蛋白处在稳定的pH范围内，维持其结构和功能 21(在盛有红褐色的Fe(OH)3，胶体的U 形管的两个管口，各插一个电极，通直流电后，发现阴极附近的 颜色逐渐加深，这说明 A(Fe(OH)3胶体粒子带正电荷，向阴极移动 B(Fe(OH)3胶体粒子带负电荷，向阳极移动 C(Fe(OH)3胶体粒子带正电荷，向阳极移动 D(Fe(OH)3胶体粒子带负电荷，向阴极移动 22(为防止血液凝固，在采血容器中要预先加入抗凝血剂 A(NaCI B(甲苯 C(蒸馏水 D(柠檬酸钠 23.下列有关提取和分离血红蛋白的程度叙述错误的是 A. 样品的处理就是通过一系列操作收集到血红蛋白溶液 B. 通过透析可以去除样品中分子质量较大的杂质，此为样品的粗提取 C. 可通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去，即样品的纯化 D. 可通过SDS,聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血红蛋白的纯度 24.凝胶色谱法操作正确的是 A. 将橡皮塞上部用刀切出锅底状的凹穴B. 将橡皮塞下部切出凹穴 C. 插入的玻璃管的上部要超出橡皮塞的凹穴底面D. 将尼龙网剪成与橡皮塞下部一样大小的圆片 25.样品的加入和洗脱的操作不正确的是 A. 加样前，打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到凝胶面的下面 B. 加样后，打开下端出口，使样品渗入凝胶床内C. 等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口 D. 用吸管小心的将1ml透析后的样品加到色谱柱的顶端，不要破坏凝胶面 26.下列说法不正确的是 A. 血红蛋白在释放时，加蒸馏水到原血液的体积，再加40,体积的甲苯，充分搅拌 B. 血红蛋白溶液离心后分为4层，第1层为白色薄层固体 C. 血红蛋白溶液离心后分为4层，第4层为暗红色沉淀物 D. 血红蛋白溶液离心后分为4层，第3层为红色透明液体，这是血红蛋白的水溶液 二、多选题 27(下面关于对血红蛋白提取和分离的样品的处理措施中，正确的是 A(采集血样后要高速短时间离心获得血细胞 B(洗涤三次后如上清液仍有黄色，可增加洗涤次数，否则血浆蛋白无法除净。 C(在蒸馏水和甲苯的作用下，细胞破裂，释放出血红蛋白 D(释放血红蛋白后再经过离心，就可以使血红蛋白和其他杂质分离开来 28(凝胶色谱柱取长为40cm，内径为1(6cm，有关说法中，正确的是 A(一般凝胶色谱柱直径的大小不影响分离的效果 B(凝胶色谱柱过高超过1m，不影响分离的效果 C(凝胶色谱柱过矮，则影响混合物的分离度 D(凝胶色谱柱直径过大会耗用过多洗脱液，样品的稀释度过大 29((08扬州期末)以下关于血红蛋白提取和分离的过程及原理叙述不正确的是 A(红细胞洗涤过程中要加入5倍体积的蒸馏水，重复洗涤三次 B(将血红蛋白溶液放在质量分数为0.9,的NaCl溶液透析12 小时 C(凝胶装填在色谱柱内要均匀，不能有气泡存在 D(蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较大的移动速度慢 30(蛋白质的分离与提纯技术是蛋白质研究的重要技术，下列有关叙述正确的 A(根据蛋白质分子不能通过半透膜的特性，可将样品中各种不同蛋白质分离 B(根据蛋白质所带电荷性质的差异及分子大小，可通过电泳分离蛋白质 C(根据蛋白质相对分子质量的大小，可通过凝胶色谱法分离蛋白质 D(根据蛋白质的分子大小、密度不同，可通过离心沉降法分离蛋白质 31.下列有关生物技术在实践中的应用的叙述，错误的是 A(制葡萄醋的温度要比制葡萄酒的温度低些 B(使用加酶洗衣粉在任何条件下洗衣效果都比普通的洗衣粉好 C(凝胶色谱法是一种根据不同蛋白质对光的吸收率不同而分离蛋白质的有效方法 D(固定化细胞比固定化酶的催化效率高，适用于所有生产过程 三，非选择题: 32. 分离血红蛋白溶液时，将混合液离心后可看到试管中的液体分为4层:第一层为____________，第二层为____________固 体，是____________的沉淀层，第三层是____________液体，是____________的水溶液，第四层是其他杂质的______沉淀物。 33. 红细胞含有大量的血红蛋白，红细胞的机能主要是由血红蛋白完成，血红蛋白的主要功能是携带氧气或二氧化碳，我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白，请回答下列有关问题: (1)血红蛋白提取和分离的程度可分为四步:____________、____________、______和____________。 (2)实验前取新鲜的血液，要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠，取血回来，马上进行离心，收集血红蛋白溶液。 ?加入柠檬酸钠的目的是__________________。 ?以上所述的过程即是样品处理，它包括____________、__________________、收集血红蛋白溶液。 (3)收集的血红蛋白溶液在透析袋中可以经过透析，这就是样品的粗分离。 ?透析的目的是_____________________。?透析的原理是______________________________________。 (4)然后通过凝胶色谱法将样品进一步纯化，最后经SDS,聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。?样品纯化的目的是____________________________________。 ?血红蛋白有什么特点,______________________________。这一特点对进行蛋白质的分离有什么意义, ______________________________________________________。 参考答案: 一(单选题 1A2B3C4A5B6D7D8 9B10B11C 12A13C14B15B 16D17C 18D 19C 20D 21A 22D 23B 24A 25A 26B 二(多选题 27BCD 28ACD 29ABD 30BCD 31ABCD 三(非选择题 32无色透明的甲苯层;白色薄层;脂溶性物质;红色透明;血红蛋白;暗红色 33. (1)样品处理;粗分离;纯化;纯度鉴定 (2)?防止血液凝固?红细胞的洗涤，血红蛋白的释放 (3)?去除分子质量较小的杂质?透析袋能使小分子自由进出，而大分子则保留在袋内 (4)?通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去 ?血红蛋白呈现红色，在凝胶色谱分离时，可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液; 这使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作。 篇六:课题6 血红蛋白的提取和分离 课题6 血红蛋白的提取和分离 一、学习目标 1.掌握《血红蛋白提取和分离》的基本过程和方法，细化过程， 关注注意事项，要能够用精简准确的语言描述全过程; 2.特别掌握凝胶色谱法、缓冲溶液和电泳的操作原理和实际应用。 二、知识过关 1.凝胶色谱法:也叫做。是指不同的蛋白质分子，在通过凝胶的过程中，因有些要进入凝胶颗粒，有些不进入凝胶颗粒，导致移动的路径不同，而导致不同，进而将不同的蛋白质彼此分开的有效方法。 2.凝胶的成分是什么,凝胶颗粒本身有何特征, 3.相对分子量较小的蛋白质由于 内部而被滞留，相对分子量较大的蛋白质被阻挡在凝胶颗粒外面，在颗粒间迅速通过。 4.缓冲溶液的缓冲作用体现在哪里,请写出维持血液PH稳定的两对缓冲物质。 5电泳:在一定的下，带电粒子在的作用下，因和 的不同，使带电分子产生不同的迁移方向或从而实现样品中各种分子的分离。 6.常用的电泳方法有哪两种,测定蛋白质分子量时通常使用电泳。 聚丙烯酰胺凝胶具有 结构。蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率主要取决于它所带 的多少和。为了消除 对迁移率的影响，可以再凝胶中加入SDS(十二烷基硫酸钠)。SDS能够使蛋白质发生。SDS所带电荷可以掩盖不同蛋白质间的 差别，使电泳迁移率完全取决于 。 7.蛋白质的提取和分离一般分为哪四个步骤, 8.细胞组成中，除以外，约%是血红蛋白。血红蛋白由组成。血红蛋白因含有 而呈现红色。 1 思考:本课题为什么选择哺乳动物的血液来分离血红蛋白,必须这样选择吗, 9红细胞洗涤”环节的目的是, 采集的血样为什么要加入柠檬酸钠, 采集的血样在离心的时候为什么是“低速短时”, 洗涤时为什么用的是生理盐水而不是蒸馏水, 搅拌的时候为什么强调“缓慢”, 为什么要强调多次洗涤, 洗涤到什么情况才算干净, 10.“血红蛋白的释放”环节的目的是, 在烧杯中加入蒸馏水和甲苯的目的是, 搅拌的时候为什么强调“充分搅拌”, 11.“分离血红蛋白溶液”步骤的原理是什么, 离心后溶液分为4层，从上到下分别是何种物质,各有什么样的表观特征, 过滤和分液漏斗分别发挥什么作用, 思考:如果高速离心后并未出现预期的分层现象，可能是什么原因, 12.粗分离利用的是什么技术,主要的目的是什么,为什么透析袋外面用的是磷酸缓冲液,如果在透析袋外面的缓冲溶液中加入双缩脲试剂或出现什么现象, 13(典型例题 如图表示血红蛋白提取和分离的部分实验装置，请回答下列问题。 (1)血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，其在红细胞中的作用体现 了蛋白质具有________功能。 (2)甲装置中，B是血红蛋白溶液，则A是________。 (3)甲装置用于________，目的是________________。 2 篇七:课题3 血红蛋白的提取和分离 课题3 血红蛋白的提取和分离 一、课题目标 (一)基础知识 二、课堂练习 1(凝胶色谱法可以有效的分离蛋白质的根据是( ) A(分子的大小B(相对分子质量的大小 C(带电荷的多少 D(溶解度 2(利用凝胶色谱法分离蛋白质，最先洗脱的蛋白质特点是( ) A(相对分子质量大的 B(溶解度高的 C(相对分子质量小的 D(所带电荷多的 3. 凝胶色谱法中所用的凝胶化学本质大多是( ) A. 糖类化合物B. 脂质 C. 蛋白质D. 核酸 4(相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的进行过程可表示为图中哪一个 ( B ) 5(用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量大的蛋白质 ( ) A(路程较长，移动速度较慢B(路程较长，移动速度较快 C(路程较短，移动速度较慢D(路程较短，移动速度较快 6(能进入凝胶内部通道的蛋白质是指 ( ) A(相对分子质量大的 B(吸附性高的C(相对分子质量小的D(溶解度低的 7(凝胶色谱法中移动得快的是 ( ) A(相对分子质量大的 B(溶解度高的 C(相对分子质量小的 D(溶解度低的 8(缓冲液的作用是在一定范围内，抵制外界的影响来维持下列哪一项状态基本不变的 ( ) A(温度B(pH C(渗透压 D(氧气浓度 9(初步分离血红蛋白的实验中用到的缓冲溶液为 ( ) A(H2 CO3一NaHCO3缓冲液B(NH4OH—NH4Cl缓冲液 C(CH3 COOH—CH3 COONa缓冲液D(H3PO4缓冲液 10(蛋白质提取和分离分为哪几步 ( ) A(样品处理、凝胶色谱操作、SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳 B(样品处理、凝胶色谱操作、纯化C(样品处理、粗分离、纯 化、纯度鉴定 D(样品处理、纯化、粗分离、纯度鉴定 11. 血红蛋白因含有什么物质而呈红色 ( ) A. O2 B. CO C. CO2 D.血红素 12. 将搅拌好的混合液离心来分离血红蛋白溶液时，第二层是( ) A. 甲苯 B. 血红蛋白水溶液C. 脂溶性物质的沉淀层 D. 其他杂质的沉淀 13(分离血红蛋白溶液时，离心后试管中的溶液分四层，血红蛋白位于 ( ) A(一B(二 C(三 D(四 14. 下列操作正确的是( ) A. 分离红细胞时采用低速长时间离心 B. 红细胞释放出血红蛋白只需要加入蒸馏水就可 C. 分离血红蛋白溶液是低速短时间离心D. 透析时要用20mmol/l的磷酸缓冲液，透析12h 15(使用十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的迁移速度完全取决于 ( ) A(电荷的多少 B(分子的大小 C(肽链的多少 D(分子形状的差异 16(洗涤红细胞的目的是 ( ) A(去除血清 B(去除杂蛋白 C(除去血小板 D(除去水 17(洗涤红细胞时，分离所用的方法为 ( ) A(低速长时间离心 B(低速短时间离心C(高速长时间离心D(高速短时间离心 18(SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳法中加入SDS的作用是 () A(增大蛋白质的相对分子质量 B(改变蛋白质的形状 C(掩盖不同种蛋白质问的电荷差别D(减少蛋白质的相对分子质量 19(制作凝胶色谱柱时，橡皮塞顶部凹穴内插入的移液管的部位及长度是 () A(移液管头部5 cm B(移液管尾部5 cm C(移液管头部3 cm D(移液管尾部3 cm 20(下列有关凝胶色谱法中样品的加入和洗脱的叙述中，正确的是 ( ) A(先加入1 mL透析后的样品B(加样前要使缓冲液缓慢下降，全部流出 C(如果红色区带均匀一致地移动，说明色谱柱制作成功 D(洗脱时可以用缓冲液也可以用清水 21(在下列哪一种条件下生物大分子具有的可解离的基团会带上正电或负电 ( ) A(一定温度 B(一定pHC(一定压强 D(一定容器 22(电泳时带电粒子在电场的作用下，移动所向的电极的方向与其所带电荷是 ( ) A(桕同 B(相反 C(相对 D(相向 23(装填凝胶色谱柱时，下端的尼龙管应( ) A(先打开后关闭 B(关闭 C(先关闭后打开 D(打开 24(D亚铁血红素基团可携带 ( ) A(一分子CO B(一分子NO C(一分子O2或CO2D(一分子NO2 25(人体正常的血红蛋白中应含有Fe2+，若误食亚硝酸盐，则导致血红蛋白中的Fe2+。转化为 Fe3+，产生高价铁血红蛋白而中毒。服用维生素C可解除亚硝酸盐中毒。在维生素C参与的反应中 A(亚硝酸盐是还原剂 B(维生素C是氧化剂C(亚硝酸盐被氧化 ( ) D(维生素C将Fe3+还原为Fe2+ 26(加有少量柠檬酸钠(防止血液凝固)的猪血分装于标号?、?、?的试管中，随后依次加入 质量分数为0(3,、0(9,和1(5,的氯化钠溶液稀释，30 min后离心。下列叙述中，正确的是 ( ) A(?和?试管的上清液中有血红蛋白，沉淀中都有红细胞 B(?和?试管的上清液呈淡黄色，沉淀中均有皱缩的红细胞 C(?和?试管的沉淀中分别有红细胞的碎片和皱缩的红细胞 D(?和?试管的上清液是血清 27(在血红蛋白的整个提取过程中，不断用磷酸缓冲液处理的目 的是 ( ) A(磷酸缓冲液会加速血红蛋白的提取过程 B(血红蛋白是一种两性物质，需要酸中和 C(防止血红蛋白被02氧化 D(让血红蛋白处在稳定的pH范围内，维持其结构和功能 28(在盛有红褐色的Fe(OH)3，胶体的U形管的两个管口，各插一个电极，通直流电后，发现 阴极附近的颜色逐渐加深，这说明 ( ) A(Fe(OH)3胶体粒子带正电荷，向阴极移动 B(Fe(OH)3胶体粒子带负电荷，向阳极移动 C(Fe(OH)3胶体粒子带正电荷，向阳极移动 D(Fe(OH)3胶体粒子带负电荷，向阴极移动 29(为防止血液凝固，在采血容器中要预先加入抗凝血剂 ( ) A(NaCI B(甲苯 C(蒸馏水 D(柠檬酸钠 30. 下列有关提取和分离血红蛋白的程度叙述错误的是( ) A. 样品的处理就是通过一系列操作收集到血红蛋白溶液 B. 通过透析可以去除样品中分子质量较大的杂质，此为样品的粗提取 C. 可通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去，即样品的纯化 D. 可通过SDS,聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血红蛋白的纯度 31. 凝胶色谱法操作正确的是() A. 将橡皮塞上部用刀切出锅底状的凹穴B. 将橡皮塞下部切出凹穴 C. 插入的玻璃管的上部要超出橡皮塞的凹穴底面D. 将尼龙网剪成与橡皮塞下部一样大小的圆片 32. 样品的加入和洗脱的操作不正确的是( ) A. 加样前，打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到凝胶面的下面 B. 加样后，打开下端出口，使样品渗入凝胶床内 C. 等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口 D. 用吸管小心的将1ml透析后的样品加到色谱柱的顶端，不要破坏凝胶面 33. 下列说法不正确的是() A. 血红蛋白在释放时，加蒸馏水到原血液的体积，再加40,体积的甲苯，充分搅拌 B. 血红蛋白溶液离心后分为4层，第1层为白色薄层固体 C. 血红蛋白溶液离心后分为4层，第4层为暗红色沉淀物 D. 血红蛋白溶液离心后分为4层，第3层为红色透明液体，这是血红蛋白的水溶液 二、多选题 34(选用红细胞作分离蛋白质的实验材料，下列是其优点的是 ( ) A(血红蛋白是有色蛋白B(红细胞无细胞核 C(红细胞蛋白质含量高D(红细胞DNA含量高 35(下面关于对血红蛋白提取和分离的样品的处理措施中，正确的是 ( ) A(采集血样后要高速短时问离心获得血细胞 B(洗涤三次后如上清液仍有黄色，可增加洗涤次数，否则血浆蛋白无法除净。 C(在蒸馏水和甲苯的作用下，细胞破裂，释放出血红蛋白 D(释放血红蛋白后再经过离心，就可以使血红蛋白和其他杂质分离开来 36(凝胶色谱柱取长为40 cm，内径为1(6 cm，有关说法中，正确的是 ( ) A(一般凝胶色谱柱直径的大小不影响分离的效果 B(凝胶色谱柱过高超过1 m，不影响分离的效果 C(凝胶色谱柱过矮，则影响混合物的分离度 D(凝胶色谱柱直径过大会耗用过多洗脱液，样品的稀释度过大 37(下列有关提取和分离血红蛋白的过程的叙述中，正确的是 ( ) A(样品的处理就是通过一系列操作收集到血红蛋白溶液 B(通过透析可以去除样品中相对分子质量较大的杂质，此为样品的粗提取 C(可通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去，即样品的纯化 D(可通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定 血红蛋白的纯度 38(雄性激素是小分子脂溶性物质，很容易穿过细胞膜。睾丸 每天分泌的雄性激素约7 mg， 其中约2,呈游离状态，其余在血中与血浆蛋白呈可逆性结合。下列有关雄性激素与血 浆蛋白结合后的作用的叙述中，正确的是 ( ) A(使其不容易通过肾脏排出B(使其不容易进入细胞 C(使其有效浓度处于特定水平 D(抑制雄性激素发挥作用 39. 分离血红蛋白溶液时，将混合液离心后可看到试管中的液体分为4层:第一层为______，第二层为______固体，是______的沉淀层，第三层是______液体，是______的水溶液，第四层是其他杂质的______沉淀物。 40. 红细胞含有大量的血红蛋白，红细胞的机能主要是由血红蛋白完成，血红蛋白的主要功能是携带氧气或二氧化碳，我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白，请回答下列有关问题: (1)血红蛋白提取和分离的程度可分为四步:______、______、______和______。 (2)实验前取新鲜的血液，要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠，取血回来，马上进行离心，收集血红蛋白溶液。?加入柠檬酸钠的目的是__________________。 ?以上所述的过程即是样品处理，它包括______、______、收集血红蛋白溶液。 (3)收集的血红蛋白溶液在透析袋中可以经过透析，这就是样 品的粗分离。 ?透析的目的是__________________。 ?透析的原理是______________________________。 (4)然后通过凝胶色谱法将样品进一步纯化，最后经SDS,聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。 ?样品纯化的目的是______________________________。 ?血红蛋白有什么特点,______________________________。这一特点对进行蛋白质的分离有什么意义, ______________________________________________________。 答案:1—5BAABD 6—10CABDC 11—15DCCDB16—20BBCAC 21—25BBDCD 26—30CDADB 31A32A33B34ABC35BCD36ACD37ACD38ABC39无色透明;甲苯层;白色薄层;脂溶性物质;红色透明;血红蛋白;暗红色40 40. (1)样品处理;粗分离;纯化;纯度鉴定 (2)?防止血液凝固?红细胞的洗涤，血红蛋白的释放 (3)?去除分子质量较小的杂质 ?透析袋能使小分子自由进出，而大分子则保留在袋内 (4)?通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去 ?血红蛋白呈现红色，在凝胶色谱分离时，可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液; 这使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作。 篇八:练习:血红蛋白的提取和分离 (生物小练习) 血红蛋白的提取和分离 1(下列关于凝胶色谱法的原理及操作不( 正确的是( ) A(是利用凝胶把分子大小不同的物质分离开的一种方法 B(在洗脱过程中，大分子不能进入凝胶内部而最先流出，而小分子可以进入凝胶内部而流速缓慢，以致最后流出 C(凝胶内部有很微细的多孔网状结构，其孔隙大小与被分离的物质分子的大小无相应关系 D(一般情况下，凝胶对要分离的物质没有吸附作用，因此所有要分离的物质都应该被洗脱出来 2(关于电泳的说法不( 正确的是( ) A(电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程 B(带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动 C(蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带净电荷的多少 D(用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳，蛋白质的电泳迁移率完全取决于分子的大小 3((2011年宿州高二检测)下列操作正确的是( ) A(分离红细胞时采用低速长时间离心 B(红细胞释放出血红蛋白只需要加入蒸馏水就可 C(分离血红蛋白溶液是低速短时间离心 D(透析时要用20 m mol/L的磷酸缓冲液，透析12 h 4(有关缓 冲溶液的说法不( 正确的是( ) A(缓冲溶液能够抵制外界的酸和碱对溶液pH的影响，维持pH基本不变 B(缓冲溶液通常由1,2种缓冲剂溶解于水中配制而成 C(调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同pH范围内使用的缓冲液 D(生物体内进行的各种生物化学反应都是在一定的pH下进行 5.已知某样品中存在甲、乙、丙、丁、戊五种蛋白质分子，分子大小、电荷的性质和数量情况如图所示，下列有关蛋白质分离的叙述正确的是( ) A(若将样品以2000 r/min的速度离心10 min，分子戊在沉淀中，则丙也一定在沉淀中 B(若用凝胶色谱法分离样品中的蛋白质，则分子甲移动速度最快 C(将样品装入透析袋中透析12 h，若分子丙保留在袋内，则乙也一定保留在袋内 D(若用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳分离样品中的蛋白质分子，则分子甲和分子丁形成的电泳带相距最远 6((2011年邵阳高二检测)如图表示血红蛋白提取和分离的部分实验装置，请据图回答下列问题。 (1)血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，它在红细胞中的作用体现了蛋白质具有________功能。 (2)甲装置中，B是血红蛋白溶液，则A是________;乙装置中， C溶液的作用是________。 (3)甲装置用于________，目的是____________。用乙装置分离 蛋白质的方法叫____________，是根据____________分离蛋白质的有效方法。 (4)用乙装置分离血红蛋白时，待____________时，用试管收集流出液，每5 mL收集一管，连续收集。 (紧扣教材，思考感悟) 你能从凝胶色谱的分离原理分析出为什么凝胶的装填要紧密、均匀吗,(教材P70) 答案:凝胶实际上是一些微小的多孔球体，小球体内部有许多贯穿的通道。相对分子质量较大的蛋白质分子不能进入凝胶颗粒内部，只能分布在颗粒之间，通过的路程较短，移动速度较快;相对分子质量较小的蛋白质分子比较容易进入凝胶内的通道，通过的路程较长，移动速度较慢。因此，样品中相对分子质量较大的蛋白质先流出，相对分子质量中等的分子后流出，相对分子质量最小的分子最后流出，从而使各种相对分子质量不同的分子得以分离。如果凝胶装填得不够紧密、均匀，就会在色谱柱内形成无效的空隙，使本该进入凝胶内部的样品分子从这些空隙中通过，搅乱洗脱液的流动次序，影响分离的效果。 1(凝胶色谱法分离蛋白质的原理依据是( ) A(根据蛋白质分子与凝胶的亲和力的大小 B(根据蛋白质相对分子质量的大小 C(根据蛋白质所带电荷的多少 D(根据蛋白质 溶解度的大小 2(用凝胶色谱法分离蛋白质的实验中，相对分子质量不同的两种蛋白质在凝胶中的行进过程，可表示为图中哪一个( ) 3(关于血红蛋白分子组成的叙述正确的是( ) A(两个α-肽链、两个β-肽链、一个亚铁血红素基团 B(一个α-肽链、三个β-肽链、四个亚铁血红素基团 C(两个α-肽链、两个β-肽链、四个亚铁血红素基团 D(两个α-肽链、两个β-肽链、两个亚铁血红素基团 4(蛋白质提取和分离分为哪几步( ) A(样品处理、凝胶色谱操作、SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳 B(样品处理、凝胶色谱操作、纯化 C(样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定 D(样品处理、纯化、粗分离、纯度鉴定 5(SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳中决定蛋白质或多肽移动速度的主要因素是( ) A(蛋白质分子所带的电荷 B(蛋白质分子的形状 C(蛋白质分子的相对分子质量 D(缓冲溶液的pH 6(高温灭菌和酒精灭菌分别利用蛋白质的何种作用，作用结果是什么被破坏所致( ) A(变性、变性;空间结构 B(分解、变性;化学结构 C(变性、变性;平面结构 D(分解、分解;空间结构 7((2011年邵阳高二检测)将搅拌好的混合液离心来分离血红蛋白溶液时，第2层是( ) C(脂溶性物质的沉淀层D(其他杂质的沉淀物 8(在装填色谱柱时，不得有气泡存在的原因是( ) A(气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果 B(气泡阻碍蛋白质的运动 C(气泡能与蛋白质发生化学反应 D(气泡会在装填凝胶的时候使凝胶不紧密 9(蛋白质的分离与纯化是蛋白质研究的重要技术。下列有关叙述不(正确的是( ) A(根据蛋白质分子不能透过半透膜的特性，可将样品中各种不同的蛋白质分离 B(根据蛋白质所带电荷性质的差异及分子大小等，可通过电泳分离蛋白质 C(根据蛋白质相对分子质量的大小，可通过凝胶色谱法分离蛋白质 D(根据蛋白质的分子大小、密度不同，可通过离心沉降法分离蛋白质 10(在血红蛋白的整个提取过程中，不断用磷酸缓冲液处理的目的是( ) A(磷酸缓冲液会加速血红蛋白的提取过程 B(血红蛋白是一种两性物质，需要酸进行中和 C(防止血红蛋白被氧气氧化 D(让血红蛋白处在稳定的pH范围内，以维持其结构和功能 11(红细胞含有大量血红蛋白，红细胞的机能主要是由血红蛋白完成，血红蛋白的主要功能是携带O2和CO2，我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白。请回答下列有关问题: (1)血红蛋白的提取和分离一般可分为四步:________、粗分离、纯化和________。 (2)实验前取新鲜的血液，要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠，取血回来，马上进行离心，收集血红蛋白溶液。 ?加入柠檬酸钠的目的是 ________________________________________________________________________。 ?以上所述的过程即是样品处理，它包括红细胞的洗涤、 ______________、______________。 (3)收集的血红蛋白溶液要进行粗分离，其方法是 ________________________________________________________________________ __________________。 (4)然后通过____________将样品进 一步纯化，最后经________进行纯度鉴定。样品纯化的目的是 ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (5)电泳利用了待分离样品中各种分子带电性 质的差异以及________、形状的不同，使带电分子产生不同的迁 移速率，从而实现样品中各种分子的分离。 12.凝胶色谱技术是一种快速而又简单的分离技术，由于设备 简单、操作方便，不需要有机溶剂，对高分子物质有很高的分离 效果，目前已经被生物化学、分子生物学、生物学、分子免 疫学以及医学等有关领域广泛应用，不但应用于科学实验研究， 而且已经大规模地用于工业生产。据图回答下列问题: (1)a、b均为蛋白质分子，其中先从层析柱中洗脱出来的是 __________，原因是 ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ (2)自己制作凝胶色谱柱时，在色谱柱底部d位置相当于多孔板 的结构可由__________________________替代。 (3)装填凝胶色谱柱时，色谱柱内不能有气泡存在，原因是 ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (4)洗脱用的液体应尽量与浸泡凝胶所用的液 体__________(填“相同”或“不同”)，洗脱时，对洗脱液的流速 要求是____________________。