龙血竭散中龙血竭的高效液相色谱特征研究

龙血竭散中龙血竭的高效液相色谱特征研究 龙血竭散中龙血竭的高效液相色谱特征研 究 第26卷第3期 Vo1.26NO.3 重庆工商大学(自然科学版) JChongqingTechnolBusinessUniv.(NatSciEd) 2009年8月 Aug.2009 文章编号:1672—058X(2009)03—0394—05 龙血竭散中龙血竭的高效液相色谱特征研究 蒋蓓,张敏,王鹏娇,高秀丽,史俊鹏. (1.贵阳医学院药学院,贵阳550004;2.重庆科瑞制药有限责任公司研发中心,重庆400060; 3.重庆医学工业研究院有限责任公司,重庆400063) 摘要:用HPLC法对中药制剂龙血竭散中主要成分龙血竭的指纹图谱进行了研究,初步建立了龙血竭 的HPLC指纹图谱,并进行相似度评价,明该简单可行,能够有效地控制龙血竭散中龙血竭的质量. 关键词:龙血竭;指纹图谱;HPLC;相似度 中国分类号:0656文献标志码:A 龙血竭是名贵的中药材,具有活血散瘀,消炎止痛,收敛止血,生肌敛疮,补血益气等功效,其药理作用 为抗细菌,真菌和其他微生物,抗氧化,止血,活血,降血糖等?J.目前,市场上已有多个厂家以龙血竭作为 原料生产出各种剂型的成药,比如:龙血竭散,龙血竭胶囊,龙血竭滴丸等,龙血竭是其中主要的药用活性成 分,因此,对其质量的控制,各个厂家基本上采用的是控制龙血竭的质量,而对龙血 竭质量的控制手段主要 是采用薄层色谱法和高效液相色谱法对已知化合物(如龙血素B,龙血素A和B等)进行含量测定引. 但是由于受天气,气候,产地等各种因素的影响,龙血竭中有效生物活性成分的含量会有较显着的差异,从 而影响其质量.采用HPLC法建立了龙血竭的指纹图谱,通过对十批龙血竭散样品的测定,为龙血竭散中龙 血竭的质量控制提供了依据. 1仪器与试药 美国安捷伦1100高效液相色谱仪,EclipseXDB-C18色谱柱(150mm×4.6mm,5m),Phenomenex—C18 保护柱(3mmx4.6mm,5m).龙血素A对照品(中国药品生物制品检定所,批号111660.200301),龙血素 B对照品(中国药品生物制品检定所,批号111558-200303).乙腈为色谱纯,其余试剂均为分析纯.龙血竭 散样品来源于海南博大制药厂(批号:20050901,20050109,06080401,06080402,06101302,20060110, 06110303,070519,20051204). 2方法与结果 2.1色谱条件 色谱柱:EclipseXDB—C18色谱柱(150mmx4.6mm),Phenomenex-C18保护柱(3mmx4.6mm,51xm); 收稿日期:2009—03一O1;修回日期:2009—06—18. 作者简介:蒋葡(1982一),女,重庆南岸人,硕士研究生,从事药物分析研究. }通讯作者:高秀丽(1965一),女,副教授,硕士,从事药物质量及新药开发研究. 第3期蒋蓓,等:龙血竭散中龙血竭的高效液相色谱特征研究395 检测波长:275nm;体积流量1.0mlMmin;进样体积:10;柱温:40oC;流动相:乙腈一水,梯度洗脱见表1. 表l梯度洗脱程序 2.2对照品溶液的制备 取龙血素B对照品适量,精密称定,加甲醇溶解,制成每lmL含l2.01g的龙血素B对照品溶液.取 龙血素A和B对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1mL含26.06g龙血素A和18.Olg龙血素B的对 照品溶液.色谱图见图1. 3O354045 12 O51O152O2530354045 051O15202530354045 1-龙血素A;2一龙血素B a一龙血素B对照品溶液;b一龙血素A和龙血素B对照品溶液;c一供试品溶液 图1龙血竭对照品及样品高效液相色谱图 2.3供试品溶液的制备 取供试品约0.1g,精密称定,至25mL量瓶中,加甲醇20mL,溶解,定容至刻度,摇匀,滤过即得.色谱 图见图1. 2.4重现性试验 取同一批号的龙血竭散,分别精密称取6份,制备供试品溶液,分别进样,测得结果表明,各共有指纹峰 的相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于3%,表明样品重现性良好. 2.5精密度试验 取重现性试验中同一供试品溶液,连续进样6次,测得结果表明:各共有指纹峰的相对保留时间和相对 峰面积的RSD均小于3%,表明精密度良好. 2.6稳定性试验 取同一批号的龙血竭散,精密称量,制备供试品溶液,分别在O,2,4,8,16,24h进样,测得结果表明,各 共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于3%,表明供试品溶液在 24h内稳定. 2.7指纹图谱的建立 2.7.1指纹图谱的测定 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10L,注入高效液相色谱仪,记录55min的色谱图.色谱图 见图2,图3. 2.7.2共有峰的确定 测定10批龙血竭散中龙血竭的指纹图谱,其中l4个峰为龙血竭的共有指纹峰,样品中11号峰为龙血 素A的色谱峰,样品中12号峰为龙血素B的色谱峰,其响应值较高,色谱峰较窄,峰形好.因此以12号峰 396重庆工商大学(自然科学版)第26卷 0102O30 图2样S1龙血竭散的高效液相色谱图 0l0 图31,10龙血竭散中龙血竭的高效液相色谱图 (龙血素B)作为色谱指纹图谱的参比峰,计算各共有指纹峰相对于参比峰的相对保留时间和相对峰面积的 比值.结果见表2,表3. 表210批龙血竭散的龙血竭指纹图谱中共有峰的相对保留时间 第3期蒋倩.,等:龙血竭散中龙血竭的高效液相色谱特征研究397 2.7.3指纹图谱的相似度计算 指纹图谱相似度可以评定各批次或各生产厂家产品指纹图谱间的整体相似性,定量描述其各自化学组 成的差异与波动.实验采用药典委员会推荐的中药色谱指纹图谱相似度评价系统(A版),对1O批龙血竭 散中龙血竭的相似度进行了评价.将龙血竭指纹图谱导人相似度评价软件,设定匹配摸版,进行谱峰自动 匹配,生成对照指纹图谱,进行相似度评价,结果见图4和表4. 从jjln一,.一榄,.R 图4龙血竭对照指纹图谱 表410批龙血竭中龙血竭指纹图谱相似度结果 398重庆工商大学(自然科学版)第26卷 3讨论 (1)在龙血竭散的质量中,龙血竭含量测定方法的样品前处理的方法较复杂,操作步骤多,不易准 确掌握,对三氯甲烷,乙酸乙酯,甲醇3种不同提取溶剂进行了比较选择,三氯甲烷和乙酸乙酯提取的样品, 色谱峰和峰面积均少于甲醇提取的样品,因此,最终采用甲醇直接溶解的方法提取样品,该方法更简便易行. (2)为考察分析方法的可靠性,以龙血竭散S1(样品1)为代表,对方法的稳定性,精密度,重现性进行了 考察.结果显示,该HPLC法具有较好的稳定性,精密度,重现性.为龙血竭质量控制提供了一定的科学依 据,也为龙血竭质量标准的提升进行了有益的探索. (3)从实验中相同生产厂家的不同批次龙血竭散指纹图谱中可以看出,10批龙血竭散指纹图谱中主要 色谱峰的整体图貌基本一致.同时相似度评价结果表明:10批样品基本相似,个别批次仍然存在一定的差 异(如样品8).因此,为保证龙血竭中药原料药质量的稳定性和一致性,应固定药材原料的来源,以保证龙 血竭提取工艺的稳定. 参考文献: [1]陈定芳,宋启示.血竭资源开发的研究进展[J].广州中医药大学,2004,21(6):489—492 [2]蓝鸣生.龙血竭研究进展[J].医学文选,2005,24(6):1053—1055 [3]王玉华,穆生媛,王伟,等.薄层扫描法测定不同来源血竭中血竭素含量[J].时珍国医国药,2000,11(12):1073—1074 [4]李忠琼,向东.HPLC测定龙血竭中龙血素A和龙血素B的含量[J].华西药学杂 志,2005,20(4):348.349 [5]胡迎庆,张静泽,刘岱琳,等.两种"柬龙牌"血竭的鉴别[J].中草 药,2002,33(4):358-360 [6]孙胜利,宓鹤鸣,娄子洋,等.影响国产血竭中龙血素B含量测定的干扰成分的分 离鉴定[J].解放军药学,2002,18 (2):74_76 [7]胡迎庆,宗宁,刘岱琳.反相高效液相色谱法测定龙血竭中紫檀的含量[J].药物分 析杂志,2002,22(6),428-430 RP—HPLCCharacteristicsofDragon'SBloodinDragon'SBloodPower JIANGQian,ZHANGMin,WANGPeng-jiao, GAOXiu—li,SHIJun.peng (SchoolofPharmacy,GuiyangMedicalCollege,Guiyang550004,China; 2.ChongqingKeruiPharmaceuticalCompany,Chongqing400060; 3.ChongqingMedicalandPharmaceuticalResearchAcademy,Chongqing400063,China) Abstract:Tostudythefingerprintofdragon'Sbloodbyhighperformanceliquidchromatography,HPLCfinger- printofdragon'sbloodwasestablishedandthesimilarityofthefingerprintwascompared,whichdemonstratesthat themethodissimple,accurate,andcanbeusedtocontrolthequalityofdragon'Sbloodindragon'Sbloodpower. Keywords:dragon'Sblood;fingerprint;HPLC;similarity 责任编辑:田静