禽流感、新城疫重组二联活疫苗效力检验

禽流感、新城疫重组二联活疫苗效力 一、 新城疫部分： 鸡胚检测法： 1. 试验：疫苗乳化瓶、标签、1.5ml一次性注射器、扎孔器、蜡块、10日龄SPF鸡胚、37°孵化器 2. 试验试剂：试验用疫苗、无菌生理盐水 3. 试验方法：a.将制作好的试验用疫苗按瓶分装，标签写明羽份               b.将疫苗用无菌生理盐水稀释至一羽份/ml，在进行10倍系列稀释，取三个 适宜稀释度分别尿囊腔内接种10日龄SPF鸡胚5枚，每枚0.1ml，接种后 置于37°继续孵育120小时。               c.期间弃去所有死亡鸡胚不计。至120小时，取出所有活胚，逐枚收获鸡胚 液，分别测定红细胞凝集价。               d.凝集价不低于1:160（微量法1:128）者为感染，计算EID50。每羽份病毒 含量应≥106.0EID50。 鸡检测法： 1. 试验材料：针管、10日龄SPF鸡 2. 试验试剂：试验用疫苗 3. 试验方法： a.用10日龄SPF鸡10只，各滴鼻接种疫苗0.01羽份，另外3只作对照。           b.接种后14日，连同对照鸡各肌肉注射鸡新城疫病毒强度105.0EID50，连 续观察14日。对照鸡应全部发病死亡，免疫鸡应至少保护9只。 二、 禽类流感（H5亚型）部分： 血清学方法： 1. 实验材料：2ml一次性注射器、96孔板、10日龄SPF鸡10只 2. 试验试剂：试验用疫苗 3. 试验方法：a.用10日龄SPF鸡10只，每只滴鼻接种疫苗0.05ml（含1/10羽份），接种 后3周，连同对照鸡5只，分别采血，分离血清，用禽流感病毒H5亚型抗 原测定血凝抑制（HI）抗体。 b.对照鸡HI抗体抗体全部阴性（HI不高于1:2），免疫鸡HI抗体几何平均滴 度（GMT）不低于1:16，且至少7只鸡HI抗体滴度大于1:16. 免疫攻毒方法： 1. 实验材料：2ml一次性注射器、10日龄SPF鸡10只 2. 试验试剂：试验用疫苗 3. 试验方法：a.用10日龄SPF鸡10只，每只滴鼻接种疫苗0.05ml（含1/10羽份），接种 3周后，连同对照鸡，分别鼻腔接种强毒0.1ml，连续观察14日，对照鸡应 全部发病死亡，免疫鸡应全部健活。 三、H5亚型禽流感HA抗原蛋白达的免疫荧光检测