【doc】RP-HPLC法测定海马强肾丸中毛蕊花糖苷的含量

【doc】RP-HPLC法测定海马强肾丸中毛蕊花糖苷的含量 RP-HPLC法测定海马强肾丸中毛蕊花糖苷 的含量 阴性 对照液和2.2何首乌,丹参的薄层鉴别项下供试品 溶液各1O,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘 合剂的硅胶G薄层板上,以醋酸乙酯一甲醇一水 (100:19:13)为展开剂,在1O?以下展开,取出, 晾干,喷以1%三氯化铝乙醇溶液,在105~C烘干, 置紫外光灯(365nm)下检视.供试品色谱中,在 与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑 点,见图3. 图3甲基橙皮苷的TLC图谱 1.甲基橙皮苷对照品;2.供试品;3.阴性对照 3讨论 本文所述2.1法能将人参,黄芪同时在同一块 薄层板上检出,所述2.2法能将何首乌,丹参在同 一 块薄层板上同时进行薄层鉴别,方法简便,快速. 本文所述几个鉴别斑点清晰,分离效果好,专 属性强,而且均进行阴性对照实验,阴性对照液中 无干扰. 参考文献: [1]卫生部药品Is].ws3一B一26O5—97 RP—HPLC法测定海马强肾丸中毛蕊花糖苷的含量 旭红,乌云,林燕(内蒙古药品检验所,呼和浩特市010020) 中图分类号:R927.2文献标识码:A文章编号:1002—7777(2004)05—0297—02 中成药海马强肾丸主要由肉苁蓉,人参,山茱 萸,鹿茸,补骨脂,海马等三十味药材制成.本文 采用反相高效液相色谱法测定了该药中肉苁蓉主成 分毛蕊花糖苷的含量,经方法学考察和对3批样品 的测定结果明,本法操作简单,方法专属性强, 重现性好,结果准确可靠. 参照《中国药典》2000年版一部肉苁蓉项下 的含量测定方法,对海马强身丸中肉苁蓉的主要成 分毛蕊花糖苷建立了含量测定方法,作为本制剂生 产及检验的质量控制指标. 1仪器与试药 LC一6AHPLC泵(岛津),AlhechUVIS一200 型器,CHROM1TEK色谱工作站. 乙腈,甲醇均为色谱纯,水为高纯水.其它试 剂均为分析纯. 毛蕊花糖苷对照品(批号:1530—200101,中 国药品生物制品检定所). 2方法与结果 2.1色谱条件 色谱柱:PhenomenIrregularCI8(200mmX 4.6mm,10tun);流动相:乙腈一甲醇一1%醋酸 (10:15:75);流速:1.0ml?min,;柱温:室温;检 测波长:250nm.理论板数按毛蕊花糖苷峰计算, 应不低于2000. 2.2供试品溶液及对照品溶液的制备 2.2.1供试品溶液及阴性对照液的制备 取本品约9g,剪碎,精密称定,置100ml棕色 量瓶中,精密加入流动相50ml,密塞,称定重量 ? 298?中国药事2004年第18卷第5期 浸泡两小时,并时时振摇,再超声处理60分钟, 放冷,密塞,再称定重量,用流动相补充减失的重 量,摇匀,作为供试品溶液. 另取按处方量并以相同制备的阴性对照 (缺肉苁蓉)适量,按供试品溶液制备方法制得阴 性对照液. 2.2.2对照品溶液的制备 取毛蕊花糖苷对照品适量,加流动相制成每 lml含12~tg的溶液作为对照品溶液. 2.3阴性对照试验 在上述色谱条件下,分别精密吸取对照品溶 液,阴性对照溶液,供试品溶液各1l,注入液相 色谱仪,测得结果为:阴性对照色谱图中在与毛蕊 花糖苷对照品以及供试品色谱图中相对应的保留时 间处无色谱峰出现,表明其它组分对毛蕊花糖苷的 测定无干扰.结果见图. 图海马强肾丸HPLC色谱图 a.阴性对照;b.供试品;C.对照品 2.4线性关系考察 取毛蕊花糖苷对照品4mg,精密称定,置25ml 棕色量瓶中,加流动相使溶解,并稀释至刻度,摇 匀(0.1628mg?ml),然后精密吸取0.5,1,2, 3,4,5ml溶液分别置25ml棕色量瓶中,加流动相 稀释至刻度,摇匀,各取lo~进样,按上述色谱 条件测定,以峰面积对进样量进行回归分析,结果 在0.0325t~g一0.325~g范围内呈良好的线性关系. 回归方程为:Y=889043.62X一8060.17,r= 0.9998. 2.5稳定性试验 取同一份供试品溶液,分别于0,2,4,8, 24h进样测定,冗sD为2.48%. 2.6精密度试验 取同一份供试品溶液,连续进样5次,测定毛 蕊花糖苷峰面积值.RSD为1.96%. 2.7重复性试验 取同一批号供试品(批号:20020291)5份, 各约9g,精密称定,分别按含量测定项下方法操 作,测定每份含量,结果平均含量为0.1318mg? g,,RSD为1.98%. 2.8加样回收试验 取本品(批号:20020291,含量0.1318mg? g)5份,各约4.5g,精密称定,置100ml棕色量 瓶中,各精密加入用流动相配制的毛蕊花糖苷对照 品溶液(浓度为0.1628mg?ml)2ml,再分别精密 加入流动相48ml,分别按含量测定项下方法操作, 测定每份含量,计算回收率,结果见表1. 表1毛蕊花糖苷加样回收试验结果 2.9样品含量测定 取本品按2.2.1供试品溶液项下的方法处理并 测定,三批样品的测定结果见表2. 表2样品中毛蕊花糖苷含量测定结果 3讨论 从表中三批样品测定的数据可见,海马强肾丸 中毛蕊花糖苷的含量在0.120.13mg?g之间,考 虑到每批药材质量不同,故暂定本品每1g含肉苁 蓉以毛蕊花糖苷(C.H.03)计,不得少于1.0mg. 用高效液相色谱法测定海马强肾丸中肉苁蓉的 含量,方法简便,准确,可作为海马强肾丸的质控 方法. 参考文献: [1]中国药典[S].一部,200O:103