肝愈胶囊对实验小鼠单核巨噬细胞吞噬廓清影响及保肝降酶的作用-药学论文

肝愈胶囊对实验小鼠单核巨噬细胞吞噬廓清影响及保肝降酶的作用-药学论文 【摘要】 目的通过实验观察肝愈胶囊对实验小鼠单核巨噬细胞 (RES)吞噬廓清能力影响及保肝降酶的作用。方法采用碳粒廓清法 和,-氨基半乳糖(GalN)急性肝损伤法，分别测定吞噬活性指数和小 鼠血清中转氨酶,ALT,含量。结果肝愈胶囊能提高RES吞噬能力， 增强实验小鼠非特异性免疫能力。对GalN急性肝损伤所引起ALT升 高，具有明显的抑制作用。结论肝愈胶囊具有促进小鼠非特异性免疫 功能和对化学物质引起的小鼠急性肝损伤具有保肝降酶作用。 【关键词】肝愈胶囊;单核巨噬细胞;非特异性免疫;保肝降酶 Abstract: ObjectiveToobservetheeffectofGanyuCapsuleonphagocyticclearanceactivityoftheRESinmiceanditsfunctionofprotectingliverandloweringtransaminase.MethodsBythemethodoftheclearanceofcarbonparticlesandtheacutehepaticfailureinducedwithD-GalNinmice,thephagocyticindexandtheserumtransaminaseactivityweredetermined,respectively.ResultsThephagocyticabilityofmononuclearmacrophageswasenhanced,whichshowedthatnonspecificimmunefunctionofmicewasimproved.TheelevationofserumALTcausedbytheacutehepaticfailurewasinhibitedsignificantly.ConclusionGanyuCapsulehastheeffectsofimprovingnonspecificimmunefunction,protectingliverandloweringtransaminaseinducedbychemicalsinmice. Keywords: GanyuCapsule;RES;Nonspecificimmune;Protectingliverandloweringtransaminase 肝愈胶囊由黄芩、黄芪、丹参、五味子等药组成，其主要功效为清热解毒，益气活血，用于治疗慢性肝炎。为了探讨其调节免疫力及保肝降酶作用机制，对该药进行了网状内皮系统对血流中惰性碳粒的吞噬廓清能力及保肝降酶方面的药效学研究。 1器材 1.1药物 肝愈胶囊由中医药研究院提供，配制成1.0g/ml的溶液;联苯双酯滴丸(1.5mg/粒)山东德州制药厂生产，配制成1.0g/ml的溶液备用。 1.2动物 清洁级昆明种小鼠，3周龄，(20.0?2.0)g，雌雄各半，黑龙江中医药大学实验动物中心提供，合格证号09-2-2。 1.3试剂 D-氨基半乳糖北京科技协作中心粗细化学分部产品,临用时以生理盐水配成10%溶液;GPT/ALT试剂盒，长春汇力生物技术有限公司产品;都氏试剂:碳酸氢钠1.0g，氰化钾0.05g，高铁氰化钾0.2g，加双蒸馏水溶解至1000ml;印度墨汁，北京西中化工厂。碳酸钠为分析纯，哈尔滨市化工试剂厂，配成0.1%的溶液。 1.4仪器 722型分光光度计，山东高密分析仪器厂产品;KY2000半自动生化分析仪，日本岛津公司产品，电子天平,AB204-N,、,PL202, 梅特勒托利约集团产品。 2方法与结果 2.1对小鼠非特异性免疫功能的影响-碳粒廓清指数测定,1,小鼠适应性饲养一周后，随机分为5组，每组10只，即生理盐水对照组，联苯双酯组(5.85mg?kg-1)，肝愈胶囊高、中、低剂量组(分别为2.5,1.25,0.63g/kg，相当于临床拟用剂量的50，25，10倍,，灌胃给药1次/d，连续给药7d，末次给药后24h，自小鼠尾静脉注射印度墨水0.1ml/10g,印度墨汁用1%明胶稀释4倍,,然后分别于30s和6min，从各鼠眶后V丛取血0.025ml，溶于2ml0.1%碳酸钠溶液中，摇匀，于675nm处比色，测定OD值。同时处死小鼠，取肝脏和脾脏称重，按下列公式计算碳粒廓清指数K值和吞噬指数α。结果见1。表1肝愈胶囊对小鼠单核巨噬细胞吞噬功能的影响(略) K=,lgC1-lgC2,/(T2-T1,,α=K1/3×(体重/重+脾重) 肝愈胶囊3个剂量组均能显著增强小鼠RES吞噬功能，吞噬指数显著优于联苯双酯组，K值和ɑ值均见明显增高，表明本品可能具有提高机体非特异性免疫功能的作用。 2.2对D-氨基半乳糖所致小鼠实验性肝损伤的保护作用,2,小鼠适应性饲养1周后，随机分成6组，每组10只,分为正常对照组、模型组、联苯双酯组、中药低剂量组(0.62g?kg-1?d-1)、中剂量组(1.25g?kg-1?d-1)、高剂量组(2.5g?kg-1?d-1)。分别连续灌胃给药7d，1次/d，正常对照组和模型组给予等剂量的生理盐水。末次给药后1h，除正常对照组以外，其余各组小鼠一次性腹腔注射D-氨基半 乳糖(GalN)800mg?kg-1造模。造模后禁食不禁水，对比观察并详细记录小鼠造模前后的一般状态。24h后称体重，眼球取血，分离血清加试剂反应后检测ALT。然后脱颈处死,取肝脏称重，并统一取肝左叶用10%甲醛溶液固定，常规石蜡包埋切片(片厚约5μm)，进行HE染色后光学显微镜下观察肝组织病理学变化。 造模前各组小鼠状态良好,进食及饮水正常,大便成形，黄褐色，毛色润泽。造模后，除正常对照组以外，其余各组小鼠均表现为不活泼、聚堆、反抗性增强、反抗力减弱，多数小鼠尾部有伤痕，进食量及饮水量均明显下降，大便稀软，或不成形，黄绿色，毛色不润泽，体重明显下降，符合人类急性肝炎时的主要表现。正常对照组造模前后无明显变化。正常组镜下可见:肝细胞索结构清晰，肝小叶结构正常，未见肝细胞变性、坏死等病理变化。模型组肝细胞弥漫性坏死，肝细胞境界不清楚，呈水样变性，有明显的点、灶状坏死，严重的呈带状坏死，间质内可见淋巴细胞和单核细胞的浸润。联苯双酯组和肝愈胶囊低剂量组肝细胞损伤程度较模型组略轻,仍有点状及带状坏死,并伴有间质炎;中剂量组肝细胞无明显带状坏死，但有轻度点、灶状坏死和间质炎;高剂量组的肝脏病变明显减轻，无明显的点、灶状坏死,肝细胞较正常。 用KY2000半自动生化分析仪测定ALT含量，检测波长520nm，统计学用t检验处理。实验结果见表2。表2肝愈胶囊对氨基半乳糖 致急性肝损伤的保护作用(略) 在对抗氨基半乳糖急性肝损伤实验中，模型组血清中ALT含量明显升高，肝愈胶囊3个剂量组均具有显著的抗肝损伤作用(P，0.01)，其中在对抗ClLN致急性肝损伤保护作用强度上，3个剂量组与阳性对照药联苯双脂组相近，无显著性差异(P>0.05)。上述实验结果表明，肝愈胶囊对氨基半乳糖所致肝损伤具有显著的保肝降酶作用。 3讨论 肝愈胶囊能明显增强小鼠单核巨噬细胞的吞噬活力，使单位时间内血液中碳粒清除速率加快，通过提高小鼠单核-巨噬细胞碳廓清的能力，提高实验小鼠非特异性免疫能力。 GalN所致肝损伤模型的肝组织病理学特征与人类病毒性肝炎极为相似,且有极好的重现性和一定的可逆性,1,。肝脏病理切片检查证实肝愈胶囊能明显减轻肝细胞水肿、变性、坏死以及炎症反应,能够拮抗CalN对肝细胞造成的损伤。显著降低血清中ALT水平，对GalN所致的急性肝损伤具有明显的保肝降酶作用。 【参考文献】 ,1,陈奇.中药药理研究方法学,M,.北京:人民卫生出版社，2006:759，847. ,2,杨新波，黄正明，曹文斌，等.CCL4,D-GalN,ANIT致小鼠肝损伤模型的实验研究,J,.世界华人消化杂志,1998,6(1):19.