镇静安神类中成药及保健食品中非法添加艾司唑仑的GC—MS-MS检测方法研究

镇静安神类中成药及保健食品中非法添加艾司唑仑的GC—MS-MS检测方法研究 镇静安神类中成药及保健食品中非法添加艾司唑仑的GC—MS/MS检测方法研究 [摘要] 目的 建立镇静安神类中成药及保健食品中非法添加艾司唑仑的GC-MS/MS检测方法。 方法 样品经甲醇提取，采用全扫描一级质谱，并结合谱库检索进行定性鉴别;采用二级选择反应检测(MRM)方式进行定量分析。 结果 全扫描一级质谱检测限为2 ng，艾司唑仑在1,100 μg/mL浓度范围内呈良好的线性关系。 结论 本方法快速、灵敏、准确，可用于中成药及保健食品中非法添加艾司唑仑的检测方法。 [关键词] 镇静安神;艾司唑仑;GC-MS/MS;中成药 [中图分类号] R284.1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721(2013)05(a)-0053-02 艾司唑仑为苯二氮卓类新型抗焦虑药，具有较强的镇静催眠作用，目前存在将其添加到镇静安神类中成药及保健食品中的现象，普通患者在不知情的情况下服用此类非法添加产品，易造成重复用药，过量用药，对人体健康造成危害，严重时甚至引发死亡[1-3]。目前对于镇静安神类中成药及保健食品中非法添加艾司唑仑的检测方法主要是薄层色谱法、液相色谱法、液质联用法等[4-8]，本实验建立了以气相色谱-质谱联用仪全扫描一级质谱，并结合谱库检索进行定性分析，以二级选择反应检测(MRM)进行定量分析的检测方法，可充分发挥气相色谱-质谱联用仪强大的数据库检索功能，及选择反应检测(MRM)灵敏、准确的优势，实现筛查、验证与定量三者的统一，可为药监部门“打假”提供可靠的技术保障。 1 仪器与试药 1.1 仪器 Agilent 7890/7000-GC/QQQ气相色谱-质谱联用仪(美国安捷伦公司)、NIST MS Search 2.0谱库。 1.2 试药 艾司唑仑对照品购自中国药品生物制品检定所(批号:171219-201003);甲醇等试剂为分析纯;标称具有镇静安神作用的保健食品为药监部门市场监管抽查样品。 2 方法与结果 2.1 定性方法 2.1.1 对照品储备溶液 精密称取艾司唑仑对照品适量，加甲醇溶解并稀释，制成浓度为每毫升含100 μg的溶液，即得。 2.1.2 对照品溶液A 取艾司唑仑对照品储备溶液适量，加甲醇稀释，制成浓度为每毫升含50 μg的溶液，即得。 2.1.3 供试品溶液 取样品内容物2粒(一次服用量)，研细，置于具塞锥形瓶中，加甲醇100 mL，称定重量，超声提取15 min，放冷至室温，以甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。 2.1.4 气相色谱条件 色谱柱:HP-5MS交联弹性毛细管石英柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm);载气:高纯氦气;体积流量:1.2 mL/min;气化室温度:280?;分流比:5?1;程序升温:150?，保持2 min，以30?/min升至290?，保持12 min。 2.1.5 质谱条件 电离方式:EI;电子轰击能量:70 eV;离子源温度:280?;接口温度:280?;扫描质量范围:50,400;NIST 2.0谱库。 2.1.6 检测方法 分别吸取上述对照品溶液A和供试品溶液各1 μL注入气相色谱-质谱联用仪，依法测定。 2.1.7 方法检测限 将对照品溶液逐级稀释，进样分析，以峰高信噪比3为检测限，测得艾司唑仑的检测限为2 ng。 2.1.8 专属性考察 取本品1次服用量，加入艾司唑仑对照品20 μg，按“2.1.2”项下方法制备供试品加标溶液。吸取供试品加标溶液1 μL注入气相色谱-质谱联用仪，依法测定， 结果明该方法专属性良好。 2.2 定量方法 2.2.1 对照品溶液B 取艾司唑仑对照品储备溶液适量，加甲醇稀释，制成浓度为每毫升含25 μg的溶液，即得。 2.2.2 供试品溶液 同“2.1.3”项下供试品溶液。 2.2.3 气相色谱条件 色谱柱:HP-5MS交联弹性毛细管石英柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm);载气:高纯氦气;体积流量:1.2 mL/min;气化室温度:280?;分流比:5?1;程序升温:150?，保持2min，以30?/min升至290?，保持12min。 2.2.4 质谱条件 电离方式:EI;碰撞能量30 eV;离子源温度:280?;接口温度:280?;选择反应二级扫描质谱检测方式(MRM)，前体离子m/z为259，产物离子m/z为205。 2.2.5 检测方法 分别吸取上述对照品溶液2和供试品溶液各1 μL注入气相色谱-质谱联用仪，依法测定。 2.2.6 曲线 依次分别精密量取对照品储备溶液各0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 mL置于10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，即得系列对照品混合溶液。在上述条件下注入气相色谱-质谱联用仪，色谱图。以对照品峰面积为纵坐标(Y)，以溶液浓度为横坐标(X)，采用平方模式拟合得艾司唑仑的回归方程为:Y = 1.228×104 X2 + 3.083 X - 8.811×103，r = 0.9997(n = 7)。结果表明，艾司唑仑在1,100 μg/mL范围内呈良好的线性关系。 2.2.7 精密度试验 吸取对照品溶液，依法测定，重复进样6次，测得峰面积，计算RSD值为2.8%，表明仪器精密度良好。 2.2.8 重复性试验 取样品，按“2.2.2”方法制备供试品溶液，平行制备6份，依法测定，测得峰面积，计算RSD值为4.6%，表明方法重复性良好。 2.2.9 稳定性试验 取供试品溶液，室温放置，分别于0、2、4、8、12、24 h依法测定，测得峰面积，计算RSD值为3.8%，表明供试品溶液放置24 h内稳定。 2.2.10 含量测定结果 取对照品溶液与供试品溶液，按上述定性及定量方法进行实验，供试品中艾司唑仑质谱图与谱库中的艾司唑仑质谱图一致，结果表明供试品中检出艾司唑仑(总离子流图及质谱图见图1)，每粒样品中艾司唑仑的含量为1.18 mg。 3 讨论 艾司唑仑的分子质量为294.7，结构式如图2所示，本实验选取m/z为259的离子作为前体离子，推测为母核脱去氯原子结构，选取m/z为205的离子作为产物离子，推测为前体离子脱去C2H2N2基团结构。 本实验采用气相色谱-质谱联用法建立了中成药及保健食品中非法添加艾司唑仑的检测方法，本实验以全扫描一级质谱，并结合谱库检索进行定性分析，以二级选择反应检测进行定量分析，充分发挥两种方法的特点，优势互补，实现了筛查、验证与定量三者的统一，操作简便、快速、灵敏准确。 本方法可用于中成药及保健食品中非法添加艾司唑仑成分的筛查验证和定量分析，并可充分利用气相色谱-质谱联用仪强大的数据库检索功能，实现对可疑色谱峰的初步判断，对进一步将本方法推广至其他类似物奠定了理论基础，为相关检验部门筛查镇静安神类中成药及保健食品中非法添加物提供新的检测及验证方法，拓展了思路，为药监部门打假行动提供强有力的技术支持。 [参考文献] [1] 朱正东，肖水源. 苯二氮卓类药物使用现状分析[J]. 中国药物依赖性杂志，2011，20(5):340-345. [2] 谢梅，戴德银，徐力. 镇静催眠药的临床应用进展[J]. 现代医药卫生，2006，22 (20):3133-3134. [3] 刘曙晨. 镇静催眠药的研究进展[J]. 国外医学药学分册，2000，27(7):227-230. [4] 朱小红，马鹏飞，徐翔. 气相色谱-质谱联用定性检测保健食品和中成药中非法添加的镇静催眠类药物[J]. 中国药业，2012，2l(19):36-38. [5] 王蔼英，王哲民，石福祥，等. 安神补心片中掺入化学药品艾司唑仑的检出方法[J]. 中国药事，2008，22(7):590-591. [6] 姚羽，李慧义，张启明，等. 检测镇静安神类中成药中非法添加化学药品的方法研究[J]. 中国药学杂志，2007，42(3):224-227. [7] 陈睿，储忠英，张继春，等. UPLC-MS/MS检测镇静安神类中成药中违禁添加地西泮、氯硝西泮和艾司唑仑[J]. 药学实践杂志，2011，29(6):457-459. [8] 高青，张喆，戴红，等. 薄层色谱法快筛中药制剂和保健食品12种镇静催眠药[J]. 首都医药，2007，10:52 (收稿日期:2013-02-28 本文编辑:袁 成)