粪便隐血试验-检验基础

粪便隐血试验-检验基础 粪便隐血试验是检验技师需要了解的知识，搜索整理如下: 当上消化道少量出血，红细胞被破坏，肉眼不见血色，镜检不能看到红细胞，称为隐血。检测隐血的试验方法称为隐血试验。 一、方法 (一)邻-甲苯胺法[原理]血红蛋白中的亚铁血红素有类似过氧化物酶活性，能催化过氧化氢放出新生态的氧，将邻-甲苯胺氧化为邻-甲偶氮苯，呈现蓝色。 【试剂】 1.邻-甲苯胺冰乙酸溶液:取AR级邻-甲苯腊150ml，加冰乙酸至lOOOml.可借用血糖邻-甲苯胺试剂。 2.1mol/L过氧化氢溶液。 [操作]用竹签挑取少许粪便于白瓷板、玻片或滤纸上，滴加邻-甲苯胺冰乙酸溶液2-3滴，再加过氧化氢溶液2-3滴，混匀后立即观察结果。也可用棉签涂取少许粪便，然后将邻-甲苯胺冰乙酸溶液和过氧化氢溶液直接滴加在棉签上，立即观察结果。 【结果判断】 ++++:加入试剂后立即出现黑蓝色。 +++:加入试剂后立即出现蓝褐色。 ++:加入试剂后初显浅蓝色，逐渐呈明显蓝褐色。 +:加入试剂lOs后，初显浅蓝色渐变为蓝色。 -:加入试剂2分钟后仍不变色。 【注意事项】 1.过氧化氢易分解失效，要经常检查。方法是将其滴加在血膜上，若逐渐产生较多小气泡表示有效，否则要重新配制。 2.试验前3天禁食动物血、肉、肝及铁剂、中药或生食富含叶绿素食物等，以免引起假阳性;粪便脓汁中的中性粒细胞内过氧化物酶也可引起假阳性，可将标本用生理盐水制成糊状煮沸2分钟，冷却后再进行试验。 3.维生素C等还原性物质可干扰过氧化氢对显色物的氧化，引起假阴性。 4.用正常粪便或在其中加入少量溶血液制备阴性或阳性质控标本，每天与待检标本平行测定进行质控。试验用具应加热去除污染的过氧化物酶，避免对试验的影响。 (二)免疫胶体金试纸法 【原理】 在特制的纤维试纸条上预包被金标记抗人血红蛋白抗体(Au-Ab1)，在检测线和控制线上分别固定抗人血红蛋白抗体(Ab2)和针对金标记抗人血虹蛋白抗体的第二抗体(Ab3)。检测时，若存在人血红蛋白(Hb)，由于渗透作用，将在检测线处形成Ab2-HbAb1-Au夹心结构，同时在控制线处形成AiAb1-Au，出现两条色带，呈阳性反应;若不存在Hb，则仅在控制线处出现一条色带。 【操作】 1.取一洁净干燥载玻片，滴加蒸馏水1-2滴。 2.用竹签挑取少许粪便，均匀涂抹于蒸馏水中，使成混合液，并让混合液集中。 3.将粪便隐血检测试带的反应端浸入混合液中，5分钟内观察结果。 【结果判断】 阳性:控制线和反应线均显示色带(即出现两条色带)。阴性:仅在控制线出现一条色带。 无效:不出现色带或控制线不出现色带为无效，应重做试验。 【注意事项】 1.试带应低温保存，不能冰冻，用前先复温。 2.粪便必须多部位多层面采集，尤其对硬质粪便。 3.用蒸馏水涂片。试带浸入时不要超过标记线。 4.若粪便外观呈柏油样而试验为阴性时，可能是由于血红蛋白过多，出现抗原过剩(前带现象)，此时应将粪便混合液稀释后再进行检测。 (三)方法学 1.化学法是粪便隐血试验的传统方法，按其试剂的组成成分及操作方法分为普通化学法和化学试带法(将化学试剂组成成分置于试纸条上)。其原理基本相同，都是血红蛋白中的亚铁血红素具有类似过氧化物酶的作用，催化过氧化物产生新生态的氧，氧化色原显色，如邻。甲苯胶法、邻联甲苯胶法、匹拉米洞法、无色孔雀绿法等。这些方法简单易行，灵敏度也能满足临床要求，但缺乏特异性和准确性，此外化学试剂不稳定，久置后可使反应减弱。外源性血红蛋白、肌红蛋白、植物性过氧化物酶等均可引起假阳性，食入维生素C或其他具有还原作用的药物可引起假阴性，因此，要求素食3天后，再收集标本进行试验。 2.免疫学方法是粪便隐血试验发展普及最快的方法。通常采用单克隆或多克隆抗体，针对粪便中的人血红蛋白或人红细胞基质，用免疫学方法检测粪便中的隐血，如免疫单扩法、酶联免疫吸附法、免疫斑点法、免疫肢体金夹心法等。免疫学方法操作简便、快速，特异性好，灵敏度高，因而不需选择饮食。免疫学粪便隐血试验方法被认为是目前对大肠癌普查最适用的方法。该类方法主要检测下消化道出血，上消化道出血有近50%不能检出，原因是血红蛋白被消化酶降解变性或消化而失去抗原性、患者的血红蛋白抗原与抗体不匹配或者过量出血而使抗原过剩等。因灵敏度很高，某些正常人尤其是服用胃肠剌激药物时也可出现阳性反应。 3.粪便隐血试验无论用什么方法，均要求多部位多层面采集粪便标本，多次试验，以保证检出率，并区分出血是间断性还是持续性。 二、临床意义 1.粪便隐血试验对慢性消化道出血的诊断有重要价值，该试验阳性说明消化道有出血，如消化道溃疡、消化道肿瘤、结肠息肉、钩虫病或药物性胃粘膜损伤等都可出现阳性。 2.粪便隐血试验可鉴别消化道出血病变的性质，如消化道肿瘤时呈持续阳性，而消化道溃疡出血多为间断阳性。 3.粪便隐血试验常作为消化道恶性肿瘤诊断的一个筛选指标，尤其对中老年人早期发现消化道恶性肿瘤有重要价值。