实验性动脉内膜增厚过程中细胞单克隆抗体的免疫组织化学反应

实验性动脉内膜增厚过程中细胞单克隆抗体的免疫组织化学反应 第 25 卷 第 6 期中 国 医 科 大 学 学 报V o l. 25 N o. 6 1996 年 1996 JOU RN A L O F CH IN A M ED ICA L U N IV ER S IT Y 实验性动脉内膜增厚过程中细胞单克隆 抗体的免疫组织化学反应 1 李建华 李宗铉 刘闺男谢成跃 ( )基础医学院病理解剖学教研室, 沈阳 110001 摘要 用注水和注气法损伤家兔颈总动脉内膜后, 以高胆固醇加猪油饲料喂养, 制成动脉内膜增厚模型, 用免疫组化方法检查纤维母细胞和巨噬细胞单克隆 抗体反应。结果: 在增生的动脉内膜存在巨噬细胞抗原, 中膜和内膜存在纤维 母细胞抗原。表明在动脉内膜增厚过程中, 细胞来源既有血液中单核细胞的侵入, 也有由中膜中某些具有胎儿型的平滑肌细胞经过改变其表型游走到内膜, 形成了 内膜增厚的主要细胞成份。 关键词 动脉; 内膜; 纤维母细胞;巨噬细胞; 抗体 在用免疫组织化学方法研究动脉粥样脉做对照组。 硬化中, 主要用细胞间质单克隆 抗 体, 如 实验组家兔在无菌条件下切开颈部暴 等 在 平 滑 肌 细 胞 , , 110 , 以血管夹控制两 露右颈总动脉约 V im en t in de sm in ac t in cm 端血流, 注气组每只注入空气 1 , 注水 中的变化, 以此观察其表型的改变与动脉 m l 组每只注入蒸馏水 1 。两组均经 15 后 硬化发生机理的关系, 而使用细胞单克隆 m ls 1, 2 开放血管夹, 使血流再通。术后两组家兔均 抗体的实验报道不多。另一方面在动脉 以含 1% 胆固醇、5% 猪油的饲料喂养, 喂 硬化模型的制作上, 一般采用单一高脂食 养 2 周后, 每组处死 5 只。喂养 4 周后每组 或单一机械性损伤局部血管的方法较多。 各处死余下的 5 只。 在处死前 5 经兔 m in 本研究采用局部血管损伤加高脂食的综合 ( ) 耳静脉注伊文氏蓝 5 , 灌 E van s b lu e m l方法制造血管内膜增厚模型, 并用细胞单 ( )注中性福尔马林 300 压力为 16 。 m l k P a 克隆抗体检查病变局部细胞成分的改变, 处死后取左、右颈动脉全段, 以中性福尔马 以进一步阐明动脉粥样硬化性病变的发生 林再固定 2 , 做常规石蜡包埋, 每石蜡块 h 机理。 切 10 张 连 续 切 片。 另 取 部 分 血 管 段 行 215% 戊二醛固定 2 , 再以 1% 锇酸固定, h 酒精系列脱水, 812 包埋, 超薄切片, Epo n 行铅、铀染色, 以 电子显微镜观察、 600 H 1 材料与方法照像。 ( 日 本 大 耳 白 家 兔 体 重 210, 215 连续切片分别进行抗巨噬细胞单克隆 ) , 均为雄性, 分注水组 10 只, 注气组 10 k g 只。另取 6 只做对照组, 实验组的左颈总动 () 单克隆抗体 染色, 另外各组分别行 噬细胞单克隆抗体和抗纤维母细胞单克隆D ako 、染色。抗体的阳性反应也明显。 表明内皮细胞的 - H EE la st icam a sso n 损伤程度与内膜增厚性变化呈正相关。 2 结果312 喂养胆固醇和猪油可促进家兔产生 211 肉眼观察 注水组和注气组均可见 内膜增厚性变化, 这变化随时间的延长而 染色阳性, 内膜呈蓝色, 而对照 E van s b lu e 加重。但一般来看, 至少需喂养 4 周以上才 组无蓝染。 可见内膜增厚变化, 但由于本实验做了注 212 和 染 色 切 片 - H E E la st ica m a sso n 水和注气实验, 使内膜增厚性变化来得早 注水组 2 周见到内皮剥脱, 内膜增厚, 来得重。 说明内皮的物理性损伤促进动脉 4 周后内膜明显增厚, 内弹力板有断裂破 内膜增厚性反应的形成。 坏, 血管腔内形成血栓堵塞。注气组 2 周内 313 形成内膜增厚的细胞成份, 论其来源 皮有剥脱, 内膜轻度增厚; 4 周后内膜增厚大致认为有从血液来源的单核细胞的渗 ( )较明显, 但比注水组的变化相对轻 图 1。1 , 也有中膜平滑肌细胞游走至内膜而入 213 免疫组织化学染色 两组大致相同,2 形成的。 本实验用巨噬细胞单克隆抗体 但注水组比注气组阳性反应明显, 喂养 4染色证明内膜确呈阳性, 证明了单核细胞 周的比喂养 2 周的阳性反应明显。的存在; 又用纤维母细胞的单克隆抗体染 21311 抗巨噬细胞单克隆抗体染色, 在实 色证明内膜呈阳性, 同时中膜的内侧平滑(验组动脉内膜呈阳性反应, 中膜呈阴性 图 肌细胞也有较多量呈阳性者。这证明, 中膜 ) 2, 4。内侧的一些呈阳性的平滑肌细胞游走到内 21312 抗纤维母细胞单克隆抗体染色, 在 膜形成了内膜细胞。有实验证明, 中膜平滑 实验组动脉内膜呈轻度阳性反应, 中膜呈 肌细胞在某些刺激作用下, 可改变其原来 较明显阳性反应, 且呈阳性反应的中膜平的性质而形成合成型平滑肌细胞, 并且向 ()滑肌细胞多向内膜方向呈竖立状 图 5。内膜游走。 中膜平滑肌细胞中能向内膜游 21313 对照组动脉内膜、中膜抗巨噬细胞 走的细胞不但其表型有改变, 而且其机能 抗体和抗纤维母细胞单克隆抗体均呈阴性 3, 4 也发生变化, 即这些平滑肌细胞不但呈 反应。而抗平滑肌细胞抗体, 在动脉中膜呈 阳 性, 而 且 反 应 也 呈 阳 de sm in V im en t in 阳性反应。 性。 和 两者都呈阳性的de sm in V im en t in 214 超薄切片观察 实验组动脉内膜增 厚 平滑肌细胞已具有胎儿型平滑肌细胞的性处平滑肌细胞多呈合成型, 中膜靠内侧 的质, 这一性质是与纤维母细胞相 似 的, 因 平滑肌细胞亦多呈合成型, 即胞浆内粗 此, 用免疫组化染色便呈纤维母细胞阳性 面内质网、线粒体等增多, 而纤维成分少。 反应。 当这种细胞进入内膜之初仍呈与纤 中膜外侧部分的平滑肌细胞基本为收缩型 5, 6 维母细胞相同的阳性反应, 实则为一种 ()图 6。 转型的平滑肌细胞。 本实验证实, 造成内膜增厚的细胞, 一 3 讨论是血液来源的单核细胞, 另一种是由中膜 311 注水组和注气组比较, 注水组动脉内 而来的转型的具有与纤维母细胞相似性质 皮损伤相对重, 注水组内膜增厚明显, 抗巨 的平滑肌细胞。 注空气组 4 周动脉内膜明显增厚, 染色×100 图 1EM 图 2 注空气组 4 周动脉内膜抗巨噬细胞单克隆抗体呈阳性反应×400 图 3 注蒸馏水 4 周动脉内膜增厚抗巨噬细胞单克隆抗体在动脉的表层均呈阳性反应×400 图 4 注蒸馏水 4 周抗巨噬细胞单克隆抗体在动脉中膜呈阳性反应×330 图 5 注蒸馏水 4 周动脉内膜抗纤维母细胞单克隆抗体染色为阳性反应, 阳性反应的平滑肌细胞多向内 膜方向呈竖立状排列×200 透射电镜下观察平滑肌细胞多为合成型粗面内质网, 线粒体增多, 而纤维成分少×3500 图 6 李宗铉, 小山敏雄, 三俣昌子, 等 1 游走中膜平滑肌 4 参 考 文 献( ) 细胞の超微形态 1 动脉硬化, 1986; 14 5: 1033 田丰弘, 久保田昌良 1 动脉硬化巢内平滑筋细胞 1 , - , , Gabb ian i GR ungge rB rand le E C h a sto nay C e t のに关する 研 究 1 动 脉 硬 化 1988; 16p h eno typ e 5 . - a lV im en t in co n ta in ing sm oo th m u sc le ce lls in ( ) 4: 517 ao r t ic in t im a l th ick en ing af te r endo th e lia l in ju ry. . - G iu lio Gabb ian iV im en t inco n ta in ing sm oo th m u s2 2 L ab Inv, 1982; 47: 265 c le ce lls in ao r t ic in t im a l th ick en ing af te r endo th e lia l S im o n s M . A n t igen s c- m yb o ligo nuc leo t ide s inh ib2 ( ) . , 1982; 147 3: 265in ju ryL ab Inv 6 . it a r te r ia l sm oo th m u sc le ce ll accum u la t io n in v ivoT suk ada, T. Imm uno cy to ch em ica l ana ly sis o f ce llu2 3 , 1992; 359: 67N a tu re , la r com po nen t s in a th e ro sc le ro t ic le sio n sU se o f ( )1995209220 收稿 m o no c lo na l an t ibo d ie s w ith th e w a tanabe and fa t fed . , 1986; 6: 601rabb itA r th e r Imm un oh istochem ica l Rea c t ion of An t i- F ibrobla st M on oc lona l - An t ibody an d An t iM on on uc lea r M on oc lona l An t ibody in Exper im en ta l Th icken in g Ca ro t ic A r tery In t im a , , , L i J ia n h u a L i Z on g x u a n L iu G u in a n e t a l (), , , , 110001D ep a r tm en t o f P a tho lo gySchoo l o f B a sic M ed ica l Sc ience sC h ina M ed ica l U n ive r sitySh enyang T h ick en ing m o de l o f lo ca l in t im a o f ca ro t ic a r te ry o f rabb it s w a s m ade by feed ing h yp e r lip id foo d af2 . te r th e in ju ry to in t im a m ade by in jec t io n o f d ist illed w a te r and a irImm uno h isto ch em ica l sta in o f th e - - th ick en ing a r te ry w a ll w a s p e rfo rm ed w ith an t if ib ro b la st and an t im o no nuc lea r m o no c lo na l an t ibo d2 (). ie s M cA b T h e re su lt s show ed th a t th e po sit ive reac t io n o f an t if ib ro b la st M cA b w a s o b se rved in in t i2 . m a and m ed ia bu t th e po sit ive reac t io n o f an t im o no nuc lea r M cA b w a s o n ly in in t im aIt w a s ind ica ted . th a t som e o f a r te ry sm oo th m u sc le ce lls m igh t h ave po ten t ia l ch a rac te r ist ic s o f f ib ro b la st ce llsT h is k ind o f sm oo th m u sc le ce lls m igh t t ran sfo rm p h eno typ ica lly and imm ig ra te in to in t im a and p ro life ra te .th e re w h en st im u la ted ; ; ; ; Key words a r te r ie sin t im af ib ro b la st sm ac rop h age san t ibo d ie s () 上接第 594 页 - 328 Ef f ec t of Com poun d HL on Iso la ted Ra bb it Sa phen ous Ve in W a n g H u a il ia n g , Z h a n g X in h u a , X in g J u n (, , D ep a r tm en t o f P h a rm aco lo gySchoo l o f B a sic M ed ica l Sc ience s ), , 110001C h ina M ed ica l U n ive r sitySh enyang 2328 . Com po und HL in a p lan t a lk a lo id iso la ted f rom m ed ic ina l h e rbB y co n st ruc t io n o f co ncen t ra2 ()2. t io n re spo n se cu rve o f th is com po und o n iso la ted rabb it sap h eno u s ve in RB SV W e fo und th a t com 2 2328 522po und HL beh aved a s a w eak H T ago n ist o n RB SV and it dep re ssed co ncen t ra t io neffec t cu rve o f 522328 . RB SV induced by h yd ro xy t rap tam ineT h is no ve l f ind ing sugge sted th a t com po und HL m igh t be a 52.p a r t ia l ago n ist o f H T 1D recep to r s ; ; 522328; Key words rabb itsap h eno u s ve inH T 1D recep to r scom po und HL