茶毛虫核型多角体病毒Bt混剂的作用特性

茶毛虫核型多角体病毒Bt混剂的作用特性 第34卷第2期 2007年4月 植物保护 ACTAPHYT0PHYLACICASINICA Vo1.34No.2 Apr.2007 茶毛虫核型多角体病毒Bt混剂的作用特性 冷杨肖强h殷坤山 (1.中国农业科学院茶叶研究所,杭州310008;2.全国农业技术推广服务中心,北京100026) 摘要:用生物测定的方法,研究了茶毛虫核型多角体病毒(EpNPV)与苏云金杆菌(Bt)配制而成的 茶毛虫核型多角体病毒Bt混剂(EpNPV—Bt)的增效作用,速效作用,拒食作用和兼治作用.结果表 明,在16,28?温度范围内,EpNPV—Bt对茶毛虫的作用在整个死亡周期表现为相加作用,协同毒 力指数主要分布在一20%,20%之间,其中16,19,28?的死亡前期表现为增效作用,协同毒力指 数大于20%,22?的死亡中期表现为拮抗作用,协同毒力指数小于一 20%.EpNPV—Bt对茶毛虫 LT为5.6天,比EpNPV减少3.8天,幼虫的死亡速度提高了1.8 倍.EpNPV—Bt对茶毛虫的拒食 效果明显,取食量比EpNPV减少66.2%.EpNPV—Bt对茶刺蛾,用克 尺蠖和茶尺蠖等茶树害虫具有 兼治作用,其中对茶刺蛾的死亡率达85.8%. 关键词:茶毛虫核型多角体病毒;苏云金杆菌;混剂;增效作用 TheeffectspecialtyofEpNPV—Btpreparation shan LENGYang,XIAOQianghYINKun— (1.TeaResearchInstitute,ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Hangzhou310008,Zhejiang Province,China;2.NationalAgro—techExtensionandServiceCenter,Beiji ng100026,China) Abstract:Bioassaywereconductedtostudythesynergism,immediatefunctioning,anti—feedingeffect anddualeffectofEpNPV—Bt,themixtureofEuproctispseudoconspersaStrandnuclearpolyhedrosisvirus (EpNPV)andBacillusthuringiensis(Bt).Underthetemperaturerangedfrom16~Cto28~C,theresults showedthattheEpNPV—BtagainstthelarvaeofEuproctispseudoconspersaStrandpossessedjointactionat thewholedeathperiod,thedynamicofsynergictoxicitywasmostlydistribute dbetween-20%to20%. Hereintoatthedeathinitialperiodofthe16?,19?and28? treatments,thedynamicofsynergictox— icitywasmorethan20%whichshowedsynergism.Atthedeathmiddleperiodof22?treatment.thedy— namicofsynergictoxicitywaslessthan一 20%,whichshowedantagonism.ComparedwithEpNPV,the immediatefunctioningandanti—feedingeffectoftheEpNPV—Btwasevide nt.TheLT30(30%lethaltime) oftheEpNPV—BtagainstthelarvaeofEuproctispseudoconspersaStrandWaslessenedfrom9.4dto5.6d, andthefoodintakewasdecreasedto66.2%.ItalsoshowedagooddualeffectoftheEpNPV—Bttocon— trolthelarvaeofIragoidesfasciata(Moore),JankowskiaathletaOberthurandEctropisobliqueWarren whicharethemainteapests.ThemortalityoftheEpNPV—Btagainstthelarva eofIragoidesfasciata (Moore)wasupto85.8%. Keywords:Euproctispseudoconspersanuclearpolyhedrosisvirus;Bacillusthuringiensis;mixture;syn— ergismeffect 基金项目:国家”十五”科技攻关项目(2001BAS021302),浙江省科技 (20o3c320o3) 作者简介:冷杨,男,1982年生,硕士研究生,主要从事茶树害虫生物防治研究,现在全国农业技术推广服务中心工作,email:yang—leng@ sohu.COB 通讯作者 (Authorforcorrespondence),email:xqtea@vip.163.COB,Tel:0571—86650801 收稿日期:2006—07,20 植物保护34卷 茶毛虫核型多角体病毒(EpNPV)是茶树重要 鳞翅目害虫茶毛虫EuproctispseudoconspersaStrand 的主要病原微生物,应用茶毛虫核型多角体病毒防 治茶毛虫幼虫具有良好的效果,并已在茶园中进行 了大面积的示范试验?j.然而在昆虫病原病毒防 治实践中还存在着一些问题,其一是病毒感染幼虫 后潜伏期长,幼虫死亡速度慢,前期幼虫仍然取食, 对茶叶产量构成了影响;其二是病毒的专一性强,杀 虫谱窄.而苏云金杆菌(Bt)作为一种细菌类生物 农药,杀虫谱较广,速效性也较好,其与昆虫病原病 毒混配,可以克服病毒使用中存在的问题础J.作 者就苏云金杆菌与茶毛虫核型多角体病毒混配后, 对茶毛虫的增效性,速效性,拒食性以及兼治其它茶 树害虫等作用进行了研究,以期为EpNPVBt的应 用提供依据. 1材料与方法 1.1材料 虫源:从浙江省内茶园采集茶毛虫Euproctis pseudoconspersaStrand,茶尺蠖EctropisobliqueProut, 用克尺蠖JankowskiaathletaOberthiir,茶刺蛾Ira. goidesfasciataMoore等害虫,在室内进行大量饲养 后,取2龄中期幼虫作为供试虫源. EpNPV:由中国农科院茶叶研究所通过室内感 染茶毛虫幼虫进行病毒的大量繁殖,再离心提纯获 得EpNPV原液.原液为悬浮液,乳白色略带淡红, 静止后病毒沉淀在底部,摇动后即可分散.无细菌 和杂质.病毒含量为2×10个多角体(PIB)/mL. Bt:由江苏扬州绿源生物化工有限公司提供,原 药为乳黄悬浊水剂,效价为2×10IU/p~L. 1.2试验方法 1.2.1荼毛虫病毒制剂的配制 EpNPV水剂:称取饮料增稠剂B5g,加人500 mL蒸馏水中,不断搅拌煮沸,完全溶解后再加人 500mL蒸馏水搅匀,即成0.5%的饮料增稠剂B水 溶液,冷却至室温时加人2×10m个茶毛虫病毒多角 体,即成EpNPV水剂.水剂中的病毒含量为2×10 PIB/mL. EpNPV.Bt混剂:通过EpNPV和Bt不同配比的 筛选试验,选用共毒系数最高的一种组合作为供试 混剂,即在1000mLBt中直接加人2×10加个茶毛虫 病毒多角体.混剂有效成分含量:病毒为2×10 PIB/mL,Bt为2×10IU/p~L. 1.2.2茶毛虫幼虫的饲毒 经多次试验,EpNPV,Bt和EpNPV—Bt稀释1000 倍(即实际浓度分别为EpNPV2×10PIB/mL,Bt2 IU/p~L和EpNPV—Bt2×10PIB/mL一2IU/p~L)对茶 毛虫2龄幼虫的效果均较好,也比较经济,因此本研 究中茶毛虫幼虫的饲毒均采用1000倍液的供试浓 度.方法是将新鲜茶树枝叶放人配制好的供试药液 中浸湿,自然晾干后放人直径5am玻璃罐头瓶中, 再接人幼虫若干,瓶口用白纸和橡皮筋扎紧,并加玻 盖保湿.根据试验要求置于相应的环境条件中,在 幼虫取食有毒叶3天后,更换无毒新鲜茶树叶片继 续喂饲. 1.2.3EpNPV—Bt的增效作用 采用药剂,温度双因子复合试验.设3种药剂 EpNPV—Bt,EpNPV,Bt,5种温度16,19,22,25,28?, 共15个处理.按1.2.2进行茶毛虫的饲毒,每处理 3次重复,每瓶为1次重复,每重复接人幼虫50头 左右.根据试验要求,将各处理的幼虫分别放人不 同温度的恒温光照培养箱中饲养.逐日调查每重复 的死虫数,计算死亡率,用Sakai公式法计算协同毒 力指数J.并绘制出不同温度下随时间变化的协 同毒力指数分布曲线图. Pm=1一(1一Pa)(1一Pb) Pc——Pm 协同毒力指数(%):—_×100 式中::EpNPV.Bt的理论死亡率;Pc:EpNPV—Bt 的实际死亡率;Pa:EpNPV的死亡率;Pb:Bt水剂 的死亡率. 当协同毒力指数I>20%表明有增效作用;协同 毒力指数?一20%表明有拮抗作用;协同毒力指数 在一20%,20%之间为相加作用. 1.2.4EpNPV.Bt对茶毛虫的速效作用 设EpNPV.Bt和EpNPV水剂2个处理,按1.2.2 进行茶毛虫的饲毒,每处理3次重复,每瓶为1次重 复,每重复接人幼虫20头左右,放人同一条件的恒 温光照培养箱中饲养.逐日检查每重复的死虫数, 计算当天幼虫的死亡率,绘制出各处理当天死亡率 的时间分布图.并建立死亡率概率值与时间对数值 的回归方程,计算2种制剂处理的LT,.及制剂间的 杀虫速率比值. 1.2.5EpNPV.Bt对茶毛虫的拒食作用 设EpNPV.Bt,EpNPV水剂及喂饲干净茶树鲜叶 的健康茶毛虫幼虫对照和校正鲜叶自然失水率的空 2期冷杨等:茶毛虫核型多角体病毒Bt混剂的作用特性l79 白对照,共4个处理.EpNPV—Bt和EpNPV水剂2 个处理,按1.2.2进行茶毛虫的饲毒,每重复接人幼 虫20头左右.每处理设3次重复,每瓶为1次重 复.每次更换叶片时,称取残存叶片和加入叶片的 重量,获得累计取食量.按取食量的不同计算拒食 率?. 拒食率(%)=[(对照组取食量一处理组取食 量)/对照组取食量]×100 1.2.6EpNPV—Bt对茶树害虫的兼治作用 按1.2.2方法,用经EpNPV—Bt药液处理的茶 树鲜叶喂饲茶尺蠖,用克尺蠖和茶刺蛾等3种茶树 害虫.每一种害虫为1个处理,每处理设3次重复, 每瓶为1次重复,每一重复仅接人一种害虫的2龄 幼虫2O头以上.药后3,5,7天调查死虫数,计算幼 虫死亡率. :? 一 』\ 一 一 l一.. 22.C — r一一 l 一 / ?一 \ - /\一 一 \一\L/ 2结果与分析 2.1EpNPV-Bt的增效作用 不同温度下由EpNPV和Bt混配后的EpNPV— Bt对茶毛虫幼虫的协同毒力指数分布见图1.结果 显示,EpNPV—Bt对茶毛虫幼虫作用的整个死亡周期 中的协同毒力指数是动态的,最终表现为相加作用. 在5种温度条件下,EpNPV—Bt对茶毛虫幼虫的协 同毒力指数主要分布在一20%,20%之间,表明 EpNPV.Bt为相加作用;16,19和28~C温度下,幼虫 死亡前期EpNPV—Bt的协同毒力指数大于20%,表 明具有增效作用,又以16~C时的增效作用最强,毒 力指数超过了1O0%;22oC时,在幼虫死亡中期 EpNPV.Bt的协同毒力指数小于一20%,表明具有拮 抗作ttemperatures 踟?彻加0伽?如加m0加如? ?如???加O加? 吾l昌矗Jou—uI0 一摹一艚匡盎 ?加0加?? 喜u一蓉l昌矗曼?Joul?曼0 一一艚厦$ ?如如m0m加如?-一._ lx.u【昌矗ll.u—L【ll,(0 一一艚匿$ 植物保护34卷 2.2EpNPV-Bt对茶毛虫的速效作用 结果显示,取食EpNPV-Bt的幼虫呈现2个死 亡高峰,前一个死亡高峰主要是由Bt对幼虫的作用 效果快而形成的,后一个死亡高峰则主要是由病毒 致死产生的;取食EpNPV的幼虫仅呈现1个死亡高 一 焉 0 磺 U 峰,这是由病毒致死产生的(图2).从2种病毒制 剂对茶毛虫的致死30%时间(LT,0)来看,EpNPV-Bt 为5.6天,比EpNPV的9.4天减少了3.8天,幼虫 的死亡速度提高了1.8倍,表明EpNPV-Bt具有明 显的速效作用. 饲毒后天数Daypostvirusinoculation(d) 图2茶毛虫幼虫取食2种病毒制剂后死亡率的时间分布图 Fig.2MortalitydistributionoftimeoftwoviruspreparationtoEuproctispseu doconspersa 2.3EpNPV-Bt的拒食作用 结果显示,取食EpNPV-Bt后,茶毛虫幼虫的食 叶量明显减少,且随着饲毒时间的增加,食叶量减少 的趋势更加明显.至幼虫停止取食时(药后19 天),取食EpNPV-Bt的茶毛虫幼虫食叶量减少 87.9%,与取食EpNPV的幼虫比较,拒食率达到 66.2%(表1).表明EpNPV-Bt对茶毛虫幼虫具有 明显的拒食作用. 表1EpNPV-Bt对茶毛虫幼虫的拒食效果 Table1Anti--feedeffectofEpNPV--BttothelarvaeofEuproctispseudoconsp ersa 2.4EpNPV-Bt对其它茶树害虫的兼治作用 结果显示,EpNPV-Bt对茶尺蠖,用克尺蠖和茶 刺蛾均具有兼治作用,防治效果在18.3%,85.8% 之间,其中对茶刺蛾的防治效果最好,药后7天的幼 虫死亡率达85.8%(表2). 表2EpNPV-Bt对茶尺蠖,用克尺蠖和茶刺蛾的防治效果 Table2EffectofEpNPV-BtoncontrolofEctropisoblique,Jankowskiaathleta andIragoidesfasciata 注:大写字母表示经Duncan氏新复极差检验在0.01水平上的差异显着性.Note:edifferentlettersindicatethesignificantdifference atthelevelof0.01byDuncan’Smultiplerangetest. 2期冷杨等:茶毛虫核型多角体病毒Bt混剂的作用特性l8l 3讨论 昆虫病原病毒与Bt混配,仍然保持了生物农药 的特性,因此常被作为一种开发昆虫病毒生物农药 的有效方法加以利用…J.而病毒作为活体微生物, 与一般化学农药的作用特点是不一样的,其在昆虫 体内增殖时受温度和时间等因素的影响,因而病毒 对害虫的防治效果会随温度和时间的变化而变 化.有关昆虫病毒与Bt混用后的作用特性,前 人研究报道结果存在差异.徐健等?研究认为茶 尺蠖核型多角体病毒与Bt混用后具有增效作用,商 建农等?研究报道茶尺蠖核型多角体病毒与Bt混 用后存在拮抗作用.原因是这些结果均在相同温度 和同一时间下研究获得的.本研究结果显示茶毛虫 核型多角体病毒与Bt混配后,在不同温度的整个死 亡周期内的协同毒力指数是动态的,以相加作用为 主,同时也存在着增效作用和拮抗作用.这与病毒 的作用特点是相吻合的,同时也进一步验证了前人 研究结果的差异性所在. 在我国的多数地区,茶毛虫一年发生2代,幼虫 的发生高峰期一般在4月中旬和7月中旬,此时的 气温与EpNPV.Bt具有增效作用的16~C和28?温度 范围比较接近?,因此采用EpNPV—Bt防治茶毛虫, 可以充分发挥其增效作用.本研究结果还显示,与 单用茶毛虫核型多角体病毒相比,用EpNPV—Bt防 治茶毛虫可以明显加快幼虫的死亡时间和减少幼虫 的食叶量;同时EpNPV—Bt对茶刺蛾,用克尺蠖,茶 尺蠖等茶树害虫具有一定的兼治作用,这将有利于 茶毛虫病毒生物农药在生产上推广应用. 参考文献(References) 1齐义鹏.叶林柏.刘岱岳,等.用茶毛虫核型多角体病毒防治茶 毛虫.生物防治通报,1986,2(1):43 2孙椒德,许德元,张益民.茶毛虫核型多角体病毒福建毒株及其 在茶园应用的研究.福建省农科院,1988,3(2):1—9 3孙椒德,吴光远,林阿祥,等.茶毛虫核型多角体病毒”福建一 号”毒株杀虫剂推广示范报告.茶叶科学简报,1991,(2):20— 22 4殷坤山,肖强.茶毛虫病毒杀虫剂田间使用技术研究.中国茶 叶,2004,26(3):18一l9 5徐惠清,谭济才,邓欣.苏芸金杆菌制剂防治茶毛虫茶尺蠖田间 药效试验报告.茶叶通讯,1999,(2):26—27 6许文耀.添加物提高Bt制剂杀灭小菜蛾的速效性.中国蔬菜, 2004,(1):36—37 7BellMR.RomineCL.HeliothisvirescensandHzea(Lepidoptera: Noctuidae):dosageeffectsoffeedingmixturesofBacillusthuring— iensisandanuclearpolyhedrosisvirusonmortalityandgrowth.En— vironmentalEntomology,1986,15(6):1161—1165 8PingelRL.LewisLC.FieldapplicationofBacillusthuringieusis andanagraphafaleiferamultiplenucleopolyhedrovirusagainstthe corneal-WOlaI1.JournalofEconomicEntomology.1997,90(5): ll95一l199 9慕立义(主编).植物化学保护研究方法.北京:中国农业出版 社,1994 l0魏辉,侯有明,杨广,等.非嗜食植物次生物质对小菜蛾产卵驱 避和拒食作用的研究.应用生态,2004,15(3):473—476 11殷坤山,陈华才,肖强,等.茶尺蠖核型多角体病毒制剂的试制 与推广应用.中国病毒学,2000,15(杀虫微生物专刊):8l一 83 l2叶恭银,胡萃.温度对茶尺蠖核型多角体病毒增殖动态的影 响.病毒学杂志,1990,5(4):397—402 l3徐健,肖强,刘琴,等.苏云金杆菌与EoNPV混用的增效作用. 江苏农业,2006,22(3):243—247 l4商建农,朱俊庆,叶恭银.茶尺蠖核型多角体病毒与农药混用 试验.茶叶,1999,25(2):80—82 l5朱俊庆主编.茶树害虫.北京:中国农业科技出版社,1999