左旋奥硝唑葡萄糖注射液细菌内毒素检查

左旋奥硝唑葡萄糖注射液细菌内毒素检查 药品鉴定2009年4月第16卷第7期 左旋奥硝唑葡萄糖注射液细菌内毒素检查 陈戊娇,李健和,彭六保2曹俊华,罗霞z (1.湖南省永州市东安县中医院,湖南东安425900;2.中南大学湘雅二医院药剂科,湖南长沙 410011) [摘要】目的:建立左旋奥硝唑葡萄糖注射液细菌内毒素的检查法.方法:用不同厂家,不同批 号,不同灵敏度的鲎试 剂对左旋奥硝唑葡萄糖注射液进行干扰实验.结果:用标示灵敏度为0.25EU,ml的鲎试剂,左 旋奥硝唑葡萄糖注射 液稀释2倍后,对细菌内毒素检查无干扰作用.结论:可以用细菌内毒素检查法取代左旋奥硝 唑葡萄糖注射液的热 原检查法. 【关键词】左旋奥硝唑葡萄糖注射液;鲎试剂;细菌内毒素 [中图分类号】R978.6[文献标识码】B[文章编号】1674-4721(2008)04(a)一04,4-02 Bacterialendotoxintestfl0rlev00rnidaz0leandglucoseinjection CHENWujiao~,LlJianhe2*,PENGLiubao2,CA0Junhua2,LUOXiaz (1.Dang’anHospitalofTraditionalChineseMedicine,Dongan425900,China;2.DepartmentofPharmacy,theSecondXi— angyaHospital,CentralSouthUniversity.Changsha4100l1.China1 【Abstract】 0bjective:Toestablishbacterialendotoxintestforlevoornidazoleandglucoseinjectionusingtachypleusa/he— bocytelysate.Methods:TheinterferentialtestoflevoomidazoleandglucoseinjectionwerestudiedusingtachyoJeusame— bocytelysateofdifferentfactories,differentbatchnumbersanddifferentsensitivities.Results:Whenthesensitivityof tachypleusamebocytelysateis0.25EU/ridandmaximumvaliddilutionis2.thebacterialendotoxinstestisn’tinterferentia1. Conclusion:Thebacterialendotoxinstestoflevoomidazoleandglucoseinectioncanbereplacedbythepyrogentestofit. 【KeyWords】 Levoomidazoleandglucoseinjection;Tachypleusamebocytelysate;Bacterialendotoxintest 左旋奥硝唑为奥硝唑的左旋异构体,广谱抗肠虫药,能 杀灭阿米巴原虫,毛滴虫及肠梨形虫.临床用于阴道滴虫感 染,阿米巴病及厌氧菌引起的感染.鉴于鲎试剂用于细菌内 毒素的检测.具有操作简便,灵敏度高,重现性好,实用性强 等优点,我们按中国药典2005年版二部细菌内毒素检查法, 通过适当稀释左旋奥硝唑葡萄糖注射液,以期建立其细菌内 毒素检查法,探讨以细菌内毒素检查法取代热原检查法检测 左旋奥硝唑葡萄糖注射液的叮行性. 1 左旋奥硝唑葡萄糖注射液,规格100mh左旋奥硝唑 0.25g+葡萄糖5.0g,批号:080820,080822,080824;由长沙 市华美医药研究所和沈阳第一制药厂研制提供.鲎试剂 frI1AL1:批号:20080415,规格:0.1ml/支,灵敏度:0.125EU/ml; 批号:20080217,规格:0.1nil/支,灵敏度:0.25EU/ml,均由湛 江海洋生物制品厂生产;批号:080427l,规格:0.1ml/支,灵 敏度:0.25EU/ml,由湛江安度斯生物有限公司生产;细菌内 毒素国家工作品,160EU/支,批号:2008—2,中国药品生 物制品检定所提供;细菌内毒素检查用水(BET用水1,批号: 20080412.2ml/支,湛江海洋生物制品厂生产;批号: 0803050.2ml/支,湛江安度斯生物有限公司生产.电热恒温 水浴箱,东风医疗器械厂生产:2H一2自动旋涡混合仪,天津 药典标准仪器厂生产.实验室温度18,22?. 2方法与结果 2.1细菌内毒素限值(L)的确定 根据公式:L=K/M.其中K为按规定的给药途经,人用每 [通讯作者】李健和,副主任药师,研究方向:新药开发. 44中国当代医药CHINAMODERNMEDICINE 公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量,M为人用每公斤 体重每小时接受左旋奥硝唑葡萄糖注射液的最大剂量.注射 剂K=5EU/(kg?h).参考本品临床的用法用量可知,M=400 ml/60(kg?h).因此L=rM=5x60/400=0.75EU/ml.经计算 所得的L值为理论值,考虑到本品为大输液(100ml/瓶),临 床多为联合用药,且经过实验验证,将L值定为小于0.5EU/ml 有一定的安全系数 2.2最小不干扰稀释倍数的测定 取鲎试剂(灵敏度0.125EU/m1)和细菌内毒素国家工作 标准品,用BET水稀释至0.25EU/ml,取样品(批号:080822) 进行2及4倍的稀释.测定最小不干扰稀释倍数.结果见表1. 表1左旋奥硝唑葡萄糖注射液最大不干扰浓度的测定 经以上预试验可知,用0.125EU/ml灵敏度的鲎试剂进 行试验,原液,2及4倍稀释液均无干扰.即本品最小不干扰 稀释倍数为1. 2.3鲎试剂灵敏度的复核 将细菌内毒素国家工作标准品用BET用水稀释成 2.00,1.00,0.50,0.25系列浓度.按中国药典2005年版二 部附录操作,结果见干扰试验. 2009年4月第16卷第7期药品鉴-j也一 2.4干扰试验 取湛江海洋生物制品厂的鲎试剂和细菌内毒素国家工 作标准品,分别用BET水,2倍稀释液稀释细菌内毒素至 2.00,1.00,0.50和O.25k,依法操作,结果见表2. 表2左旋奥硝唑葡萄糖注射液的干扰试验 内毒素浓度(EU/m1)0.50,250.125O.0625阴性管 Es内毒素 标准溶液 Eto80820稀释的 内毒素标准溶液 EtO80822.稀释的 内毒素标准溶液 Eto80824稀释的 内毒素标准溶液 按下面的公式计算:Es或Et=antilg【(x1+X2+x3+X4)/4】, x1,x2,x3,x4为反应终点浓度的对数值0g).结果Es=0.25 EU/m1.Es在0.125,0.500EU/ml之间,表明该鲎试剂灵敏度符 合规定:Et(080820)=0.354EU/ml,Et(080822)=0.297EU/rnl,Et (080824)=O.354EU/ml均在0.5,2.0Es之间.即0.125,0.500 EU,m1之间,说明供试品在稀释倍数为2倍时不存在干扰. 另取湛江安度斯生物有限公司的鲎试剂和细菌内毒素 国家工作标准品,分别用BET水,2倍稀释液稀释细菌内毒 素至2.00,1.00,0.50和0.25,依法操作,结果见表3. 表3左旋奥硝唑葡萄糖注射液的干扰试验 内毒素浓度(EU/m1)0.50.250.1250.0625阴性管 Es内毒素 标准溶液 Et080820稀释的 内毒索标准溶液 Et080822稀释的 内毒素标准溶液 Et080824稀释的 内毒素标准溶液 结果经计算,Es=0.25EU/ml,Es在0.125,0.5EU/ml,表 明该鲎试剂灵敏度符合规定;Etf080820)=0.354EU/ml,Et f080822)=0.354EU/ml,Et(080824)=0.42EU/ml,均在0.5-2.0 Es.即0.125,0.500EU/m1.说明供试品在稀释倍数为2倍时 不存在干扰. 2.5样品的细菌内毒素检查 取两种鲎试剂以及细菌内毒素国家工作标准品,将样品 稀释2倍.依法进行细菌内毒素检查,结果见表4.结果表明: 用两个厂家的鲎试剂,所检的3批样品均呈阴性,且样品阳 性管无干扰. 表4左旋奥硝唑葡萄糖注射液的细菌内毒素检查结果 3讨论 一 种药品是否可以用细菌内毒素检溅法来替代热原法 检查首先要证明样品本身是否存在干扰,就须进行干扰试 验.然后要确定出供试品在何有效浓度范围内进行细菌内毒 素检查时可以既克服干扰因素又能客观地反映被检测品所 含内毒素的量是否符合该药品细菌内毒素限值.为确证供试 品在某一浓度对内毒素和鲎试剂的胶凝反应不存在干扰,本 试验取用两个不同厂家生产的鲎试剂分别对3个批号的供 试品进行相同浓度的重复试验.结果在本试验条件下,样品 原液,2倍及4倍稀释液均无干扰.表明本实验可以有效控 制其质量和保证临床用药安全有效.干扰试验进一步证明样 品在稀释倍数为2倍时,对细菌内毒素检查无干扰.因此本 品可用细菌内毒素检查代替热原检查,并将左旋奥硝唑葡萄 糖注射液的细菌内毒素限值规定为:应小于0.5EU/ml. 【参考文献】 f1]陈忆冰,李健和,黎银波,等.左旋奥硝唑氯化钠注射液细菌内毒素 检查IJ]-西北药学杂志,2007,22(3):141—142. 『2]尹银嘉,方淑贤.杜光.奥硝唑氯化钠注射液细菌内毒素的检测『J1l广 东药学院学报.2003,19(3):243—244. 『3]朱群英,傅兰,李百华.奥硝唑葡萄糖注射液内毒素检测法实验研究 【J].西北药学杂志,2003,18(4):169—170. 『4]林静.奥硝唑氯化钠注射液的细菌内毒素检查『J1.解放军药学学报, 2005,21(1):77—78. 『5]杨春华.盐酸加替沙星注射液与奥硝唑氯化钠注射液配伍稳定性观 察fJ1.中国医药导报,2007,4(23):98—99. 『6]谭建中,殷卫清.奥硝唑新剂型及I临床应用fJ1.I临床和实验医学杂志, 2006,5(11):1853. 『7】董建辉,孔少珊,熊镇南.注射用头孢噻肟钠与奥硝唑氯化钠注射液配 伍后的稳定性研究『J].I临床和实验医学杂志,2007,6(1):57—58. (收稿日期:2009—02—08) CHINAMODERNMEDICINE屯国当代医药45 一一一一一一,,,, 一一一+++++一一 ++++++++++ 一一一一一一一一 一一一一一一一一一一一一一一一一 一一一一一一一一一一一一一一一一 ++++++一一++一一+一一一 ++++++++++++++++